DB13-T 1114-2009 小麦粉中荧光增白剂的测定

DB13T11142009小麦粉中荧光增白剂的测定1范围本标准规定了小麦粉中荧光增白剂的测定方法。本标准适用于小麦粉中荧光增白剂的测定。2原理试样中的荧光增白剂经提取后，利用荧光分光光度计在特定激发波长和发射波长条件下测定其荧光强度，与标准系列比较定量。3试剂与材料除非另有说明，本标准所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的三级水。3.1甲醇：色谱纯。3.2乙酸乙酯：色谱纯。3.3荧光增白剂标准品：已知纯度的荧光增白剂标准物质。3.4标准储备溶液：准确称取荧光增白剂标准品10.0mg，用甲醇溶解并定容至100mL，配制成100μg/mL的标准储备溶液，于4℃避光保存。3.5标准工作溶液：吸取标准储备溶液，用甲醇逐级稀释成浓度为0.1μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL的标准工作溶液，现用现配。4仪器与设备4.1荧光分光光度计：配备1cm石英比色皿。4.2分析天平：感量0.1mg。4.3超声波清洗器。4.4离心机：转速≥4000r/min。4.5涡旋混合器。4.6氮吹仪。4.7具塞刻度试管：10mL、25mL。4.8微量移液器：100μL、1000μL。5分析步骤5.1试样制备称取混合均匀的小麦粉试样5.0g（精确至0.01g），置于50mL具塞离心管中，加入20mL甲醇，涡旋混合2min，超声提取20min，以4000r/min离心10min，将上清液转移至25mL容量瓶中。残渣再用10mL甲醇重复提取一次，合并上清液，用甲醇定容至刻度，摇匀，经0.45μm滤膜过滤，待测。5.2测定条件荧光分光光度计测定条件：激发波长：350nm发射波长：430nm狭缝宽度：5nm灵敏度：中档5.3标准曲线的绘制分别吸取0.1μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL的标准工作溶液，按5.2测定条件测定荧光强度。以荧光强度为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。5.4试样测定取试样提取液，按5.2测定条件测定荧光强度，从标准曲线上查出试样中荧光增白剂的浓度。6结果计算试样中荧光增白剂的含量按式（1）计算：X=(c×V)/m式中：X——试样中荧光增白剂的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；c——从标准曲线上查出的试样提取液中荧光增白剂的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；V——试样提取液定容体积，单位为毫升（mL）；m——试样质量，单位为克（g）。计算结果保留两位有效数字。7精密度7.1重复性在同一实验室，由同一操作者使用相同设备，按相同的测试方法，并在短时间内对同一被测对象相互独立进行的测试获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的10%。7.2再现性在不同实验室，由不同操作者使用不同设备，按相同的测试方法对同一被测对象相互独立进行的测试获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的15%。8检出限和定量限本方法的检出限为0.5mg/kg，定量限为1.5mg/kg。9质量控制9.1空白试验每批样品测定时应同时进行空白试验，空白值应低于方法检出限。9.2加标回收每批样品应进行加标回收试验，加标回收率应在85%~115%之间。9.3标准曲线每批样品测定时应绘制标准曲线，相关系数应不小于0.999。10注意事项10.1荧光增白剂对光敏感，标准溶液和试样提取液应避光保存。10.2测定过程中应避免强光直射，以免影响荧光强度的测