巨噬细胞功能可塑性研究全流程抗体服务

武汉尚恩生物支持巨噬细胞功能可塑性研究全流程抗体服务巨噬细胞是由单核细胞（Monocyte）分化而来的，广泛分布于全身各组织器官中，根据其所处的组织环境，有不同的名称（如肝脏中的库普弗细胞、肺中的肺泡巨噬细胞等）。巨噬细胞具有吞噬作用(Phagocytosis)、抗原呈递(AntigenPresentation)、免疫调节(ImmuneRegulation)、组织修复与重塑(TissueRepairandRemodeling)等多种功能，是免疫系统重要的中的“多面手”，其极化状态决定了它在不同生理和病理条件下扮演的角色。极化是指巨噬细胞在不同的微环境刺激下，会表现出不同的功能状态和分子特征的现象，这种极化是一个动态的过程，并非非此即彼的绝对状态，而是一个连续的谱系。巨噬细胞极化主要分为：经典激活(ClassicalActivation-M1型)：M1型极化主要由干扰素-γ(IFN-γ)和脂多糖(LPS)等病原体相关分子模式（PAMPs）或促炎细胞因子刺激诱导，高表达促炎细胞因子，如TNF-α(肿瘤坏死因子-α)、IL-1β(白细胞介素-1β)、IL-6(白细胞介素-6)和IL-12/23(白细胞介素-12/23)。它们主要发挥促炎和抗肿瘤作用，具有强大的吞噬和杀伤病原体及肿瘤细胞的能力，同时能招募和激活其他免疫细胞，形态通常表现为阿米巴样或不规则的圆形，伪足丰富，具有很强的运动能力。替代性激活(AlternativeActivation-M2型)：M2型极化主要由IL-4、IL-13等Th2型细胞因子或糖皮质激素（如地塞米松）刺激诱导，高表达抗炎和组织修复相关的细胞因子，如IL-10(白细胞介素-10)、TGF-β(转化生长因子-β)。它们主要参与组织修复、血管生成和免疫抑制，它们还能清除凋亡细胞，促进组织再生，并抑制过度的炎症反应，形态通常表现为圆形或椭圆形，伪足较少。在肿瘤微环境中，还存在肿瘤相关巨噬细胞（Tumorassociatedmacrophages，TAM）,其极化状态主要受肿瘤微环境（如IL-4、IL-10、TGF-β等因子）调控，绝大多数TAMs呈现M2样表型（即M2型的促肿瘤亚型），属于M2型在肿瘤场景下的“功能特化亚型”。研究巨噬细胞时，细胞极化实验的意义非常核心，它是理解巨噬细胞“功能可塑性”与病理生理机制的关键。体外诱导巨噬细胞主要通过两种方式进行：外周血单核细胞诱导为巨噬细胞，然后再诱导极化；单核细胞系（THP-1、U937）诱导为巨噬细胞后再诱导极化，或巨噬细胞系（Ana-1、RAW264.7）直接诱导极化。其本质区别在于前者采用原代外周血单核细胞诱导，细胞功能相对更接近体内环境，缺点就是条件控制不好的话重复性会较差同时原代细胞获得和体外培养成本会更高；而后者采用细胞系，细胞获得和培养难度低，重复性好但实际细胞少部分功能可能和体内略有差异。极化方案：一：人外周血单核细胞M1/M2极化（仅供参考）实验方案：①使用Ficoll分离液从外周血中分离PBMCs。②通过CD14单核细胞磁珠分选试剂盒富集单核细胞，或将10-20x10⁶PBMC种在2ml无血清培养基中，2-3小时后洗去未黏附细胞，获得约1x10⁶个单核细胞。③在6孔板中加入含M-CSF（50ng/ml）的培养基，将单核细胞浓度调整为1-2x10⁶/ml，诱导分化为巨噬细胞。④3天后吸出1ml培养基，补充1ml新鲜培养基。⑤6天后诱导M1和M2极化，分别添加LPS（10ng/ml）和IFN-γ（50ng/ml）或IL-4（20ng/ml），刺激18-20小时。⑥最后通过流式细胞术检测M1、M2相关Marker的表达。二：细胞系M1/M2极化（以THP-1为例，仅供参考）人单核细胞系THP-1的定向分化是研究巨噬细胞的重要体外模型。常用佛波酯PMA、粒细胞巨噬细胞刺激因子GM-CSF和巨噬细胞集落刺激因子M-CSF等细胞因子来激活THP-1细胞。实验方案：①细胞培养：在RPMI-1640培养基中培养THP-1细胞，添加10%FBS。②诱导分化：使用25nM的类维生素D3或phorbol12-myristate13-acetate（PMA）处理细胞，48小时。③M1/M2极化：M1极化：添加IFN-γ和LPS，培养24至48小时。M2极化：添加IL-4和IL-13，培养24至48小时。④检测：通过流式细胞术或qPCR分析极化后的细胞标志物。巨噬细胞流式抗体：尚恩生物流式抗体产品采用国内外高分文献同样克隆号的抗体为原料，进口荧光染料通过优化工艺高效标记，有效保障了流式抗体特异性、灵敏度、稳定性、荧光强度等基础参数，实验结果可重复性、认可度都同时得到保障，实际使用