CN119367254B 一种富含莫诺苷的山茱萸果提取物及其制备方法、应用 （懿奈(上海)生物科技有限公司）

(19)国家知识产权局(65)同一申请的已公布的文献号(73)专利权人懿奈(上海)生物科技有限公司地址200021上海市静安区南京西路818号808室专利权人德肤科(上海)生物科技有限公司(72)发明人钟烨王勇恒胡璠李钦源叶睿杜乐(74)专利代理机构天津知川知识产权代理事务所(特殊普通合伙)12249专利代理师陈丽萍A61K8/9789(2017.01)A61K8/60(2006.01)A61K36/40(2006.01)A61K31/7048(2006.01)andpurificationofiridoidglycosidesChromatogrRelatTechnol.2014,第36卷(第8期),983-999.andpurificationofiridoidglycosidesChromatogrRelatTechnol.2014,第36卷(第8期),983-999.审查员李小晶一种富含莫诺苷的山茱萸果提取物及其制本发明提供一种富含莫诺苷的山茱萸果提取物及其制备方法、应用，涉及植物天然产物技术领域。所述富含莫诺苷的山茱萸果提取物包括为10%~12%。本发明富含莫诺苷的山茱萸果提取物具有优异的抗炎作用，并能促进皮肤紧致度、减少皱纹，可广泛用于化妆品及护肤品制备。本发明富含莫诺苷的山茱萸果提取物的制备方法通过乙醇萃取与酶解处理高效提取山茱萸果中6821.一种富含莫诺苷的山茱萸果提取物，其特征在于，所述富含莫诺苷的山茱萸果提取物包括莫诺苷、马钱子苷、獐牙菜苷，其中莫诺苷的含量为10%~12%,马钱子苷的含量为10%~30%,獐牙菜苷的含量为2%~6%;所述富含莫诺苷的山茱萸果提取物采用如下方法制备：(1)将乙醇溶液调节pH值至4~5的范围后加入山茱萸果，混合均匀得到待提取混合物；(2)向所述待提取混合物中加入包含果胶酶和纤维素酶的复合酶，进行梯度温度酶解；酶解完成后经灭酶、分离及浓缩得到粗品提取物；所述梯度温度酶解包括在45~55℃下保持0.5~1.5h,随后在65~75℃保持0.5~1.5h;所述复合酶中果胶酶与纤维素酶的质量比为1:(1~3);所述复合酶的添加量为所述山茱萸果质量的0.3%~0.5%;(3)所述粗品提取物经柱层析得到所述富含莫诺苷的山茱萸果提取物；所述步骤(3)采用聚酰胺层析柱层析纯化，上样流速为0.5~10倍柱体积/小时，0.5~10倍柱体积纯化水洗脱，洗脱流速为0.5~10倍柱体积/小时，于上样开始收集纯化水洗脱液并浓缩，得到所述富含莫诺苷的山茱萸果提取物。2.根据权利要求1所述富含莫诺苷的山茱萸果提取物，其特征在于，所述富含莫诺苷的山茱萸果提取物的pH范围为2.5~6.5;所述富含莫诺苷的山茱萸果提取物的相对密度为3.根据权利要求1所述富含莫诺苷的山茱萸果提取物，其特征在于，所述乙醇溶液的浓度为60%~80%;和/或，所述乙醇溶液与山茱萸果的料液比为1:(8~15)。4.根据权利要求1所述富含莫诺苷的山茱萸果提取物，其特征在于，所述灭酶操作的温度为85~95℃,灭酶时间为至少20min;和/或，所述步骤(2)中的分离操作在40~50℃下进行；和/或，所述浓缩操作为浓缩器浓缩或旋蒸浓缩。5.一种权利要求1~4任一项所述富含莫诺苷的山茱萸果提取物在制备抗衰老的化妆品中的应用。