《广东省铁皮石斛种苗繁育技术规程》

T/GDSMMXXXX—XXXX

广东省铁皮石斛种苗繁育技术规程

1范围

本文件规定了铁皮石斛种苗繁育过程中的环境及器具消毒、培养基制备、外植体前处理和表面消毒、

初代培养、芽增殖培养、芽伸长和壮苗培养、生根培养、炼苗和移栽、移栽后管理病虫害防治、包装、

运输和档案管理。

本文件适用于广东省区域内铁皮石斛种苗的繁育。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB5084农田灌溉水质标准

GB/T6001育苗技术规程

GB/T8321（所有部分）农药合理使用准则

LY/T1000容器育苗技术

LY/T2700花木栽培基质

NY/T496肥料合理使用准则通则

NY/T1107大量元素水溶肥料

NY/T1276农药安全使用规范总则

NY/T2306花卉种苗组培快繁技术规程

DB37/T3852铁皮石斛培育指南组培育苗

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

铁皮石斛DendrobiumofficinaleKimuraetMigo

为兰科（Orchidaceae）石斛属（DendrobiumSw.）植物铁皮石斛。

铁皮石斛种子seedsofDendrobiumofficinale

铁皮石斛经过传粉受精，胚珠发育成种子。铁皮石斛种子很小，呈黄色，无胚乳。

外植体explant

参照NY/T2306。

消毒disinfection

参照NY/T2306。

灭菌sterilization

参照NY/T2306。

接种inoculation

参照NY/T2306。

增殖培养proliferationculture

1

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将诱导的不定芽接种到增殖培养基上进行培养，增殖出较多的不定芽

