小鼠镇痛实验

12

小鼠镇痛药效实验小鼠热甩尾试验（tail-flick

test）小鼠福尔马林试验（writhing

test）1.1

任务和目的掌握和熟悉感觉生理中重要的组成—痛觉的基本原理；学习痛觉与镇痛实验的方法；观察腹腔注射吗啡在两个动物模型中的镇痛作用1.2

原理—疼痛的分级世界卫生组织将疼痛程度划分为：0度：不痛；1度：轻度痛，为间歇痛，可不用药;2度：中度痛，为持续痛，影响休息，需用止痛药；3度：重度痛，为持续痛，不用药不能缓解疼痛；4度：严重痛，为持续剧痛伴血压、脉搏等变化。1.2

原理—疼痛的分级江湖传说第1级：蚊子叮咬第2级：打过麻药后动手术第3级：情人间友好的打情骂俏第4级：父母恨铁不成钢的打骂第5级：用巴掌抽打，留下红色掌印第6级：不注意饮食引起的肠胃炎，肚子痛第7级：用棍棒打，留下黑紫色印记第8级：各种方式引起的大面积流血性外伤

第9级：皮肉之苦，老虎凳、扎竹签、红烙铁第10级：造成肢体残疾，如打仗中受伤被炸掉手指第11级：内脏痛，第12级：女性分娩时的感觉1.2

原理—痛觉生理研究的重要性据报道，全世界约有1/3的人都在忍受持续或周期性疼痛的折磨，而美国每年在解决疼痛相关社会问题的花费大约是1000亿美元。自20世纪90年代开始，我国每年有400万癌症患者，目前有增加的趋势，每年有50％的患者死亡，大部分患者曾出现中、重度疼痛。1.2

原理—不同类型疼痛的机制引自Scholz

J,

Woolf

CJ.

Can

we

conquer

pain?Nat

Neurosci.2002,5:1062-7.1.2

原理—不同类型疼痛的机制引自Scholz

J,

Woolf

CJ.

Can

we

conquer

pain?Nat

Neurosci.2002,5:1062-7.1.2

原理—不同类型疼痛的机制引自Scholz

J,

Woolf

CJ.

Can

we

conquer

pain?Nat

Neurosci.2002,5:1062-7.1.2

原理—不同类型疼痛的机制1.2

原理—镇痛药效研究的实验原理镇痛药效研究常采用一些筛选实验，其主要原理是对实验动物施加引起疼痛的刺激引起痛反应，观察药物对痛反应的影响以定量疼痛，较客观的评价药效。痛刺激方法很多，概括起来可分为物理（热、电、机械）性和化学性两大类。所引起的反应也各不相同，主要有反射性退缩（Reflectivewithdrawal）、利于逃避刺激的姿势、强力逃避行为（如跑动、跳跃）和延长的保护性活动（如舔、咬、挣扎）等等。小鼠甩尾实验热板法1.3 实验技术—热刺激的痛觉检测方法1.3 实验技术—热刺激的痛觉检测方法光热甩尾法1.3 实验技术—化学刺激的痛觉检测方法1.3 实验技术—机械刺激的痛觉检测方法压痛仪1.4

实验内容小鼠热浴甩尾（tail-flick

test）福尔马林试验（formalin

test）在本实验中主要是利用热浴甩尾和福尔马林（化学刺激、延长的保护性活动）试验来评价吗啡的镇痛药效。1.4

实验内容—热浴甩尾热水浴甩尾法：昆明系小鼠，体重20±2g，环境温度20±1℃，把水浴锅温度调至48±0.5℃，给药前先测定基础甩尾阈(3~6s)，测3次，过于敏感或迟钝的小鼠弃去不用。腹腔(i.p.)注射各种药物（200uL），测定给药后5、10、20、30、40、50、60分钟时的甩尾潜伏期。为防止烫伤，浸入时间不超过15s

（cut-off时间）。对照组注射同样体积的生理盐水.结果计算按如下等式：MPE(%)percentage

of

maximal

possibleeffect=100×[(post-drug

response−baselineresponse)/(cut-offresponse−baseline

response)]。原始数据转换为0-60分钟的曲线下面积（area

under

the

curve，AUC），并用于统计分析。1.4

实验内容—热浴甩尾实验的具体分组，每组5只小鼠：No.1-2腹腔注射生理盐水对照，测定给药后5、10、20、30、40、50、60分钟时的甩尾潜伏期。为防止烫伤，浸入时间（cut-off时间）不超过15s。No.3-5

腹腔注射200

uL的的吗啡溶液（最终浓度为

1、2.5、5mg/kg），测定给药后5、10、20、30、40、50、60分钟时的甩尾潜伏期。为防止烫伤，浸入时间（cut-off

时间）不超过15

s。1.4

实验内容—热浴甩尾1.4

实验内容—福尔马林试验称量小鼠的体重，用于注射福尔马林的后右脚掌进行标记，以便于行为学反应观察；将小鼠放入大玻璃烧杯（1500或2000

mL）中，让它适应环境10－15min；下面放置倾斜30度的镜子，以便于观察小鼠的足部反应；配好药物：空白溶剂对照（生理盐水）和吗啡溶液（1、2.5、5mg/kg）200μL；在注射福尔马林溶液前15min提前腹腔注射生理盐水和待测的药物；然后迅速将小鼠放回玻璃大烧杯中；1.4

实验内容—福尔马林试验在腹腔注射后15

min，将小鼠取出，将小鼠装入小纸筒或用手轻柔的抓住后，在其标记的后右脚掌的脚底中间皮肤下用微量进样器注射20uL的福尔马林溶液，迅速放回烧杯中；开始计时，并在注射后30

min记录小鼠的行为学反应，记录不同时相每五分钟内舔、抖被注射足时间为疼痛指标；重复以上实验操作，直至获得所需的实验动物只数。1.4

实验内容—福尔马林试验实验的具体分组，每组5只小鼠：No.1腹腔不注射任何药物，按照实验步骤1-5操作，来熟悉一下实验，并观察小鼠的行为学反应，以便于分级评价。No.2提前15

min腹腔注射空白溶剂对照，按照实验步骤1-5操作来观察生理盐水对脚掌注射福尔马林溶液小鼠的行为学影响，按照第二种记录方法来记录，记录0-30分钟内每五分钟内舔或抖的时间。No.3-5提前15min腹腔注射200uL的吗啡溶液（1、2.5、5mg/kg），按照实验步骤1－5操作来观察吗啡对脚掌注射福尔马林溶液小鼠的行为学影响，记录同学按照第二种方法来记录；1.4

实验内容—福尔马林试验Peptides

31

(2010)

1878–1883每2min的记录一次（记录每2min中的第一个1

min），共记录40

minNeuroscience

157

(2008)

214–222前10分钟

后20分钟记录0-30分钟每五分钟内舔或抖的时间1.4

实验内容术后观察手术后保持体温恒定直至苏醒，并注射青霉素10万单位/只大鼠预防感染；摄食量的测定手术后每天测定一次它