3一种富含莫诺苷的山茱萸果提取物及其制备方法、应用技术领域[0001]本发明涉及植物天然产物技术领域，具体涉及一种富含莫诺苷的山茱萸果提取物背景技术[0002]环烯醚萜类化合物是一类具有双重生物活性的有机物，既对某些植物物种起防御作用，如地黄属植物中环烯醚萜苷类对尖镰孢菌的防御反应，也对动物产生多种药理作用，等生物活性，是许多中药的有效成分。由于环烯醚萜类化合物结构的特殊性，无法通过化学合成大批量生产，因此从植物中提取是获取这类化合物的主要方式。[0003]山茱萸(CornusofficinalisSieb.etZucc.,CO)是山茱萸科(Cornaceae.)山西、四川等地。据中国药典记载秋末初果皮变红时采收果实，用文火烘或置沸水中略烫后，及时除去果核，干燥即可；山茱萸中含有多种环烯醚萜类成分(如莫诺苷、马钱苷等)且含量较为丰富。[0004]莫诺苷是一种环烯醚萜类化合物，在接骨木属植物、白花败酱属植物、山茱萸果属植物中都有分布。关于莫诺苷的研究涉及多方面技术领域：有研究发现莫诺苷可减少神经细胞的氧化应激、减少神经细胞的凋亡，同时也具有促进神经细胞增殖、迁移的作用，更深入的研究发现其具有改善神经疼痛的效果。作为一种潜在的药物分子，莫诺苷在肝脏、心脏疾病治疗过程中通过其减少炎症因子释放而发挥抗炎效果；同时在糖尿病的治疗方面，具有减少糖基化反应，减少内皮细胞头痛行的效果，也具有通过调节糖的摄入来起到降血糖的效果；在与骨相关的疾病治疗过程中，促进骨髓细胞的增殖来抑制骨细胞的凋亡。[0005]在皮肤科学领域/化妆品领域，环烯醚萜类化合物成分因其良好的水溶性，显著的抗炎作用被认为是一类具有综合优势的舒缓成分。莫诺苷作为一种比较具有特色的环烯醚萜类化合物，目前在皮肤科学和化妆品领域研究结果还是集中在抗炎、促进细胞增殖等方面，而在皮肤科学层面的研究仅涉及到了头皮防脱方面，仍具有广阔的开发应用前景。发明内容[0006]针对现有技术中的不足，本发明公开一种富含莫诺苷的山茱萸果提取物及其制备方法、应用，本发明富含莫诺苷的山茱萸果提取物中莫诺苷的含量达到了10%以上，体现出显著的增加皮肤紧致度、减少皱纹的效果。[0007]为了实现以上技术目的，一方面，本发明提出一种富含莫诺苷的山茱萸果提取物，所述富含莫诺苷的山茱萸果提取物包括莫诺苷、马钱子苷、獐牙菜苷，其中莫诺苷的含量为4[0008]本发明研发团队通过大量探索实验及分析发现，上述技术方案富含莫诺苷的山茱萸果提取物可通过参与到胶原的降解过程、基质金属蛋白激活过程、以及视黄酸代谢以及炎症因子相关通路以发挥紧致抗皱的功效，可将富含莫诺苷的上述山茱萸果提取物应用于抗炎和/或抗衰老的化妆品或护肤品中，这是现有技术中未公开的。[0009]进一步地，所述富含莫诺苷的山茱萸果提取物中马钱子苷的含量为10%~30%、獐牙菜苷的含量为2%~6%,本发明实施例示出了所述富含莫诺苷的山茱萸果提取物的抗皱功效。[0010]进一步地，所述富含莫诺苷的山茱萸果提取物的pH范围为2.5~6.5;[0011]更进一步地，所述富含莫诺苷的山茱萸果提取物的相对密度为1.025~1.125。[0012]另一方面，本发明提出了一种富含莫诺苷的山茱萸果提取物的制备方法，该方法[0013](1)将乙醇溶液调节pH值至4~5的范围后加入山茱萸果，混合均匀得到待提取混合[0014](2)向所述待提取混合物中加入包含果胶酶和纤维素酶的复合酶，进行梯度温度酶解；酶解完成后经灭酶、分离及浓缩得到粗品提取物；所述梯度温度酶解包括在45~55℃下保持0.5~1.5h,随后在65~75℃保持0.5~1.5h;[0015](3)所述粗品提取物经柱层析得到所述富含莫诺苷的山茱萸果提取物。