4环境及器具灭菌

准备室消毒

准备室地面用巴氏消毒液拖地消毒，空间喷洒75%酒精消毒，保持干净。

接种室消毒

接种室用紫外灯照射30min消毒。接种前开启超净工作台紫外灯20min～30min后方可进行操作。

超净工作台使用时用75%酒精擦拭台面清洁消毒。超净工作台内过滤膜定期检查，清洗，更换，并在使

用超净工作台过程中严格按照操作规程进行操作，确保超净工作台安全使用。

培养室消毒

培养室采用二氧化氯组培室专用消毒剂定期熏蒸消毒。

接种器械消毒

接种之前，接种的剪刀、镊子和解剖刀器械用报纸包好后高温高压进行消毒，接种过程中，在酒精

灯上灼烧或在高温消毒器内进行消毒。

5培养基制备

基本培养基的选择

选择MS培养基为基本培养基。

母液的配制

5.2.1配制培养基前，先配制培养基母液。大量元素配制10倍，二水氯化钙单独配制。微量元素配制

1000倍，有机元素配制100倍，铁盐配制200倍，具体参数见附录A。

5.2.2植物生长调节剂一般配制浓度为1mg/mL的母液，具体参数见附录B。

母液的保存

母液配制好后贴上标签，标签信息包括名称、配制时间、配制人、浓度、倍数，放入4℃冰箱保存

备用。使用前观察有无沉淀或长菌情况,若有异样，须及时重新配制。

培养基的配制

5.4.1准备

5.4.1.1实验材料：烧杯，玻璃棒，移液管，标签纸，记号笔，蒸馏水，洗耳球，钥勺，培养瓶，PH

试纸。

5.4.1.2实验试剂：配制的MS培养基母液。

5.4.1.3植物生长调节剂母液：6-BA，IBA，琼脂粉，蔗糖。

5.4.1.4调试仪器设备：移液器，电子天平，电炉，电磁炉，微波炉，灌装机，高压灭菌锅。

5.4.2称量

称取蔗糖30g/L，琼脂粉6g/L～7g/L,用700mL蒸馏水加热溶解至澄清。

5.4.3量取母液

根据MS母液的倍数及配制培养基的体积，量取母液，具体吸取量见附录A。根据配制培养基的配方，

体积及植物生长调节剂浓度吸取细胞分裂素和生长素。

5.4.4混合

2

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将吸取的母液与溶解的蔗糖和琼脂粉混合。

5.4.5定容

加蒸馏水将培养基定容至配制体积。

5.4.6调PH

充分搅拌后，用1mol/L盐酸溶液或1mol/L氢氧化钠溶液调节PH为5.8～6.0。

5.4.7分装

将培养基均匀的分装到培养瓶中，一般培养基的厚度为1.0cm～1.5cm，避免培养基粘到培养瓶壁。

5.4.8密封

将培养瓶用盖子进行密封。

5.4.9灭菌

培养瓶放入高压灭菌锅中进行高温高压灭菌，温度为121℃，压力为0.11kPa，灭菌时间为20min～

30min。

5.4.10冷却

培养基冷却凝固后，放入接种室备用。

6外植体前处理

采集无病虫害的铁皮石斛藤条，去掉叶片，将藤条修剪为1.5cm～2.5cm小段，用洗洁净或洗衣粉

清洗10min，再用流水冲洗1h。

7外植体表面消毒

将冲洗干净的小段藤条用1:100的84消毒液浸泡并摇动10min，在75％酒精中浸泡30s，无菌水清洗

3次，浓度为0.1%二氯化汞溶液浸泡消毒时间8min～10min，无菌水清洗4次。

8初代培养

取经过表面消毒的小段藤条，将其上面的侧芽或顶芽切掉，切成大小约0.5cm×0.5cm作为外植

体，插入接种到诱导培养基上进行芽的诱导培养。

初代培养条件：置于培养室内，培养温度(25±2)℃，暗培养30d，诱导出不定芽。

诱导培养基的具体成份及含量：改良MS培养基+0.5mg/L6-BA+0.1mg/LIBA+2g/LPVP+30g/L

蔗糖+6g/L～7g/L琼脂粉。诱导培养基的pH为5.8～6.0。

9芽增殖培养

将铁皮石斛藤条上的侧芽或顶芽诱导的无菌芽，接于芽增殖培养基上进行增殖培养。

增殖培养条件：置于培养室内，培养温度(25±2)℃、光照1800LX～2500LX、光照时间12h/d。

培养30d，诱导出“多芽体”。

增殖培养基的成份及其含量为：MS培养基+0.2mg/L6-BA+0.1mg/LIBA+30g/L蔗糖+6g/L～7g/L

的琼脂粉。增殖培养基的pH为5.8～6.0。

10芽伸长和壮苗培养

3

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将增殖出的多芽切分后，每组含有2个～3个芽，转移到芽伸长和壮苗培养基进行芽的伸长培养。

