DB23∕T 3187-2022 花卉肥用原料纳豆芽孢杆菌菌粉制备技术规程

ICS65.080

CCSB10

DB23

黑龙江省地方标准

DB23/T3187—2022

花卉肥用原料纳豆芽孢杆菌菌粉制备技术

规程

2022-05-09发布2022-06-08实施

黑龙江省市场监督管理局发布

DB23/T3187—2022

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规

定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由黑龙江省农业标准化技术委员会提出。

本文件起草单位：哈尔滨瑞康源生物科技有限公司、黑龙江省绿色食品科学研究院。

本文件主要起草人：王英男、杨冬、刘丹怡、王英鹏、吴春梅、刘丽、王克红。

I

DB23/T3187—2022

花卉肥用原料纳豆芽孢杆菌菌粉制备技术规程

1范围

本文件规定了花卉肥用原料纳豆芽孢杆菌菌粉制备的术语和定义、基本要求、原料和设备、制备流

程与方法、保存方法和技术档案。

本文件适用于花卉肥用原料纳豆芽孢杆菌菌粉制备。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB20287农用微生物菌剂

NY/T883农用微生物菌剂生产技术规程

NY/T1114微生物肥料实验用培养基技术条件

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

纳豆芽孢杆菌

纳豆芽孢杆菌(Bacillussubtilisnatto)是食品纳豆中分离出来的菌种，是枯草芽孢杆菌的一个

亚种，属于一类革兰氏阳性、好氧型、内生抗逆芽孢的杆状细菌。

3.2

纳豆芽孢杆菌菌粉

纳豆芽孢杆菌菌粉指纳豆芽孢杆菌经发酵培养后再加工制成的含有纳豆芽孢杆菌菌体和纳豆芽孢

杆菌发酵产物的粉末状固形物。

4基本要求

菌种、培养基、发酵环境、条件等应符合NY/T883的规定。

5原料和设备

5.1原料

5.1.1菌种

纳豆芽孢杆菌菌种来源应符合GB20287的规定。

1

DB23/T3187—2022

5.1.2培养基原料

牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、葡萄糖、NaCl、糖蜜、纳豆粉、破壁酵母、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、

水、琼脂。

5.1.3辅助原料

二氧化硅、保护剂、赋形剂。

5.2仪器与设备

超净工作台、电热恒温培养箱、恒温震荡器、分析天平、pH测定仪、喷雾干燥机。

6制备流程与方法

6.1制备流程

菌种培养→种子液制备→放大发酵→发酵培养→放大发酵→收集菌泥→发酵液的浓缩干燥。

6.2制备方法

6.2.1菌种培养

6.2.1.1培养基制备

菌种培养培养基：牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L,NaCl5g/L,酵母膏5g/L，葡萄糖5g/L，琼脂粉

18g/L，pH7.0，培养基制备方法按照NY/T1114的规定执行。

6.2.1.2菌种培养方法

菌种培养方法应符合下列规则。

a)冷冻干燥管的纳豆芽孢杆菌菌种应在无菌环境下操作：

1)冷冻干燥管表面用70%酒精擦拭后，在火焰上加热外管尖端，滴数滴无菌水于加热处，使

外管破裂，再以硬棒等敲破尖端；

2)取出隔热纤维纸和内管，以无菌镊子取出内管之棉塞，用无菌吸管吸取无菌液体培养基

0.3mL～0.5mL滴入管内并轻微震荡（可用该吸管协助），直至菌体冻干粉混匀悬浮。

b)-20°C～-80°C低温保存的甘油管应进行如下操作：

1)从低温保存条件取出的纳豆芽孢杆菌甘油管置于37°C水浴槽中的管架上，不断轻微摇动

（液面不可高至管塞），直至结冰完全溶解；

2)上述完全混匀后的菌悬液接种于上述固体斜面培养基上，于37°C恒温静置培养24h。

c)4°C保存的纳豆芽孢杆菌菌体或者菌液可直接转接培养。

6.2.2种子液制备

6.2.2.1种子培养基制备

种子培养基：牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L,葡萄糖10g/L，酵母膏5g/L，NaCl5g/L,pH7.0。

6.2.2.2种子培养

活化后的菌体接种于种子培养基中，37℃恒温震荡（200r/min）培养24h，得到种子液。

2

DB23/T3187—2022

6.2.3放大发酵

6.2.3.1发酵培养基制备

发酵培养基：糖蜜3g/L～5g/L，纳豆粉25g/L～35g/L，破壁酵母2g/L～4g/L，磷酸氢二钠1g/L～

1.5g/L，磷酸二氢钠1g/L～1.5g/L，pH调至7.0～7.5，琼脂20g/L～32g/L。

6.2.3.2发酵培养

得到的液体种子均匀喷在发酵固体平板培养基表面，然后放置于恒温发酵室内37 ℃,24 h,封闭发

酵培养。

6.2.4收集菌泥

固体平板培养基取出发酵室，然后用灭菌后的薄片，将所述固体平板培养基上的菌泥刮下来，收集，

得到菌泥。

6.2.5发酵液的浓缩干燥

将所述菌泥与水按质量比1:0.5～3混合，得到菌液，再将所述菌液按质量比菌液：二氧化硅＝1:1～

15添加二氧化硅，进行吸附干燥，过筛，将筛上物进行粉碎后再次过筛，得到菌粉；或将所述菌泥与保

护剂按照质量比1:0.5～2混合后，形成混合液，按所述混合液质量的9％～11％添加赋形剂，再利用喷

雾干燥剂对混合液进行喷雾干燥，喷雾干燥进口温度为120 ℃，出