[0016]上述技术方案通过乙醇的萃取分离、结合特定的酶解处理以分解细胞壁，有利于提高山茱萸果活性组分的提取率；此外，上述技术方案通过调节体系的pH值并采用梯度温度进行酶解，可获得莫诺苷含量更高的山茱萸果粗品提取物，进一步通过柱层析提纯使得本发明技术方案可获得莫诺苷含量在10%以上的山茱萸果提取物。[0017]在本发明的进一步示例中，所述乙醇溶液的浓度可选为60%~80%,可选60%、65%、70%、75%、80%,但不限于所列举的范围，上述数值范围内其他未列举的数值同样适用于本发明，适宜的乙醇浓度有助于打破山茱萸果的细胞壁，使其蕴含的活性组分更容易溶出。在本发明的一些可选示例中，所述乙醇溶液的浓度可选为60%。需注意，本发明所述乙醇溶液的浓度为体积分数浓度。[0018]在本发明的进一步示例中，所述乙醇与山茱萸果的料液比可选为1:(8~15),比如未列举的数值同样适用于本发明，通过乙醇与山茱萸果用量的优化可提高山茱萸果中活性组分的提取效率，同时可降低乙醇的投入。在本发明的一些可选示例中，所述乙醇与山茱萸果的料液比可选为1:10。需注意，本发明所述料液比为质量体积比；本发明所用乙醇溶液可在后续分离操作中回收并循环套用。[0019]在本发明的进一步示例中，所述复合酶的添加量可选为所述山茱萸果质量的0.3%未列举的数值同样适用于本发明，添加合适用量的复合酶可有效地分解细胞壁，提高萃取[0020]在本发明的进一步示例中，所述复合酶中果胶酶与纤维素酶的质量比可选为1:(11.28、1:3,但不限于所列举的范围，上述数值范围内其他未列举的数值同样适用于本发明；基于大量实验数据发现，特定配比的复合酶可在山茱萸果提取中发挥更佳的酶解效果。在5本发明的可选示例中，所述复合酶中果胶酶与纤维素酶的质量比为1:1。[0021]在本发明的进一步示例中，所述灭酶操作的温度可选为85~95℃,可选85℃、86℃、围内其他未列举的数值同样适用于本发明；灭酶时间可选为至少20min,可选20min、25min、列举的数值同样适用于本发明，本发明中通过提升体系温度进行灭酶操作，无需额外添加化学试剂即可快速高效地终止酶活性，同时也可防止提取物中的有效成分被酶进一步分[0022]在本发明的进一步示例中，所述步骤(2)中的分离操作可选在40~50℃下进行，可未列举的数值同样适用于本发明，在实际工艺过程中，可选在灭酶操作完成后将体系的温度降低至40~50℃以保持提取物中组分的活性，可选通过离心操作收集滤液，并弃除滤渣。[0023]在本发明的进一步示例中，所述浓缩操作可选为浓缩器浓缩或旋蒸浓缩，具体操作过程中，将分离操作得到的滤液加入浓缩器中进行浓缩得到上清液，所述上清液即为粗品提取物。本领域内技术人员可选将分离操作得到的滤液分批次进行浓缩，比如分为3~5次进行浓缩以提高浓缩操作的效率，在实际操作中可根据需要选择分批浓缩的次数。[0024]在本发明的进一步示例中，所述步骤(3)采用聚酰胺层析柱层析纯化，上样流速为0.5-10倍柱体积/小时，0.5-10倍柱体积纯化水洗脱，洗脱流速为0.5-10倍柱体积/小时，于上样开始收集纯化水洗脱液并浓缩，得到所述富含莫诺苷的山茱萸果提取物。[0025]需注意，本发明还包括对山茱萸果药材的初步处理。具体地，可选将山茱萸果药材[0026]本发明实施例示出采用上述制备富含莫诺苷的山茱萸果提取物的制备方法所制得山茱萸果提取物中莫诺苷的含量在10%以上。本发明进一步的探索实验验证了其优异的[0027]另一方面，本发明提出了上述富含莫诺苷的山茱萸果提取物以及采用上述制备方法制得的富含莫诺苷的山茱萸果提取物在制备化妆品或护肤品中的应用。