CN115166113A 一种用于藏香中大麻素检测的大麻素标准样品的制备方法 （三明海关综合技术服务中心）

(19)国家知识产权局申请人福州海关技术中心公司35100专利代理师林文弘蔡学俊GO1N30/06(2006.01)分装，(4=2)℃储存本发明提供了一种用于藏香中大麻素检测评价和质量控制外，还因使用的是有证标准物21.一种用于藏香中大麻素检测的大麻素标准样品的制备方法，其特征在于，包括以下(1)将柏树粉末和榆树皮粉末主料以及香料辅料按藏香的制备方法，经水磨法粉碎、加积浓度为75%的甲醇水溶液稀释至大麻素的浓度为100mg/L,得到大麻素标准溶液；(3)将大麻素标准溶液添加到制成的藏香原料泥坯中；按10kg原料泥坯加入3mLCBD(4)将步骤(3)得到的样品充分搅拌、揉搓，静置发酵1天后，放入真空干燥箱中，40℃,真空度20Mpa,运行时间1h后取出；(5)将步骤(4)得到的样品置于阴凉干燥处置水分完全挥发，或置于40℃以下烘箱中烘(6)将步骤(5)得到的样品混匀，过筛，分装入干净玻璃瓶中，密封保存，即制得所述用于藏香中大麻素检测的大麻素标准样品。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，主料为柏树粉末和榆树皮粉末，二者量比1:1:1:1.5:1:1.5:0.5:0.5:1配置。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，主料和辅料按3:1的质量配比进行混3一种用于藏香中大麻素检测的大麻素标准样品的制备方法技术领域[0001]本发明属于非法添加物质检测的基体标准物质技术领域，具体涉及一种用于藏香中大麻素检测的大麻素标准样品的制备方法。背景技术[0002]桑科大麻属植物大麻，是良好的纺织原料，在世界各地均有野生或栽培，其茎、叶和果实中特有一类含有烷基和单萜分子的次生代谢产物大麻素，主要包括△9-四氢大麻酚(△9-Tetrahydrocannabinol,△9-THC)、大麻酚(Cannabinol,CBN)和大麻二酚(Cannabidiol,CBD),其中，△9-THC因具有影响中枢神经和成瘾性作用而最被关注。近年来，美国、加拿大等多国对大麻管控政策有所放松，部分地区不仅将大麻合法化，还允许将大麻素添加到食品、化妆品和相关产品中。我国也在广西、云南和黑龙江等地允许种植工业大麻(又称火麻，一种低△9-四氢大麻酚含量的大麻),并准许火麻油、火麻仁等相关产品销售。[0003]藏香历史悠久，主要用于西藏地区的宗教祭祀活动中，因其含有多种天然香料和医药成分，具有清心怡神、杀菌消毒的功效，在居家养生等领域的使用越来越广泛。为进一步推广藏香的使用范围和功效，新制定的《藏香》国家标准中将其定义为“以柏树等植物粉末为主，加以纯天然香料，经配制、揉搓、发酵、成型、阴干等工艺制造而成的香”,并指出其“适用于家庭、办公等场所”,这使得藏香解除了地域的限制和要求，能够在越来越多的地方生产和使用。由于国内外对待大麻政策的差别，一些不法分子将△9-THC等大麻素添加到各类燃香中，相比普遍的燃香，藏香在制作时大多会添加一种或多种香料，这使得不法分子既能利用其香味来掩盖大麻的气味，还能利用藏香点燃使用的方式进行吸食，具有极强的隐蔽性。据公安部门在近年查获的毒品案件报道中，已发现一种名为“小树枝”的燃香类新型毒品出现了滥用。[0004]当前我国尚无针对藏香中大麻的检测方法，只能使用食品、血液、尿液的标准进行检测，从而导致方法适用性差、结果偏差大和基质干扰严重等问题。此外，不同藏香在制作时还会受到原料种类、配比和制作工艺的影响，也会进一步加大检测时的不确定性，这都给侦测和识别非法添加在藏香产品中的大麻素造成了很大的影响。[0005]对此，国际上常用带有实际基质的标准样品(referencematerials)开展质量控制，还将标准样品用于实验室能力评价、量值溯源或代替标准品等领域。根据公开的资料，我国及世界各国均没有藏香中△9-THC、CBD和CBN标准物质的制备方法及标准样品，研究藏香中多种大麻素标准样品的制备方法，可提高实验室间检测分析数据的可比性，对于实验室方法可行性分析、仪器核查、人员技术水平考核、检测质量控制等实验室工作均具有重要意义。