T-CITS 526-2025 液相色谱－质谱联用法检测人体血液或尿液中氨基酸通 用要求

液相色谱一质谱联用法检测人体血液或尿液中氨基酸通用要求chromatography—massspectr中国检验检测学会发布1前言 II 12规范性引用文件 13术语和定义 14基本要求 1 14.2实验室环境 24.3仪器设备 2 24.5方法学验证 25分析方法 25.1样品采集及处理 25.2色谱分离条件 3 35.4数据处理 3 36.1室内质控 36.2室间质评 47结果报告 4参考文献 52本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由上海交通大学医学院附属瑞金医院、国军标(北京)标准化技术研究院提出。本文件由中国检验检测学会归口。本文件起草单位：上海交通大学医学院附属瑞金医院、国军标(北京)标准化技术研究院、南通大学附属医院、哈尔滨医科大学附属第一医院、哈尔滨医科大学附属第六医院、上海市临床检验中心、上海市第一人民医院、南昌大学第二附属医院、四川大学华西第四医院、上海市徐汇区中心医院(上海市实验医学研究院临床质谱研究所)、中国中医科学院医学实验中心、上海市东方医院(同济大学附属东方医院)、河南科技大学第一附属医院、四川省肿瘤医院、广元市中心医院、上海睿康生物科技有限公司、深圳华大基因股份有限公司、北京实安科技有限公司、北京医学检验学会、北京中检体外诊断工程技术研究中心、成都顺康源医疗器械有限公司、上海拜谱生物科技有限公司、上海科华生物工程股份有限公司、苏州药明泽康生物科技有限公司。本文件主要起草人：陆秋涯、刘万阳、戴菁、贺晓双、赵珺涛、王旭东、冯磊光、高海燕、金中淦、王琳、刘静、张静、陆优丽、孙健、杨术生、刘传鑫、邹海民、李政东、戴辉、任哲、李娜、穆红、戴其全、韩禄、呼建文、戴捷、杨超、赵洪、韩颖鑫。3本文件规定了液相色谱一质谱联用法检测人体血液或尿液中氨基酸的通用要求，包括基本要求、分析方法、质量控制和结果报告。本文件适用于医学实验室采用液相色谱一质谱联用法开展人体血液或尿液中氨基酸的检测。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14710医用电气设备环境要求及试验方法GB17681危险化学品重大危险源安全监控技术规范GB/Z35959-2018液相色谱一质谱联用分析方法通则WS/T415无室间质量评价时的临床检验质量评价YY/T1740.1医用质谱仪第1部分：液相色谱一质谱联用仪JJF1317液相色谱一质谱联用仪校准规范T/CITS233液相色谱一质谱联用用于脂溶性维生素检测通用技术要求3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。液相色谱一质谱联用liquidchromatography-massspectrometry;LC-MS用作分离功能的液相色谱与具有定性定量功能的质谱实现在线相联的一种分析技术。4基本要求4.1.1医学实验室(以下简称实验室)内部应明确各岗位人员的职责和工作流程，建立培训计划和考核机制，并保存相应记录。应按照培训考核的项目种类和仪器类型授权上岗。4.1.2实验室技术负责人应具备色谱、质谱理论知识、实践经验及组织协调能力，应根据相关规定和实验室实际情况建立和制定质量管理体系及管理规范、实验室各类制度等。4.1.3实验室技术人员及岗位要求如下：a)具备临床检验、分析化学、药物分析、生物化学或质谱相关教育背景，完成相关岗前培训及实操考核；b)岗位应相对固定，如需轮岗，宜同一岗位在岗时间不少于半年；4c)离岗半年应再次进行操作培训及考核；d)离岗超过一年应经过再次理论培训、操作培训及考核。4.1.4结果报告审核人员应经过系统的临床检验或药学专业培训，具备质谱分析相关知识，并通过国家规定的检验人员技能考试。4.2实验室环境实验室环境条件应符合GB/T14710的相关规定，同时满足以下要求：a)实验室应根据仪器型号和配套设备提供足够的空间；b)实验室应保持清洁、少尘，必要时配备可净化实验室空气的硬件设施；应远扰因素；c)实验室应配备良好的通风系统，分析区域应有独立的排风系统；d)实验室内应有稳定的温度和湿度控制；质谱实验室应符合YY/T1740.1的规定，环境温度宜控制在15℃~25℃,相对湿度控制在40%～60%;温湿度条件与制造商标称的条件不一致时，以产品规定的条件为准；特殊区域(如恒温室)的温度和湿度应根据实验要求进行精确控制；e)实验室应有适配的供电设施，包括不间断电源等。4.3.1液相色谱-质谱联用仪应符合YY/T1740.1的要求，并按照JJF1317校准。4.3.2液相色谱-质谱联用仪配置及安装应符合GB/Z35959的规定。4.4试剂和材料a)实验用水应符合GB/T6682规定的一级水。