[0028]进一步地，所述化妆品或护肤品为抗炎和/或抗衰老的化妆品或护肤品。[0029]更进一步地，所述化妆品或护肤品为预防或改善皱纹的化妆品或护肤品。[0030]与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明富含莫诺苷的山茱萸果提取物相比纯品莫诺苷具有更佳抗炎作用，且能够促进提升皮肤紧致度、减少皱纹，可广泛用于化妆品及护肤品制备。本发明富含莫诺苷的山茱萸果提取物的制备方法通过乙醇萃取与酶解处理高效提取山茱萸果中的活性组分、结合柱层析得到莫诺苷富集的山茱萸果提取物；本发明制备方法流程简单，可操作性强。附图说明[0031]构成本申请的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：[0032]图1示出本发明实施例1所制得富含莫诺苷的山茱萸果提取物的210nm紫外吸收6[0033]图2示出本发明实施例1所制得富含莫诺苷的山茱萸果提取物的254nm紫外吸收[0034]图3示出本发明实施例1所制得富含莫诺苷的山茱萸果提取物紧致抗皱靶点交集[0035]图4示出本发明实施例1所制得富含莫诺苷的山茱萸果提取物紧致抗皱靶点蛋白metalloproteinase-1,中文全称为基质金属蛋白酶1;TP53的全称为Cellulartumor蛋白酶13;SIRT1的全称为NAD-dependentproteindeacetylasesirtuin-1,中文全称为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸依赖性蛋白去乙酰化酶sirtuin-1;RARB的全称为RetinoicacidC;P2RX7的全称为P2Xpurinoceptor7,中文全称为P2X嘌呤受体7;GLB1的全称为Beta-dehydrogenase,中文全称为甘油醛-3-磷酸脱氢酶；PTGS2的全称为ProstaglandinG/Hsynthase2,中文全称为前列腺素G/H合成酶2;PTPN2的全称为Tyrosine-protein称为Retinoicacidreceptorgamma,中文全称为视黄酸受体G;HSD11B2的全称为11-为HypoxanthinePhosphoribosyltrans[0037]图6示出本发明实施例1所制得富含莫诺苷的山茱萸果提取物Reactome通路富集[0038]图7示出本发明实施例1所制得富含莫诺苷的山茱萸果提取物与莫诺苷抗炎功效[0039]图8示出本发明实施例1所制得富含莫诺苷的山茱萸果提取物与莫诺苷对弹性蛋7茱萸提取物-0.5%及同浓度莫诺苷纯品进行比较(“*”代表p<0.05,“**”代表p<0.01;“***”代表p<0.001);误差棒代表3个重复样品平均值±均方差；[0040]图9示出本发明实施例1所制得富含莫诺苷的山茱萸果提取物与莫诺苷对视黄酸受体RARB表达的对比图；注：空心圆代表样品重复次数(三个空心圆即代表该样品在对应实验中重复了3次),“>*”和“#”代表显著性分析，“”代表和空白对照组和实施例1-山茱萸提取物-0.5%及同浓度莫诺苷纯品进行比较(“”代表p<0.05,***”代表p<0.001);误差线误差棒代表3个重复样品平均值±均方差；[0041]图10示出本发明实施例1所制得富含莫诺苷的山茱萸果提取物对TGF-β的促进作用；注：空心圆代表样品重复次数(三个空心圆即代表该样品在对应实验中重复了3次),“*”和“#”代表显著性分析，“”代表和空白对照组和不同浓度实施例1-山茱萸提取物误差棒代表3个重复样品平均值±均方差；[0042]图11示出本发明实施例1所制得富含莫诺苷的山茱萸果提取物对III型胶原的促进作用；注：空心圆代表样品重复次数(三个空心圆即代表该样品在对应实验中重复了3差线误差棒代表3个重复样品平均值±均方差。