DB22-T 409-2005 保健食品中淫羊藿苷高效液相色谱法测定

DB22T4092005保健食品中淫羊藿苷高效液相色谱法测定1范围本标准规定了保健食品中淫羊藿苷的高效液相色谱测定方法。本标准适用于以淫羊藿为主要原料或添加淫羊藿提取物的保健食品中淫羊藿苷含量的测定。本方法的检出限为0.05μg/mL，定量限为0.15μg/mL。2原理试样中的淫羊藿苷经甲醇超声提取后，用高效液相色谱仪分离，紫外检测器检测，外标法定量。淫羊藿苷在C18色谱柱上得到良好分离，在270nm波长处有最大吸收。3试剂与材料除非另有说明，本标准所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。3.1甲醇：色谱纯3.2乙腈：色谱纯3.3磷酸：优级纯3.4淫羊藿苷标准品：纯度≥98%3.5淫羊藿苷标准储备溶液：精密称取淫羊藿苷标准品10.0mg，置于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，配制成100μg/mL的标准储备溶液，于4℃冰箱中保存，有效期3个月。3.6淫羊藿苷标准工作溶液：精密吸取淫羊藿苷标准储备溶液适量，用甲醇逐级稀释成浓度为0.5、1.0、2.0、5.0、10.0μg/mL的标准工作溶液，临用新配。4仪器与设备4.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器4.2色谱柱：C18柱，250mm×4.6mm，5μm，或性能相当者4.3分析天平：感量0.1mg和0.01mg4.4超声波清洗器：功率250W，频率40kHz4.5离心机：转速不低于4000r/min4.6旋转蒸发仪4.7恒温水浴锅4.8微量进样器：10μL、50μL、100μL4.9容量瓶：10mL、25mL、50mL、100mL4.10具塞刻度试管：10mL、25mL4.110.45μm微孔滤膜5试样制备与保存5.1固体试样：取代表性样品约100g，用粉碎机粉碎，过80目筛，混匀，装入洁净容器中，密封保存于阴凉干燥处。5.2液体试样：取代表性样品约100mL，充分混匀，装入洁净容器中，密封保存于4℃冰箱中。5.3半固体试样：取代表性样品约100g，用匀浆机匀浆，混匀，装入洁净容器中，密封保存于4℃冰箱中。6分析步骤6.1试样处理6.1.1固体试样：精密称取试样1.0g（精确至0.0001g）于50mL具塞刻度试管中，加入甲醇20mL，密塞，超声提取30min，冷却至室温，用甲醇定容至刻度，摇匀，以4000r/min离心10min，取上清液经0.45μm微孔滤膜过滤，滤液供高效液相色谱分析。6.1.2液体试样：精密吸取试样5.0mL于25mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，经0.45μm微孔滤膜过滤，滤液供高效液相色谱分析。6.1.3半固体试样：精密称取试样2.0g（精确至0.0001g）于50mL具塞刻度试管中，加入甲醇25mL，密塞，超声提取30min，冷却至室温，用甲醇定容至刻度，摇匀，以4000r/min离心10min，取上清液经0.45μm微孔滤膜过滤，滤液供高效液相色谱分析。6.2色谱条件6.2.1色谱柱：C18柱，250mm×4.6mm，5μm6.2.2流动相：乙腈水（25:75，V/V）6.2.3流速：1.0mL/min6.2.4柱温：30℃6.2.5检测波长：270nm6.2.6进样量：10μL6.2.7运行时间：20min6.3标准曲线绘制分别吸取淫羊藿苷标准工作溶液（3.6）各10μL，按6.2规定的色谱条件进行测定，以淫羊藿苷浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。6.4试样测定吸取试样处理液（6.1）10μL，按6.2规定的色谱条件进行测定，记录色谱峰面积，根据标准曲线计算试样中淫羊藿苷的含量。7结果计算试样中淫羊藿苷的含量按式（1）计算：X=(c×V×f)/m式中：X——试样中淫羊藿苷的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）或毫克每升（mg/L）；c——从标准曲线上查得的试样处理液中淫羊藿苷的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；V——试样处理液的总体积，单位为毫升（mL）；f——试样稀释倍数；m——试样质量或体积，单位为克（g）或毫升（mL）。计算结果保留三位有效数字。8精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。9回收率取已知含量的试样，添加一定量的淫羊藿苷标准品，按6.1和6.4步骤操作，计算回收率