T-JFX 003-2023 重组人源Fc gamma RIIIA CD16a (V176)蛋白质量标准

ICS11.040.30CCSC30北京发明协会发布1本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则》给出的规则起草。本文件由北京发明协会提出并归口。本文件起草单位：北京百普赛斯生物科技股份有限公司、百斯医学诊断科技（北京）有限公司、杭州韬圃科技有限公司、苏州新微溪生物医药有限公司本文件主要起草人：陈宜顶、苗景赟、张立帆、刘茜、朱艳泽、蔡苗、秦丽丽、葛平菊、任文林、张健夫2 1 32规范性引用文件 33术语和定义 34技术要求 65实验方法 66检测规则 7 88包装、运输、储存 83本文件规定了重组人源FcgammaRIIIA/CD16a(V176)蛋白技术要求、检验规则、标签、包装、运输、储存，描述了检测方法。本文件适用于重组人源FcgammaRIIIA/CD16a(V176)蛋白，该蛋白主要用于含有Fc段的单抗，双抗，多特异性抗体，ADC，Fc融合蛋白等生物药物Fc段效应的评估，不同突变体与受体的亲和力不同，介导的抗体效应也不同。利用SPR技术体外检测相关药物与Fc受体蛋白的亲和力，进而直观评估相关药物Fc段的免疫效应的强弱及有无。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注明日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注明日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。《中华人民共和国药典》2020年版三部相关章节本文件第六章节有描述。3术语和定义3.1下列术语和定义适用于本文件。3.1.1Fc受体Fc受体是一类能够和抗体Fc片段特异结合的细胞表面蛋白，不同类型的细胞可以表达不同类型的Fc受体，对应的不同结构类型的抗体也和不同类型的Fc受体结合，从而诱导后续的不同类型的免疫反应。不同类型的细胞可以表达不同类型的Fc受体，对应的不同结构类型的抗体也和不同类型的Fc受体结合，从而诱导后续的不同类型的免疫反应。Fc受体包含多个家族，各个家族成员之间的结构都非常相似。IgG类型抗体的Fc受体是FcγR，依据和Fc片段亲和力的强弱FcγR又可以被分为三个亚家族：Ⅱ(CD32)和FcγRⅢ(CD16)。FcγRIII在体内有FcγRIIIa和FcγRIIIb两种亚型，和IgG的结合分别为中度和低亲和力。FcγRIIIa几乎在所有白细胞中表达，主要负责NK细胞的ADCC作用和巨噬细胞对4抗体-抗原免疫复合物的清除。其中重组人源FcgammaRIIIA/CD16a(V176)蛋白的序列见附件A。3.1.2重组蛋白重组蛋白（recombinantprotein）是指应用重组DNA或重组RNA技术而获得的蛋白质。重组蛋白工程先应用基因克隆或化学合成技术获得目的基因，连接到适合的表达载体，导入到特定的宿主细胞例如HEK293细胞，利用宿主细胞的遗传系统，培养并表达出有功能的蛋白质分子，再经提取和纯化等步骤制备而成。。3.1.3抗原能引起机体免疫反应并产生抗体的物质。3.1.4抗体机体由于抗原的刺激，由B细胞分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原特异性结合的免疫球蛋白。3.1.5单克隆抗体/单抗由单一B细胞分化增殖的子代细胞所分泌的高度均质性针对单一抗原决定簇的特异性抗体。3.1.6培养基供给微生物以及植物、动物的细胞或者组织生长繁殖的，由不同营养物质组合配制而成的营养基质。3.1.7核酸核酸是一类大分子聚合物，是所有已知生命形式必不可少的组成物质，是生命体遗传信息载体，为脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）的总称。3.1.8DNA脱氧核糖核酸，由脱氧核苷酸组成的大分子聚合物，能够携带生命体的遗传信息。