具体实施方式[0043]为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述，给出了本发明的较佳实施例。但应当理解为这些实施例仅仅是用于更详细说明之用，而不应理解为用以任何形式限制本发明，即并不意于限制本发明的保护范围。[0044]除有定义外，以下实施例中所用的技术术语具有与本发明创造所属领域技术人员普遍理解的相同含义。以下实施例中所用的试验试剂，如无特殊说明，均为常规生化试剂；实施例[0045]一种富含莫诺苷的山茱萸果提取物的制备方法，具体包括以下步骤：[0046](1)称取山茱萸果药材(产地：陕西秦岭),液比称取1Kg60%乙醇，调节pH至5后投入提取罐中；再加入山茱萸果粉末，搅拌混合均匀得到待提取混合物。[0047](2)向待提取混合物中加入山茱萸果干重0.5%的果胶酶和纤维素酶，其中果胶酶8与纤维素酶的质量比为1:1;先恒温50℃循环提取1h,再升温至70℃提取1h;随后升温至90℃灭酶30min得到粗提液；再降温至50℃,将粗提液放出至储液桶中；将粗提液进行离心，收集滤液并弃除滤渣；将滤液分3次加入浓缩器中浓缩，随后离心得到粗实施例中循环提取是指通过搅拌、摇晃等操作促进物料与溶剂充分接触的操作。[0048](3)将粗品提取物用纯水稀释，加入装有特制的聚酰胺填料层析柱进行层析，再用纯水洗脱；将收集的洗脱液加入浓缩器中浓缩3次，随后离心得到富含莫诺苷的山茱萸果提取物。所述富含莫诺苷的山茱萸果提取物的pH值为2.5~6.5,相对密度为1.025~1.125。[0050]本实施例所制得富含莫诺苷的山茱萸果提取物可作为化妆品级别原料，但在化妆萸果提取物核心组分之一的莫诺苷进行了标定，作为主要的质量参考物质。基于此，本实施例检测了所制得山茱萸果提取物中的莫诺苷含量；具体测定方法如下：180μL50%甲醇-水稀释10倍。(2)取10μL稀释后的倍。(3)用注射器吸取200μL的上清液，加入内标(L-2-氯苯丙氨酸),涡旋震荡10s,转移到[0052]2、本实验采用UPLC-ESI-MS/MS分析方法，对目标代谢物进行定性定量检测，具体分析条件和分析方法如下：(1)色谱方法包括进样量：5μL;流动相：A(0.1%甲酸-水溶液),B(乙腈);流速：0.35mL/min;(2)梯度洗脱方法(GradientElutionProcedures):0minA/B(95:5,V/V),1.0minA/B(95:5,V/V),3minA/B(10:90,V/V),4.5min4.51minA/B(95:5,V/V),5minA/B(95:5,V/V);(3)质谱方法包括气帘气：55(psi);碰撞5500V;负离子喷雾电压：-4500V;离子源温度：500℃;柱温：40℃;喷雾气(Gas1):50(psi);[0053]经测定，实施例1所制得所述富含莫诺苷的山茱萸果提取物中样品1-1的莫诺苷的含量为10%,样品1-2的莫诺苷质量含量为10.9%,样品1-3的莫诺苷含量为11%。[0054]进一步地，本实施例测试了实施例1所制备富含莫诺苷的山茱萸果提取物的功效。[0056]借助高分辨率液质联用质谱仪对实施例1的样品1-1所制备富含莫诺苷的山茱萸果提取物进行全成分分析，以识别出莫诺苷以外的其他成分。