发明内容[0006]本发明的目的在于提供一种用于藏香中大麻素检测的大麻素标准样品的制备方4[0007]为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：[0008]一种用于藏香中大麻素检测的大麻素标准样品的制备方法，包括以下步骤：[0009](1)将柏树粉末和榆树皮粉末主料以及香料辅料按藏香的制备方法，经水磨法粉述案例按粉香的工艺制备；体积浓度为75%的甲醇水溶液稀释至大麻素的浓度为100mg/L,得到大麻素标准溶液；[0011](3)将大麻素标准溶液添加到制成的藏香原料泥坯中；按10kg原料泥坯加入3mL真空度20Mpa,运行时间1h后取出；[0013](5)将步骤(4)得到的样品置于阴凉干燥处置水分完全挥发，或置于40℃以下烘箱[0014](6)将步骤(5)得到的样品混匀，过筛，分装入干净玻璃瓶中，述用于藏香中大麻素检测的大麻素标准样品。[0015]进一步的，步骤(1)中主料为柏树粉末和榆树皮粉末，二者质量比为1:1,辅料为：0.5:0.5:1配置。[0016]进一步的，主料和辅料按3:1的质量配比进行混合。[0017]本发明的优点在于：[0018](1)可制备单种、多种大麻素的标准样品，还可根据需要对不同大麻素分开赋值，进而制备出满足预期含量要求的大麻素藏香标准样品，填补了该领域的空白。(2)本方法可完全按照藏香的生产工艺制备，满足用不同生产工艺制备藏香可能带来的基质偏差问题。(3)制备大麻素的标准品为有证标准物质，具有量值溯源性。(4)使用的甲醇-水溶剂能在大麻素标准品和藏香原料中起到良好的介质作用。[0019]当前对藏香中大麻素的检测存在以下问题：行检测，从而在检测时出现方法适用性差、结果偏差大和基质干扰严重等问题，缺少使用基质标准样品进行校正和比对的手段，使得在检测时无法有效的反映不同样品间的基质效[0021]2、天然的大麻植物中含有一定的大麻素，但将其添加到藏香原料中制备标准物质法单独制备只含某一种大麻素的标准样品。(2)由于大麻植物中多种大麻素的含量比固定，即使是制备同时含有三种大麻素的标准样品，也无法根据需要分开赋值(如希望获得△9-起标准样品的量值溯源性。[0022]在本发明通过将有证标准物质经溶剂转换后，添加到制作藏香的原料中，从而能5量控制外，还因使用的是有证标准物质，能够为制备后的样品提供量值溯源或直接代替标准品使用。附图说明[0023]图1为大麻素标准样品的制备流程图。具体实施方式[0024]为让本发明的上述特征和优点能更明显易懂，下文特举实施例，作详细说明。本发明的方法如无特殊说明，均为本领域常规方法。[0025]实施例1[0026]1制备流程图[0027]如图1所示。[0028]2制备方法[0029]2.1将柏树粉末和榆树皮粉末主料以及香料辅料按藏香的制备方法，经水磨法粉碎、加水搅拌、模块成型后，制成原料泥坯。其中，主料为柏树粉末和榆树皮粉末，二者质量比为1:1,辅料为：丁香、草果、桂皮、肉豆蔻、香草、草红花、木香、白檀香和青稞酒按质量比1:1:1:1.5:1:1.5:0.5:0.5:1配置，主料和辅料按3:1的质量配比进行混合。为获得良好的样品均匀性和储运的需要，下述案例按粉香的工艺制备。等有证大麻素标准品的一种或多种用甲醇溶解后，超声10min混匀，并用75%甲醇水溶液稀释至所需浓度。实际操作中将△9-THC、CBD、CBN三种大麻素均配制成100mg/L的浓度，得到大麻素标准溶液。[0031]2.3将大麻素标准溶液添加到制成的藏香原料泥坯中。实际操作中按10kg原料泥坯加入3mLCBD标准溶液、2mL△9-THC标准溶液和1mLCBN标准溶液(浓度均为100mg/L)的比例添加。[0032]2.4将上述样品充分搅拌、揉搓，静置发酵后，放入真空干燥箱中，40℃,真空度20Mpa,运行时间1h后取出。[0033]2.5将上述样品置于阴凉干燥处置水分完全挥发，必要时可置于40℃以下烘箱中加速水分挥发。[0034]2.6将上述样品混匀，过筛，分装入干净玻璃瓶中，密封保存，即制得所述用于藏香中大麻素检测的大麻素标准样品。[0035]2.7对制得的藏香基质标准样品进行均匀性、稳定性检验。[0036]2.8对制得的藏香基质标准样品进行检测和定值。[0037]2.9对制得的藏香基质标准样品进行不确定度评估。[0038]3进一步说明[0039]3.1对使用介质溶剂的说明：为使大麻素标准物质和藏香原料得到良好的结合，本发明使用甲醇-水溶液做为介质将两者进行结合。