DB43∕T 3148-2024 家禽精液菌落总数控制技术规范

ICS65.020.30

CCSB43

43

湖南省地方标准

DB43/T3148—2024

家禽精液菌落总数控制技术规范

Technicalspecificationforcontroloftotalbacteriacountinpoultrysemen

2024-12-31发布2025-03-31实施

湖南省市场监督管理局发布

DB43/T3148—2024

目次

前言.................................................................................II

1范围...............................................................................1

2规范性引用文件.....................................................................1

3术语和定义.........................................................................1

4饲养管理...........................................................................1

5精液收集...........................................................................2

6精液外观...........................................................................2

7含抗生素稀释液.....................................................................2

8精液菌落总数检测...................................................................3

附录A（规范性）平板计数琼脂（PCA）培养基............................................5

附录B（资料性）精液稀释方法示例.....................................................6

I

DB43/T3148—2024

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由湖南省农业农村厅提出。

本文件由湖南省农业标准化技术委员会归口。

本文件起草单位：湖南省畜牧兽医研究所、四川农业大学、湖南省兽药饲料监察所、长沙市动植物

疫病预防控制中心、陕西省畜牧技术推广总站、浏阳市农业发展事务中心、湖南光大牧业科技有限公司。

本文件主要起草人：刘伯承、江为民、郑姣妹、周望平、隆雪明、李安定、刘学通、朱芳贤、胡继

伟、史芳、燕海峰、伍国强、朱立军、邓萍、李闯、陈一峰、石伍平、王慧、唐爱明、刘启红、杨建华。

II

DB43/T3148—2024

家禽精液菌落总数控制技术规范

1范围

本文件规定了家禽饲养管理、精液收集、精液外观、含抗生素稀释液、精液菌落总数检测的技术要

求。

本文件适用于家禽精液菌落总数的控制与检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB4789.2—2022食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定

GB5749生活饮用水卫生标准

GB13078饲料卫生标准

GB/T25886养鸡场带鸡消毒技术要求

NY/T388畜禽场环境质量标准

NY/T471绿色食品饲料及饲料添加剂使用准则

DB43/T2412鸡冷冻精液制作技术规程

DB43/T2708鸭冷冻精液制作技术规程

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4饲养管理

饲料

4.1.1饲料卫生应符合GB13078的规定。

4.1.2饲料的使用应符合NY/T471的规定。

4.1.3自配混合日粮应现配现用，确保料槽无结块饲料，料槽应保持洁净。

饮用水

水质应符合GB5749的规定，检查水槽（箱）水质并做好消毒。

环境卫生

舍内环境卫生指标应符合NY/T388的规定。检测畜禽舍环境卫生并做好消毒和卫生管理，保持通

风。

种公禽护理

1

DB43/T3148—2024

4.4.1剪毛

从采精训练期开始，应检查和修剪种公禽泄殖腔周围5cm～7cm区域的羽毛。具体按DB43/T2708

执行。

4.4.2消毒

对种公禽肛门及附近的绒羽进行清洗和消毒，先用生理盐水冲洗肛门周围及绒羽上的粪便并擦干，

选用刺激性小的消毒药（如聚维酮碘）进行擦拭消毒。

种公禽体表消毒按GB/T25886规定执行。

5精液收集

准备

采精杯、离心管（5mL、10mL）、样品支架清洗洁净后应高压蒸汽灭菌；工作服、冷藏泡沫箱应

用紫外线消毒。鸡精液稀释液准备按DB43/T2412执行，鸭、鹅精液稀释液准备按DB43/T2708执行。

操作要求

采精杯或离心管收集精液前后均需密封状态；即时收集合格精液。

6精液外观

肉眼观察精液呈乳白色，无絮状、血、白色尿酸盐。显微镜下（100×）检测无黑点状杂质。

7含抗生素稀释液

含抗生素母液制备

以灭菌纯净水为溶剂，按照表1配制10倍浓度抗生素母液，分装至10mL离心管中，-20℃条件

下储存，使用时室温解冻。

表1含抗生素10倍母液配制表

灭菌纯净水青霉素钾硫酸链霉素

mLUU

100.01.0×1061.0×106

含抗生素精液稀释液制备

将含抗生素母液添加至精液稀释液中，添加比例见表2。现配现用或-20℃条件下储存备用，使用

时室温解冻。

2

DB43/T3148—2024

表2含抗生素精液稀释液配制比例

品种鸡鸭鹅

精液稀释液:含抗生素母液9:119:14:1

含抗生素精液稀释液的应用

7.3.1人工输精

含抗生素精液稀释液使用时应与精液等温，按照精液与稀释液1:1或1:2稀释后输精。

7.3.2精液冷冻保存

按照表2批量配制含抗生素精液稀释液；使用含抗生素稀释液按照DB43/T2412配制鸡冷冻保护

液，按照DB43/T2708配制鸭、鹅冷冻保护液。-20℃条件下储存，使用时室温解冻。

8精液菌落总数检测

仪器设备

高压灭菌锅，超净工作台，生化恒温培养箱，恒温水浴锅，电子天平。

试剂与材料

移液器及吸头（规格含100μL、200μL、1000μL），离心管，剪刀，酒精灯，75%乙醇，灭菌纯

净水，一次性无菌培养皿（直径90mm），锥形瓶，菌落计数器，平板计数琼脂（PCA）培养基按照附录

A配制或使用商品PCA培养基。

试验步骤

8.3.1灭菌

将PCA培养基、吸头、蒸馏水、离心管、剪刀进行高压蒸汽灭菌。所需物品除待测样品外操作前放

入超净工作台，紫外线消毒30min。

8.3.2样品

无菌操作下，将含抗生素稀释液稀释后的鲜精转至另一离心管中；冻精剪去细管两端，收集至离心

管中备用。

8.3.3梯度稀释

采用10倍稀释法，取3个5mL离心管，每管加入900μL灭菌纯净水。用移液器吸取精液，充分

吹打均匀后吸取100μL加入第一个离心管，充分吹打均匀。从第一管中取100μL加入至第二管，注

意吸头不应进入液面，更换吸头后吹打均匀，依次操作至第三管。示例见附录B。

8.3.4平板制作

3

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取100μL稀释后的样品分四个位点滴入空白平板上，加入12mL～15mLPCA培养基，培养基液

体温度注意保持在48℃±2℃，每个稀释度制作两个平板，同时取100μL灭菌纯净水制做两个平板

作为阴性对照，并在每个平板背面做好标记。

8.3.5培养

待琼脂凝固后，将平板倒置，37℃±1℃恒温培养48h±2h。

菌落计数

按GB4789.2—2022中6.3规定执行。

菌落取值与计算

按GB4789.2—2022中7.1和7.2规定执行。

菌落总数

精液菌落总数指标见表3。

表3精液菌落总数指标

鸡鸭鹅

项目

CFU/mLCFU/mLCFU/mL

鲜精≤1500≤1500≤1500

冻精≤1000≤800≤800

4

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A

A

附录A

（规范性）

平板计数琼脂（PCA）培养基

A.1平板计数琼脂培养基成分

平板计数琼脂培养基成分见表A.1。

表A.1平板计数琼脂培养基成分

成分剂量

胰蛋白胨5.0g

酵母浸膏2.5g

葡萄糖1.0g

琼脂