具体分析步骤如下：g/mL),涡旋震荡1min;冰水浴超声提取20min;离心10min(14000rpm,4℃);取200μL上清液装入带内衬管的LC-MS进样小瓶中进行分析。[0059]1.2液相色谱-质谱条件[0060]本次实验的分析仪器为ACQUITYUPLCI-ClassHF超高效液相串联QE高分辨质谱仪组成的液质联用系统。9时间0525480055[0065]质谱条件：[0066]离子源：HESI;样品质谱信号采集分别采用正负离子扫描模式。数据采集模式：表2参数负离子喷雾电压(伏)毛细管温度(℃)辅助气体加热器温度(℃)鞘气流速(任意单位)辅助气体流速(任意单位)8质量范围(质荷比)全扫描模式下最高分辨率母离子碎裂后产生的子离子分析时的分辨率离子碎裂的标准化碰撞能量[0068]本实施例中对实施例1所制得富含莫诺苷的山茱萸果提取物进行全成分分析鉴定，包括：1)通过分析测定210nm(结果如图1)和254nm(结果如山茱萸果提取物含有皂苷类成分以及苯环、双键等基本结构；2)基于高精准的质谱分析和自建标准品化合物数据库等技术平台，对山茱萸果提取物的全成分进行定性分析，以峰面积为半定量依据(相对含量依据),得到核心组成马钱子苷，獐牙菜苷的相对含量。[0071]将上述全成分的所得化合物以mol2格式收集药物活性成分的化学结构，并借助http://www.swisstargetprediction.ch)数据库并将属性设置为“Homosapiens”以得到山茱萸果提取物全成分潜在靶点的预测结果，然后对所获得的靶点数据进行除重汇总。[0072]2.2抗皱靶点的挖掘与核心靶点的筛选[0073]将“1”项中的数据和内部梳理皮肤抗皱相关靶点上传至互联网在线Venny2.1.0工具平台(https://b.csic.es/tools/ven-ny/),获取共同靶点并绘制Venn图(如图3)。[0074]2.3蛋白互作网络图(PPI)构建[0075]STRING数据库()是一个在线检索已知的蛋白互作关系的数据库，将山茱萸果提取物交集到的靶点数据导入其中，设定生物种类为“Homosapiens”且交互分数>0.9并隐藏游离节点，以构建出蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络并下载其tsv格式文件(结果如图4)。[0077]将交集筛选得到的靶点输入到Metascape数据库中进行GO和KEGG功能富集分析，[0078]结合图3、图4,基于网络药理学工具以及内部自建皮肤靶点数据库，最终在山茱萸的靶点等。从靶点预测分析上可以看出本发明富含莫诺苷的山茱萸果提取物可表现出潜在[0079]随后对筛选出的21个靶点进行GO和Reactome功能富集分析以识别靶点间参与调节的过程和关联的相关通路。由图5可知，GO富集分析反映本发明富含莫诺苷的山茱萸果提取物会参与到视黄酸的代谢、细胞外基质的降解、胶原的合成等生物过程；参与包含胶原在内的细胞外基质的合成；参与基质金属蛋白酶活性、核转录受体活性等分子功能。如图6所示，紧致抗皱靶点通路富集分析结果可知，本发明富含莫诺苷的山茱萸果提取物会通过参与到胶原的降解过程、基质金属蛋白激活过程、以及视黄酸代谢以及炎症因子相关通路来发挥紧致抗皱的功效。[0081]具体地，取指数生长期的人原代成纤维细胞制成单细胞悬液，以1.0～1.2×105cells/mL的密度将细胞接种于6孔板上，培养终体积为2mL,用含10%胎牛血清的培养基37℃培养至细胞贴壁。