b)应选用分析纯或更高纯度的试剂，并标明生产商和生产日明文件。使用前应检查试剂的质量。c)易受潮或氧化的试剂，应在干燥器中储存。d)危险化学品应安置在危化品柜内，符合GB17681的规定。e)标准品宜优先使用有证标准物质，如无法获得，应质，并附有量值溯源报告。g)质控品宜优先选择商品化的质控品，如无法获得，可自行配制。h)关键耗材(如色谱柱、沉淀板、固相萃取板、液固萃取板等)应根据分析方法的要求选择合适的品牌和规格，更换品牌或者批号时应进行性能验证。i)普通耗材(离心管、收集板等)应选择对实验过程和实验结果无干扰、无污染、无吸附性的材j)自配试剂应充分验证其与预开展氨基酸检测的仪器的系统适配性。方法学评价的数床需求。实验室自配试剂/商品化试剂盒投入使用前应完成方法学确认或验证(包括正确度、精密度、线性范围、定量下限等),应符合T/CITS233的规定。5分析方法5.1样品采集及处理采集标本。55.1.2采血样时首选乙二胺四乙酸盐(ethylenediaminetetraaceticacid,EDTA)或肝素抗凝管，样品采集后宜立即放置在冷藏环境(2℃~8℃),并在4h以内离心分离血浆。血浆样品如不及时检测，应分装在冻存管中于-20℃冷冻，宜在14d内完成检测。样品短期储存期间宜避免光照和高温。样品在运输过程中宜低温保存，可使用保温箱或冰袋等设备。5.1.3尿液采集宜使用晨尿，使用无添加的尿液采集管采集尿样后，宜在2h内送检。尿液样品如不及时检测，应分装在冻存管中于-20℃冷冻，宜在7d内完成检测。样品短期储存期间宜避免光照和高温。样品在运输过程中宜低温保存，可使用保温箱或冰袋等设备。5.1.4样品处理流程应按照说明书规定的方法或自建方法进行，正式使用前均应通过方法学评价，并建立样品处理相关的标准操作规程或操作手册。5.2.1应选择适用于氨基酸检测的色谱柱。柱长、内径及填料粒径应根据具体氨基酸种类和分离度进行选择。5.2.2应使用适宜的流动相系统，如无机溶液和有机溶剂的混合物，根据氨基酸的极性和电离特性确定比例和pH值。5.2.3应根据灵敏度、分离度等要求选择合适的进样量(一般控制在1μL～20μL)、流速(通常范围为0.2πL/min~1.0πL/min)以及柱温(通常柱温设定为20℃~40℃)。5.2.4商品化试剂或自配试剂所规定的色谱柱及色谱条件，经过方法学验证(确认)后，不应随意调5.3.1应根据氨基酸的性质和检测需求选择正离子或负离子检测模式，常用的离子源包括电喷雾离子5.3.2应根据氨基酸检测需求选择合适的质谱模式，如全扫描、选择离子监测、多反应监测等。5.4数据处理5.4.2可通过比对已知标准品的质谱图和色谱保留时间进行定性分析。根据峰面积或峰高与氨基酸浓度的线性关系进行定量分析。宜优先采用内标法，内标品选择同位素标记的对应氨基酸。5.4.3可使用经验证的自动数据处理系统辅助数据处理和报告的解读。6质量控制6.1室内质控6.1.1.1质控品的基质应与待测样品相同或尽可能接近。6.1.1.2质控品基质应具有良好的稳定性，存储或使用过程中不应发生显著变化。6.1.2.1实验室应确定室内质控品的保存条件和稳定性，以下信息应文件化：b)标定的浓度；6.1.2.2如果质控品有冻融循环，应测定多次冻融循环后的影响程度，并评价样品准备和分析的时间6.1.2.3应设计评估室内质控品的冻融稳定性和短期、长期冻存稳定性。质控品的处理过程(如解冻过程)应包括在实验室程序中。66.1.2.4如果质控品制造商提供足够的关于稳定性要求验证的数据，应严格遵循制造商提供的保存信息。如果实验室对商品化质控品做出改变(如稀释制备低浓度样品)或保存条件与制造商要求不符，应确认其保存要求和稳定性。6.1.3.1质控品应包含所有待测氨基酸，通常有2个～3个浓度，且能覆盖医学决定水平和大多数正6.1.3.2应分别在每批次运行的起始、结束处检测一套质控品。在持续检测状态下，应按固定频率分析质控品，如每隔50个样品检测1套质控品。若方法较稳定可用最低分析频率(每24h至少检测2套质控品)。6.1.4判定规则6.1.4.1应通过质控图及质控规则对质控结果进行分析，识别可能存在的系统偏倚或趋势。当质控出现失控现象时应查找原因，评估对检测结果的影响，必要时重新检测样品。6.1.4.2每月至少统计1次室内质控结果，对出现的明显偏差或趋势应分析原因，并采取相应的纠正措施。6.2室间质评6.2.1实验室应根据实际情况选择合适的室间质评计划。如检测项目无室间质评样品提供者，可通过与其他实验室比对的方式确定检验结果的可接受性，宜参考WS/T415或采用其他替代评估方式(如检测参考物质等)。6.2.2室间质评样品应按临床样品同样的操作流程进行检测。6.2.3如室间质评结果不合格，实验室应评估检测过程，查找原因并予以纠正。7.1结果报告应包括报告标题、样品信息、方法描述、结果数据、参考范围等内容。7[1]