【《RNA干扰（RNAi）技术探究国内外文献综述》2100字】

RNA干扰（RNAi）技术研究国内外文献综述RNA干扰（RNAi）是调节基因表达的一种自然的基因沉默过程。RNAi的发现是革命性的突破，并获得2006年世界诺贝尔生理学或医学奖。RNA干扰是一种新颖和创新的方法，可以特异地靶向并沉默任何导致疾病的基因，包括那些不能被其他常规方法靶向的目标。作为RNAi治疗学开发的领导者，Alnylam已将RNAi推进到创新研究性疗法的强有力管线中，并致力于证明创新的科学、毅力和激情能够汇聚在一起，改善患者的生活。1.1RNAi的原理真核细胞有许多复杂的方式来控制基因的表达，在复杂的细胞环境中，这些机制需要靶向精准。双链RNA选择性灭活靶基因对应的mRNA可实现RNA干扰。进入胞浆的双链RNA可将其激活。沉默机制可导致靶mRNA的降解，也会导致siRNA的特异性mRNA翻译产生。小RNA有几种类型：小干扰RNA、微小RNA、shRNA等。RNA干扰途径中基因沉默的两个重要研究方向是双链小干扰RNA（siRNA）和短发夹RNA（shRNA）。大多数siRNA和有大约21个核苷酸的长度，短的双链RNA与Argonaute蛋白结合，选择其中一条RNA链作为引导链，保持与Argonaute蛋白的结合。RNA与Argonaute蛋白及其他蛋白的结合称为RNA诱导沉默复合物（RISC）。MiRNA也引导RISC与信使RNA结合。通常只有miRNA中的一部分区域（种子序列）能与信使RNA配对。这种不精确的配对是的microRNA可以靶向数百种内源信使RNA。被微小RNA靶向的信使RNA会被降解或抑制翻译。在植物、动物、真菌和一些细菌中，发现Argonaute蛋白和相应的小调控RNA分子，它们在许多生物过程中的重要性和在工具方面的作用仍有待了解。图2.siRNA与shRNA的结构（A）siRNA；（B）shRNA；（C）shRNA的构建Figure2.StructureofsiRNAandshRNA（A)siRNA；（B)shRNA；（C)TheconstructionofshRNA1.2小干扰RNA（siRNA）小干扰RNA（或称为siRNA），由较长的双链RNA衍生而来，这些双链RNA可由细胞本身产生，或通过实验人工导入细胞中。SiRNA或双链RNA的引入被广泛用于操纵基因表达。SiRNA是一种短的寡核苷酸双链体，与靶mRNA互补，可引导RISC结合到特定的mRNA上，该过程具有靶向性，因为它是由siRNA和靶信使RNA之间的碱基配对决定的。SiRNA通常与靶向位点有很好的互补性，一旦结合，Argonaute催化信使RNA的切割，被切断的RNA随后被降解。SiRNA功能链的序列引导RISC复合体定向到mRNA的靶点，RISC复合体通过降解mRNA来阻止mRNA代码中特定蛋白质的合成，siRNA可用于精确、有效地沉默特定基因，减少多达99%的表达。此外，承载功能链的RISC可以靶向同一mRNA的更多副本并破坏它们。因此，siRNA起催化作用。1.3微小RNA（miRNA）微小RNAs是另一种小RNA。大多数微小RNA来自于在细胞核中转录的RNA，这些RNA经过折叠然后以双链miRNA前体的形式被输送到细胞质中。在人体内，细胞使用miRNA达到基因沉寂，mRNA是将遗传信息转化为蛋白质所必需的，而miRNA可以通过令mRNA失活来关闭基因。这样，基因沉默。MiRNA还参与调控细胞从发育到死亡的过程，一旦失调会对我们的身体造成严重后果，可能会导致癌症和心脏病等一系列疾病。MiRNA和我们的生活息息相关，非常值得进一步研究。与蛋白相似，编码miRNA的基因也存在于DNA的细胞核，并通过RNA聚合酶Ⅱ转录。它催化核糖核酸转录，合成mRNA。典型发夹环结构的miRNA，经过加工，成为具有调控功能的miRNA。目的基因的mRNA与配对的miRNA序列互补，一旦结合，有两种办法使miRNA失活：一来，蛋白质和复合物可以简单地切断mRNA，然后进一步摧毁它；另一种可能是抑制翻译，在这种情况下RISC复合物会阻止核糖体亚基结合。这两种情况下mRNA都不会被翻译，基因沉默。在生物过程中，miRNA起着重要作用，是医药学界的巨大的潜力，是研究治疗各种疾病的关键。1.4短发夹RNA（shRNA）短发夹RNA（shRNA），具有一段紧密的形似发夹环的序列，可用作RNA干扰技术中使基因沉默的一种表达手段，受pollⅡ启动子控制。