因为：(1)△9-THC、CBD、CBN三种大麻素能溶于甲醇，甲醇与水具有互溶性，而水又是制备藏香时的必需材料，因此通过甲醇-水的介质能够将大麻素与藏香原料充分、均匀的混合。(2)甲醇-水是大麻素标准品和藏香制备的原料，因此不会对目标物或基质产生影响，实验结果也证明了这一效果。(3)甲醇易挥发，在6完成样品制备后在较低温度下即可除去，既不会在制备后的样品中残留，也不会因挥发温度等对制备的样品造成影响(制备过程中使用真空干燥箱的目的即为除去残留的甲醇溶剂)。(4)甲醇毒性较低，制备和挥发去除过程不会对环境和人员造成明显伤害。[0040]3.2应用：制得的标准样品可用于：藏香中大麻素的检测；藏香样品中大麻素检测[0041]4测定方法(定值方法)[0042]4.1材料与试剂[0043]△9-THC、CBD、CBN和△9-THC-d3标准溶液(含量均为1mg/mL)购自天津阿尔塔公司；甲醇(色谱纯);0asisHLB固相萃取柱([0046]4.3标准溶液的配制[0048]内标溶液：移取适量内标溶液(△9-THC-d3),用甲醇稀释配制成1.0μg/mL,于-20℃避光保存。[0049]混合标准工作液：准确移取一定量的混合标准溶液和内标溶液，用75%甲醇水溶g/L内标)的混合标准工作曲线。溶液和10mL甲醇，涡旋混匀30s,50℃下超声提取15min,10000r/min离心5min,取5mL上清液待净化，加5mL水稀释后涡旋混匀，10000r/min离心5min,取全部上清液待净化。[0053]4.4.2样品净化[0054]其他试样：将待净化液转移至事先用5mL甲醇和5mL水活化过的HLB固相萃取小柱中，待其自然重力流出后，用5mL50%甲醇水溶液淋洗小柱，弃去全部淋洗液并减压抽干[0057]色谱柱：HP-5MS毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm);进样口温度290℃;进样量1.0μL;进样方式：不分流进样；载气：高纯氦气(99.999%);流速：恒定流量1.5mL/min;升温程序：初始70℃,保持2min,以10℃/min升至180℃,再[0058]4.5.2质谱条件[0059]电子轰击电离(electronionization,EI源);电离能量：70eV;离子源温度：310表1。7[0060]表1三种大麻素及内标质谱参数[0062]4.6分析结果[0063]对检测结果采用方法学分析，通过标准曲线、检出限、定量限、准确度和精密度判断方法的稳定性和灵敏度。结果表明，该方法在20.0～500.0μg/kg范围里呈现良好的线性，相关系数均大于0.998,方法的检出限和定量限分别为6μg/kg和20μg/kg,对1、2、10倍定量限的加标结果表明，三种大麻素的回收率在72.3～108.1%,精密度RSD在6.9%～11.7%,方法准确度和精密度良好，能够满足分析要求。表23种大麻的回归方程、相关系数、检出限和定量限666表33种大麻素在添加回收率和相对标准偏差(n=6)5均匀性检验5.1样品制备随机称取制备后的藏香大麻素标准样品600g,分装入密封棕色玻璃瓶中，共30瓶，每瓶约20g。随机抽取10瓶用于均匀性检验。另取10瓶置于室温(20±5)℃,10瓶置于冷藏(4±2)℃保存，用于稳定性试验。[0072]5.2检验方法[0073]参照CNAS-GL003:2018《能力验证样品均匀性和稳定性评价指南》和GB/T15000.3-2008“标准样品工作导则(3)标准样品定值的一般原则和统计方法”中对“均匀性研究”的要求，采用单因素方差分析(F检验)法，对制备后的样品进行均匀性检验。随机抽取10份制备好的样品，每份样品在重复性条件下测定2次，计算F值，并用95%置信区间查F分布临界值F₀.05,当样品的F<F。05时，表明样品内和样品间无显著性差异，结果见表4。均匀性检验的结果表明，制备的样品中三种大麻素浓度都是均匀的。8[0074]表4标准样品均匀性检测数据及统计结果测试值1,测试值2,测试值1,测试值2,测试值1,测试值2,123456789样品间9样品内样品间9样品内样品间9样品内[0077]6稳定性检验[0078]参照CNAS-GL003:2018《能力验证样2008“标准样品工作导则(3)标准样品定值的一般原则和统计方求，使用与均匀性检验相同的人员、设备、方法和实验条件，将均匀性测定结果的均值做为参考值，采用t检验法，对制备后的样品进行稳定性检验。