流式细胞术讲义

流式细胞术的血液学应用北京协和医院血液科汪玄流式细胞术的概念流式细胞术（Flowcytometry；FCM）是集计算机技术、激光技术、电子技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学等多门高新技术与方法为一体的现代细胞分析技术，它以流式细胞仪（Flowcytometer）为工具，在单细胞水平上对大量细胞进行高速（每秒计数可达1000~10000个细胞）、准确、多参数的定量分析或分选（纯度可达99%以上），已成为现代骨髓血细胞学研究中最先进的分析技术。流式细胞术与PNH的诊断原理阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）是一种获得性基因突变所致的克隆性疾病，其异常的血细胞膜糖化肌醇磷脂－锚（GPI－anchor）连接蛋白如CD59,CD55等表达明显减低或缺乏，导致对补体的敏感性增强而产生溶血性贫血。样本要求：EDTA抗凝血或骨髓3ml每天上午送检收费：CD55/CD59280元

CD59140元临床诊断值CD59阳性的红细胞大于等于95%CD59阳性的中性粒细胞大于90%样本要求：肝素抗凝骨髓3ml(或外周血)每天上午送检收费：

70元/每个单抗(临床常规检测12个单抗)干/祖细胞标志：

CD34、CA133髓系标志：

CD33、CD13、CD11b、CD15、MPOB细胞相关标志：

CD10、CD19、CD20、CD22、CD23、CD79a、CyIg、SmIgT细胞相关标志：

CD2、CD3、CD5、CD7、CD4、CD8常用白血病免疫分型荧光素标记单克隆抗体组合及其意义管号三色标记McAb染色细胞及目的1MouseIgG1/MouseIgG1/CD45PerCP阴性对照及设门2CD5FITC/CD7PE/CD45PerCPT淋巴系细胞、部分早期髓系细胞3CD10FITC/CD19PE/CD45PerCPB淋巴系细胞4Anti-HLA-DAFITC/CD13PE/CD45PerCP髓系细胞、B淋巴系细胞、部分T淋巴系细胞5CD34FITC/CD38PE/CD45PerCP反映细胞分化程度6CD14FITC/CD33PE/CD45PerCP髓系细胞和单核细胞7CD20FITC/CD22PE/CD45PerCPB淋巴系细胞及其分化程度8CD8FITC/CD4PE/CD45PerCPT淋巴系细胞及其分化程度9CD3FITC/CD16+56PE/CD45PerCPT淋巴系细胞、NK细胞10CD36FITC/GP-APE/CD45PerCP幼红细胞11CD61FITC/CD41PE/CD45PerCP巨核细胞B-ALLT-ALLAMLCD10+－－CD19+－－CD22c/m+－－CD3c/m－+－CD5－+－CD7－+－CD13－－+CD33－－+MPO－－+AML免疫分型FAB/CD34CD33HLA-DRCD13CD14CD15CD11b其它M1＋＋＋＋－±－M2±＋＋＋－±－M3－＋－＋－±－CD38CD9M4－＋＋±＋＋±M5－＋＋±＋＋±M6±±±±－±－CD71GP-AM7±＋＋－－±－CD41CD61T-ALL免疫分型CD2CD3CD5CD7CD4CD8TdT早期T-ALL++±+－－+前T－ALL+++++++T-ALL++++±±+B-ALL免疫分型HLA-DRCD19CD10CD20CD22cIgMmIgMTdT早B前体ALL++－－－－－＋普通型+++－－－－+前B-ALL++±+－＋－－B-ALL++－+＋±＋－FCM-IM诊断混合型白血病流式细胞术测定发现的双系列或多系列表达的结果较多，但双表型白血病不一定就是混合型，理由如下：混合型白血病诊断：应根据形态、免疫、遗传、分子生物学等综合判断，属双系列（双克隆）？双表型（单克隆）？系列转换型？需考虑到抗原/单抗的多向性：CD4、CD7、CD10、CD38、CD56正常血细胞随分化成熟，各系列血细胞的免疫标志特性逐步规律化：白血病细胞的分化发育却丧失严格的规律性（lineageinfidelity）与免疫表型的阶段性（differentiationasynchrony），因而出现异常抗原表达，或过高或过低或不表达或交叉系列表达。设门方案采用CD45/SSC设门法（优于FSC/SSC设门法）CD45其表达程度在不同细胞各异。淋巴细胞>单核细胞>成熟粒细胞>原/幼细胞，而红细胞不表达。SSC在成熟粒细胞>单核细胞>原/幼细胞>淋巴细胞>红细胞。临床原/幼细胞群定量按照新的WHO分型标准，对初发病者，原/幼细胞占总细胞数20%以上即可判为白血病。对于临床原/幼细胞群定量应以原/幼细胞群的细胞数为分母。对于临床原/幼细胞群定性比定量更重要。白血病免疫分型病例分析病例1梁丽琴女性24岁异常表型中:CD10+.CD34+.CD22+.CD38+.CD19+.HLA-DR+结论：表型符合Pre-B-ALL白血病免疫分型病例分析病例2王丙午男性68岁异常表型中:CD33+.CD13+.CD15+.CD11b+.HLA-DR+.CD34+.CD19+结论：表型符合AML-M2白血病免疫分型病例分析病例3冯亮男性33岁异常表型中:CD34+.CD10+.CD22+.CD19+.CD33+.CD13+.CD15+.HLA-DR+结论：表型符合双表型白血病流式细胞术与

造血干/祖细胞计数原理造血