芽伸长和壮苗培养条件：置于培养室内，培养温度(25±2)℃、光照1800LX～2500LX、光照时间

12h/d，培养30d。

芽伸长和壮苗培养基的成份及其含量为：MS培养基+0.1mg/L6-BA+0.1mg/LIBA+8%～10%椰子汁

+30g/L的蔗糖+6g/L～7g/L的琼脂粉。芽伸长和壮苗培养基的pH为5.8～6.0。

11生根培养

将伸长约2cm～3cm不定芽切掉后转入生根培养基，诱导根系产生。

生根培养的条件：置于培养室，培养温度(25±2)℃，光照培养30d，光照1800LX～2500LX、光

照时间12h/d。

生根培养基的成份及其含量为：改良MS培养基+0.5mg/LIBA+30g/L蔗糖+6g/L～7g/L琼脂粉。

生根培养基的pH为5.8～6.0。

12炼苗和移栽

炼苗

生根培养后，选择苗高4cm～6cm、有3片～5片叶子、根系有4条～5条、根长5cm～10cm的组

培苗，从培养室拿出到温室大棚进行炼苗，炼苗的温度为(25±2)℃、光照1500LX～2000LX。闭瓶炼

苗1周后，开瓶炼苗2d～3d。

洗苗

将组培苗小心从组培瓶里面出，尽量避免伤其根系，洗干净根系上的培养基。用0.1%多菌灵溶液

浸泡根部30s～60s。

炼苗基质

选用泥炭土:园土:珍珠岩=1:1:1混合的栽培基质。栽培基质符合LY/T2700的规定。

苗杯

选择直径为8cm,深度为8cm的普通的圆形塑料育苗杯进行育苗。苗杯符合LY/T1000的规定。

填装基质

将混合好的基质转入苗杯里面，并浇水使基质湿润。灌溉水符合GB5084的规定。

移栽

将组培苗小心的栽植于苗杯中，栽植深度以根系上部覆盖基质1cm～2cm为宜，每杯1株。栽植后浇

透水为“定根水”。

13移栽后管理

13.1.1生长环境

移栽前期保持环境温度在20℃～25℃，湿度在85%左右。定期浇水保持基质湿润，保持基质水分在

30%～50%。前期适当遮荫，15d后恢复正常自然光照。

13.1.2施肥

根据组培苗的长势，每隔20d，可补浇含氮磷钾(N15-P15-K15)或(N20-P20-K20)的水溶性肥料600

倍～800倍液。水溶性肥料符合NY/T1107的规定。

4

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13.1.3病虫害防治

苗期病害以预防为主，综合防治。视情况每隔15d喷洒50%多菌灵可湿性粉剂800倍液～1000倍液。

苗期虫害，一般使用BT生物杀虫剂进行防治。施用农药应符合GB/T8321(所有部分的规定）。

14出苗

当组培苗的根系发达，高度在20cm以上，叶片为3片～4片，无病虫害时可移至大田栽植。

15设施建设

育苗基地建设

智能温室、连栋塑料大棚或简易拱棚均可用于铁皮石斛种苗繁育或培育。大棚内温湿度要符合铁皮

石斛育苗条件。

整地

大棚内铁皮石斛种苗繁育要选择富含有机质的腐殖土（有机质含量20%～30%），深翻土壤15cm～

25cm。播种前起垄作床，床宽120cm～130cm，高15cm～25cm，床面平整细耙，压实。

施肥管理

播种后用喷雾器向苗床表面均匀喷水，保持苗床湿润。出苗后每天淋水1次，保持土壤水分，并施

0.3%磷酸二氢钾，施肥量为800mL/m2～1000mL/m2。所使用肥料符合NY/T496的规定。

16扦插繁育

扦插条选择

选择生长发育正常，芽饱满充实，无病虫害的铁皮石斛嫩枝作为扦插穗条。

扦插条采集时间

扦插条采集时间为1月份～2月份。

扦插条剪取

按DB37/T3852执行。

扦插条生根处理

插穗基部在50mg/L的NAA或IBA溶液中浸泡3h～5h。

扦插

16.5.1基质配制及消毒

选择珍珠岩、蛭石、泥炭土等基质，以1:3:6混合配比配制扦插育苗基质。扦插前6d～7d，喷洒质

量浓度为0.3%～0.5%的高锰酸钾溶液进行基质消毒，用药量为20kg/m2～25kg/m2。苗床直接育苗，其基

质厚度为12cm～16cm。如容器育苗可采用无纺布等可降解材料的容器，并将基质装袋，以备扦插育苗。

16.5.2扦插时间

扦插条剪取，生根处理后及时进行扦插育苗。

16.5.3扦插方法

扦插条扦插可采用锥孔苗床直插方法或采用容器扦插育苗方法，插后压实基质。

16.5.4扦插深度与密度

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苗床育苗深度为6cm～8cm；株行距以12cm×15cm为宜。