吸弃上清，每孔更换为新鲜制备的不同浓度的受试物(无血清)。收集细[0082]3.1实施例1的样品1-1富含莫诺苷的山茱萸果提取物与莫诺苷的功效对比[0083]1)本实施例中对比了实施例1富含莫诺苷的山茱萸果提取物与同浓度莫诺苷的抗11炎功效，结果如图7所示。由图7可证实，本发明富含莫诺苷的山茱萸果提取物在抗炎功效(具体表现为对炎症因子IL-6的抑制作用)意外地优于纯品莫诺苷，其抑制率为56.33%,而纯品莫诺苷的抑制率为51.25%。[0084]需注意，本实施例中同浓度是指实施例1所制得富含莫诺苷的山茱萸果提取物中的莫诺苷浓度与莫诺苷纯品样品的浓度一致。该现象说明采用本发明提取物制备工艺，所制得山茱萸果提取物在保留了莫诺苷抗炎功效的前提下，其他成分协同提升莫诺苷的抗炎[0085]2)本实施例中对比了实施例1的样品1-1富含莫诺苷的山茱萸果提取物与莫诺苷[0086]通过前期探索实验发现，莫诺苷在抗衰方向的功效是有局限的，图8和图9也验证了该发现：莫诺苷在成纤维细胞中没有展现对弹性蛋白Elastin及视黄酸受体RARB的改善作用，但是实施例1样品1-1所制得富含莫诺苷的山茱萸果提取物展现出比较好的改善作用，其改善率分别为106.8%(Elastin)和552.2%(RARB)。因此，本发明实施例1的样品1-1富含莫诺苷的山茱萸果提取物不仅富集了莫诺苷含量、提升了莫诺苷抗炎功效，同时也实现了莫诺苷本身不具备的抗衰功效，相比单纯的莫诺苷具有更广阔的使用价值。[0087]3.2本发明富含莫诺苷的山茱萸果提取物对ECM的改善作用[0088]TGF-β(转化生长因子-β)是皮肤中胶原蛋白合成的关键调节因子之一，它通过经型胶原蛋白是皮肤结构的重要组成部分，能够增加皮肤的弹性和紧致度，从而减少皱纹的[0089]TGF-β作为皮肤抗衰老护肤的重要目标分子，通过促进胶原生成、抑制其降解、调控细胞增殖与分化来改善皮肤的光滑度和弹性。本实施例发现，本发明富含莫诺苷的山茱萸果提取物对TGF-β具有很好的促进作用(如图10所示);同时，对TGF-β调控的下游蛋白的表达测试结果发现，富含莫诺苷的山茱萸果提取物可显著促进III型胶原(COL-III)的表达(如图11所示)。[0090]以上实施例证实了本发明富含莫诺苷的山茱萸果提取物可通过调控TGF-β信号通路实现对ECM结构的改善和重塑，促进皮肤紧致度、减少皱纹的发生，可广泛用于化妆品或护肤品制备中。[0091]此外，本发明还通过设置对比例1,探索了富含莫诺苷的山茱萸果提取物的制备方法的技术优势。[0093]对比例1.1[0094]一种山茱萸果提取物的制备方法，本对比例制备方法所用原料及参数控制与实施例1相同，不同之处在于不包括步骤(3)。按照此工艺条件平行制备3个样品，依次命名为样[0095]对比例1.2[0096]一种山茱萸果提取物的制备方法，本对比例制备方法所用原料及参数控制与实施例1相同，不同之处在于步骤(2)未加入所述复合酶。按照此工艺条件平行制备3个样品，依[0097]对比例1.3[0098]一种山茱萸果提取物的制备方法，本对比例制备方法所用原料及参数控制与实施例1相同，不同之处在于步骤(1)采用等体积的纯水代替乙醇溶液。按照此工艺条件平行制[0099]对比例1.4[0100]一种山茱萸果提取物的制备方法，具体包括以下步骤：称取山茱萸果药材(产地：罐中，加入山茱萸果粉末，搅拌混合均匀；随后恒温50℃循环提取1h,再升温至70℃提取1h。降温至40-50℃,将粗提液放出至储液桶中。将粗提液进行离心，收集滤液得到山茱萸果