3.1.95克隆载体携带目的基因进入宿主细胞进行复制、扩增或表达的工具，即用于克隆、运载和转移目的基因并能3.1.10质粒细胞染色体外能够自主复制的环状DNA分子。3.1.11蛋白表达利用生物细胞将外源基因通过一系列机制最终合成蛋白的一种技术途径。3.1.12蛋白表达系统在蛋白表达时，由宿主、外源基因、载体和辅助成分组成的体系，通过该体系可以实现外源基因在宿主中表达的目的。3.1.13纯化从包含多种物质的混合物中，根据不同分子的物理、化学、生物特性，通过一定技术手段，提取得到特定物质的过程。3.1.14转染将外源基因转入真核细胞的过程。3.1.15HEK293人胚胎肾细胞，衍生自人胚胎肾细胞的细胞系，广泛用于生产蛋白、疫苗、抗癌试剂及重组腺病毒包被等。3.1.16MALS/HPLC-MALS(Multi-AngleLightScattering/HighPerformanceLiquidChromatography-Multi-AngleLightScattering).多角度激光散射技术/高效液相色谱-多角度激光散射技术。63.1.17SPR表面等离子共振(SurfacePlasmonResonance,SPR)，它通过检测生物传感芯片上配位体与分析物之间的相互作用情况，进而探测物质的性质和结构。根据金属表面偶联的配体是否与分析物结合而产生不同的共振角，通过监测共振角度的变化，可以推断出生物分子相互作用的亲和性、亲合常数、结合动力学等信息。4技术要求4.1原液4.1.1纯度SDS纯度：大于等于95%单体大于等于95%4.1.2分子量（SDS）40-50kDa是4.1.3生物学活性与Herceptin亲和力KD为0.1uM±3倍4.2成品4.2.1性状：白色疏松体重构后外观：澄清4.2.2蛋白含量：标识量的100%-110%5.1纯度依照《中华人民共和国药典》2020年版三部部通则0541“电泳法”第四法“SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法”测定；SDS:还原型SDS。依照《中华人民共和国药典》2020年版三部部通则0514尺寸排阻色谱与多角度光散射联用SEC-MALS。5.2分子量：还原型SDS依照《中华人民共和国药典》2020年版三部部通则0541“电泳法”第四法“SDS-聚丙烯酰胺凝胶5.3生物活性7表面等离子共振法。依照《中华人民共和国药典》2020年版三部通则3429免疫化学法中表面等离子共振法测定。通过表面等离子共振法测定重组人源FcgammaRIIIA/CD16a(V176)蛋白与Herceptin的亲和力。5.4外观肉眼观察蛋白含量测定。5.5蛋白含量依照《中华人民共和国药典》2020年版三部通则0731“蛋白质含量测定法”第六法紫外-可见分光光度法测定。6检验规则6.1生产批以一次冻干成型的产品为一个生产批。6.2.1取样通常情况下，从包装好的最小规格产品中随机抽取应检量的样品作为检测与留样样品。对于每批最小包装产品，从包装好的产品中随机抽取1个最小包装作为检测、留样。6.2.2样品抽样后样品瓶标签信息应包含产品名称、产品批次、产品货号、产品规格。6.2.3检验项目本文件第五章节的所有要求。6.2.4判定规则——所有出厂检验项目都合格，则判定该批产品出厂检验合格；——出厂检验项目有一项不合格，则判定该产品为不合格品。6.3型式检验6.3.1正常生产时每年进行一次，如遇下列情况亦进行型式检验：——当原辅材料、工艺有重大改变时；——更换设备，或停产超过半年以上再恢复生产时；——质量监督部门要求时。6.3.2合格判定8——所有检验项目都合格，判定该产品型式检验合格。7.1产品标签上应有下列内容：——产品名称；——产品货号；——生产企业名称；——产品批号；——规格型号。8包装、运输、储存8.1包装采用西林瓶密封包装。8.2运输应在常温条件下运输，防止水浸或阳光直射。运输工具应无毒、无害、无污染。不得对包装有所破坏。8.3储存冻干品应在-20℃的干燥环境下储存（不排除短时间常温储存，尤其是重构后常温放置时间不超过24小时）。严禁有毒、有害、有腐蚀性的物质混合。9序列信息Accession#P08637-1（AAGly17-Gln208，V176）GMRTEDLP