16.5.5容器规格

容器扦插育苗宜采用高度12cm～15cm、直径为8cm～12cm的容器。

17田间管理

种子播种繁育基地田间管理

17.1.1土壤改良

根据土壤有机质含量、矿物质含量、微生物种类和丰度进行土壤改良。

17.1.2灌溉

采用滴灌和喷管，提高水分利用率。

17.1.3有机肥

选择颗粒度较小，完全腐热的有机肥或0.3%～0.5%的尿素、0.3%～0.4%的磷酸二氢钾。当铁皮石斛

种苗有3片～4片真叶时开始施肥，施肥时距离种苗分布5cm～10cm，少量多次。

17.1.4除草

人工除草为主，及时除草，便于铁皮石斛种苗通风。

17.1.5病虫害防治

以“预防为主，综合防治”为原则，加强田间管理，及时清楚枯枝和落叶。使用化学防治时，应严格

按照GB/T8321和NY/T1276的规定执行。铁皮石斛苗木主要病虫害综合防治见附录C。

扦插繁育基地田间管理

17.2.1喷水

扦插后要适时喷水，保持基质含水量30%～50%。

17.2.2遮阳

扦插后进行遮阳，可使用遮光率为70%～80%的遮光网进行遮阳。

17.2.3病害防治

同17.1.5。

18炼苗、移栽

炼苗

种子播种100d后进行炼苗；扦插40d～60d后进行炼苗。

移栽方法

裸根苗移栽前修去多余枝、过长根及损伤根。移栽时尽量保留根际周围基质，防止根系损伤和失水，

不窝根，栽正，踏实，栽后立即浇透水。容器苗可直接移栽至大田。

移栽苗密度

依苗木生长状况、苗龄、管理方式而定，移栽株行距以30cm×60cm为宜。

移栽苗田间管理

苗木定植后立即灌足水，根据苗木生长状况进行浇水、中耕除草、追肥、防治病虫害、除蘖抹芽等。

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19起苗、包装、运输和档案管理

按GB/T6001标准执行。

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A

A

附录A

（资料性）

MS培养基母液配方

给出MS培养基母液的配方。

表A.1MS培养基母液配方表

类别成分规定量/mg扩大倍数/mL母液体积/mL称量/mg吸取量/ml

NH4NO3165016500

KNO3190010100019000100

大量元素

KH2PO41701700

MgSO4.7H2O3703700

CaCl2.2H2O4401010004400100

KI0.83830

CoCl2.6H2O0.02525

H3BO36.26200

微量元素

CuSO4.5H2O0.02510001000251

MnSO4.4H2O22.322300

ZnSO4·7H2O8.68600

Na2MoO4·2H2O0.25250

盐酸硫铵素0.15

盐酸吡哆醇0.525

有机元素

烟酸0.51005002510

肌醇1005000

甘氨酸2.0100

Na2-EDTA37.257450

铁盐20010005

FeSO4·7H2O27.855570

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B

B

附录B

（资料性）

常用的植物生长调节剂配制

给出常用的植物生长调节剂配制方法。

表B.1常用的植物生长调节剂配制

类别种类配制方法常配制浓度

6-BA

KT

用少量1mol/LNaOH溶解或用1mol/LHCl溶解后，

细胞分裂素TDZ

再用蒸馏水定容

ZT

CPPU1mg/mL

IAA

NAA用少量1mol/LNaOH溶解后，再用蒸馏水定容

生长素

IBA

2,4-D用95%酒精溶解后，再用蒸馏水定容

赤霉素GA3用95%酒精溶解后，再用蒸馏水定容

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C

C

附录C

（资料性）

铁皮石斛种苗病虫害防治

给出铁皮石斛种苗主要病虫害的种类及防治方法。

表C.1铁皮石斛种苗病虫害防治

病虫害种类生物防治或物理防治化学防治

1.及时维护清理种苗繁育基地水渠，避免在基地

铁皮石斛根腐用多菌灵、硫酸铜或甲基硫菌灵等药剂进行防

内出现大量积水情况。2.如发现根部腐烂情况，

病治。按照农药说明书进行科学合理施用。

