DB12∕T 1067-2021 淡水小球藻生产技术规程

ICS65.020.99

CCSB39

12

天津市地方标准

DB12/T1067—2021

淡水小球藻生产技术规程

TechnicalregulationsforproductionoffreshwaterChlorellasp.

2021-08-16发布2021-09-16实施

天津市市场监督管理委员会发布

DB12/T1067—2021

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起

草。

本文件由天津市农业农村委员会提出并归口。

本文件起草单位：天津市农业科学院。

本文件主要起草人：张峰峰、谢凤行、周可、赵琼、李瑞环、赵玉洁、孙海波、王姝、张越、高晶

琳、张新建。

I

DB12/T1067—2021

淡水小球藻生产技术规程

1范围

本文件规定了淡水小球藻（Chlorellasp.）培养的环境、设备、水、培养方法、采收及注意事项。

本文件适用于淡水小球藻生产。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB5749生活饮用水卫生标准

SL733内陆水域浮游植物监测技术规程

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

原藻种theoriginalmicroalgaespecies

由单藻落分离纯化，并在固体斜面培养基上繁殖保存的藻种。

3.2

液体藻种theliquidmicroalgaespecies

原藻种在固体平板培养基上活化，挑取单藻落接种至装有灭菌液体培养基的透明容器中，光照培养

的藻种。

4生产用水和设施设备

4.1生产用水

生产用水应符合地表水环境质量标准GB5749中水质要求。

4.2设施设备

4.2.1藻种保藏室

放置冰箱、冰柜，保存原藻种的房间。

4.2.2藻种培养室

进行培养基的配制和藻种的保种、培养及检查等操作的房间。配有分光光度计、电子天平（精度为

0.01g）、光学显微镜（1000×）、照度计（精度为0.1lx）超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、恒温光照

培养箱等。

4.2.3规模生产车间

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进行藻液规模培养。配有光照设备和不同容量的透明发酵容器等。

5生产技术流程

5.1生产流程

生产流程应按附录A执行。

5.2藻种质量

用于培养的藻种应有藻种鉴定报告或藻株来源相关信息。

规模生产之前需检测藻种的细胞密度和纯度，不能有其他藻污染，藻细胞密度≥1×107cells/mL，

利用平板涂布法或计数框计数法测定藻细胞密度，计数框计数法应按SL733中6.4的规定执行。

5.3培养基

小球藻液体培养基配方见附录B。保种固体培养基和计数培养基为在液体培养基中加入20g/L琼脂

粉。

5.4灭菌消毒

保种斜面培养基，生产液体藻种培养基以及计数培养基采用高压蒸汽灭菌，灭菌条件为110℃～

115℃，0.1MPa～0.15MPa，灭菌10min～15min。

规模培养容器用10mg/L～20mg/L高锰酸钾溶液或有效氯浓度为0.1‰～0.3‰次氯酸钠溶液浸泡12

h～24h。消毒后，用清水洗净。检查无杂藻杂物后，加水和培养基。也可加入水和培养基后进行高压

蒸汽灭菌，灭菌条件为110℃～115℃，0.1MPa～0.15MPa，灭菌10min～15min。

5.5液体藻种培养

5.5.1容器

容器为200mL～500mL透明玻璃瓶，可高压蒸汽灭菌。

5.5.2培养条件

从斜面培养基接种原藻种到液体培养基中，光照强度3000lx～5000lx，光照周期14L:10D，培

养温度20℃～25℃，静置培养7d～10d。

5.5.3质量检测

配制计数培养基，利用平板涂布法测定小球藻细胞密度及纯度。

小球藻细胞密度≥1×107cells/mL，其他藻类密度＜0.1‰，即为合格藻种。

5.6规模培养

5.6.1容器

容器容积控制在0.2m³～2m³，高度≤100cm。选用透光性强的塑料桶、塑料袋、玻璃缸等适合的

培养容器。

5.6.2接种量

按培养体积的10%～20%接种液体藻种。

2

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5.6.3光照

光照强度4000lx～20000lx。

5.6.4温度

温度为15℃～30℃，最适培养温度为20℃～25℃。

5.6.5培养方式

规模培养应适当补充空气，充气量应大于培养容积的1%。

5.6.6培养周期

最适培养条件下，一个培养周期为7d～10d。

5.7生长监测

每天采样监测，用计数框计数法或光密度法计算藻细胞密度，观察污染情况。

5.8污染控制

在培养的生产过程中，应注意避免污染，定期检查藻细胞的生长状况，如发现有黄化、黑化、浮游

动物或其他藻类污染，应终止培养，清洗消毒，重新接种。

5.9质量检测

利用平板涂布法测定小球藻细胞密度，藻细胞密度≥1×107cells/mL，其他藻类密度＜1%即为合格。

5.10后处理

藻液培养完毕，直接分装。

6生产记录

6.1生产、加工过程记录

应记载藻种来源、培养日期、培养时间、灌装日期、藻液颜色、藻细胞密度、温度等。

6.2培养基采购、使用记录

应记载培养基进货日期、名称、规格、批号、数量、供货商、索证情况、保质期限、验收人记录、

培养基使用量等。

6.3记录保存

生产记录应保存不少于2年。

7储存

分装后的藻液应贮存在通风、干燥、清洁的仓库，仓库内无有害气体、易燃易爆物品及有腐蚀性的

化学物品，远离热源。

3

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A

A

附录A

（规范性）

淡水小球藻生产流程图

淡水小球藻生产流程见图A.1

图A.1淡水小球藻生产流程

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B

B

附录B

（资料性）

淡水小球藻培养基

淡水小球藻培养基配方如下：

——NaNO31.5g；

——K2HPO40.04g；

——MgSO4·7H2O0.075g；

——CaCl2·7H2O0.036g；

——Na2CO30.02g；

——柠檬酸0.006g；

——柠檬酸铁铵0.006g；

——EDTA0.001g；

——微量元素溶液A51mL；

——氨苄青霉素(终浓度)50μg/mL；

——蒸馏水/自来水1L。

其中，微量元素溶液A5配方：

——H3BO32.86g；

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