ShRNA的发夹结构可被切割成siRNA，切割形成的siRNA与RISC结合，结合产物中的RISC同时与mRNA结合，并使结合的mRNA降解。ShRNA在经过聚合酶Ⅲ的转录后，其产物在哺乳动物体内存在会促使细胞产生干扰素的现象，而miRNA则不会。SShRNA相较于siRNA具有以下优点：①可使用病毒载体转染；②可克服某些细胞不能进行转染的难题；③稳定性高，可长期表达；④能减少脱靶效应。本实验中选用shRNA，可进行慢病毒转染并具有较为稳定的效果。同时，shRNA可以整合到细胞基因中，进行长期的稳定表达。参考文献：王俊.卵巢癌的早期症状卵巢癌应该这样治疗[J].科普论坛,2021:[2] 周琦,唐小珂,曾莉,龙玲,林睿.人乳头状瘤病毒感染与卵巢癌的关系研究[J].中国病原生物学杂志,2017,12:4[3] SiegelR.L.,MillerK.D.,JemalA.Cancerstatistics,2019[J].CACancerJClin,2019,69(1):7-34[4] ChenW.,ZhengR.,BaadeP.D.,ZhangS.,ZengH.,BrayF.,JemalA.,YuX.Q.,HeJ.CancerstatisticsinChina,2015[J].CACancerJClin,2016,66(2):115-132[5] 王晓妮,茜王,田小娟,索玉平.卵巢癌的治疗现状及进展[J].肿瘤药学,2020,10:5[6] 江霞,赵长久.siRNA在卵巢癌靶向治疗中的研究进展[J].现代肿瘤医学,2021,29:4[7] 杨兴升.卵巢癌诊疗现状_杨兴升[J].中国医刊,2021,56:3[8] 刘凤娟,仝进毅.神经生长因子和血管内皮生长因子在上皮性卵巢癌中表达及意义研究[J].中国实用妇科与产科杂志,2017,33:3[9] MIEllina,PBouris,AJAletras.EGFＲandHEＲ2exertdistinctrolesoncoloncancercellfunctionalproper-tiesandexpressionofmatrixmacromolecules[J].BiochimBiophysActa,2014,1840:11[10] CressR.D.,ChenY.S.,MorrisC.R.,PetersenM.,LeiserowitzG.S.CharacteristicsofLong-TermSurvivorsofEpithelialOvarianCancer[J].ObstetGynecol,2015,126(3):491-497[11] AebiS.,CastiglioneM.,GroupEsmoGuidelinesWorking.Newlyandrelapsedepithelialovariancarcinoma:ESMOclinicalrecommendationsfordiagnosis,treatmentandfollow-up[J].AnnOncol,2009,20Suppl4:21-23[12] HellstromIngegerd,HellstromKarlErik.SMRPandHE4asBiomarkersforOvarianCarcinomaWhenUsedAloneandinCombinationwithCA125and/orEachOther[J].AdvExpMedBiol,2008,622:7[13] YeungT.L.,LeungC.S.,YipK.P.,AuYeungC.L.,WongS.T.,MokS.C.Cellularandmolecularprocessesinovariancancermetastasis.AReviewintheTheme:CellandMolecularProcessesinCancerMetastasis[J].AmJPhysiolCellPhysiol,2015,309(7):C444-456[14] DionL.,CartonI.,JaillardS.,NyangohTimohK.,HennoS.,SardainH.,FoucherF.,LevequeJ.,delaMotteRougeT.,BrousseS.,LavoueV.TheLandscapeandTherapeuticImplicationsofMolecularProfilesinEpithelialOvarianCancer[J].JClinMed,2