病害及时清除整株铁皮石斛种苗。

铁皮石斛叶枯1.及时清除带有叶枯病的种苗。2.加强水肥管用代森锰锌、氰笨唑或丙环唑等药剂进行防治。

病理。按照上述农用使用说明书科学合理使用。

铁皮石斛黄化1.做好排水，消除积水现象。2.做好松土除草，

在育苗过程中适当补充钙镁磷和0.2%硫酸亚铁。

病加强土壤疏松透气。3.做好土壤虫害防治工作。

1.一般每年4月份～8月份发生，发生虫害初期，1.用15%～20%丁硫克百威乳油800倍～1000倍药

铁皮石斛茶黄

应及时清除发病种苗，集中烧毁。2.在种苗基地液喷雾防治。2.育苗前用速效杀丁3000倍药液喷

虫害蓟马

内插粘虫黄斑洒地面。

1.利用大蚕蛾的趋光性特点，成虫羽化盛期用黑喷施50%杀螟松乳油800倍液或80%敌敌畏乳油

铁皮石斛大蚕

光灯进行捕杀。2.可利用大蚕蛾天敌进行生物防1000倍液或50%敌百虫1000倍液。按照上述农用

蛾

治。使用说明书科学合理使用。

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ICS65.020.20

CCSA017

GDSMM

团体标准

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广东省铁皮石斛种苗繁育技术规程

TechnicalRegulationsforbreedingofDendrobiumofficinaleseedlingsin

GuangdongProvince

（征求意见稿）

在提交反馈意见时，请将您知道的相关专利连同支持性文件一并附上。

XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施

广东省种子协会发布

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广东省铁皮石斛种苗繁育技术规程

1范围

本文件规定了铁皮石斛种苗繁育过程中的环境及器具消毒、培养基制备、外植体前处理和表面消毒、

初代培养、芽增殖培养、芽伸长和壮苗培养、生根培养、炼苗和移栽、移栽后管理病虫害防治、包装、

运输和档案管理。

本文件适用于广东省区域内铁皮石斛种苗的繁育。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB5084农田灌溉水质标准

GB/T6001育苗技术规程

GB/T8321（所有部分）农药合理使用准则

LY/T1000容器育苗技术

LY/T2700花木栽培基质

NY/T496肥料合理使用准则通则

NY/T1107大量元素水溶肥料

NY/T1276农药安全使用规范总则

NY/T2306花卉种苗组培快繁技术规程

DB37/T3852铁皮石斛培育指南组培育苗

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

铁皮石斛DendrobiumofficinaleKimuraetMigo

为兰科（Orchidaceae）石斛属（DendrobiumSw.）植物铁皮石斛。

铁皮石斛种子seedsofDendrobiumofficinale

铁皮石斛经过传粉受精，胚珠发育成种子。铁皮石斛种子很小，呈黄色，无胚乳。

外植体explant

参照NY/T2306。

消毒disinfection

参照NY/T2306。

灭菌sterilization

参照NY/T2306。

接种inoculation

参照NY/T2306。

增殖培养proliferationculture

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将诱导的不定芽接种到增殖培养基上进行培养，增殖出较多的不定芽

4环境及器具灭菌

准备室消毒

准备室地面用巴氏消毒液拖地消毒，空间喷洒75%酒精消毒，保持干净。

接种室消毒

接种室用紫外灯照射30min消毒。接种前开启超净工作台紫外灯20min～30min后方可进行操作。

超净工作台使用时用75%酒精擦拭台面清洁消毒。超净工作台内过滤膜定期检查，清洗，更换，并在使

用超净工作台过程中严格按照操作规程进行操作，确保超净工作台安全使用。

培养室消毒

培养室采用二氧化氯组培室专用消毒剂定期熏蒸消毒。

接种器械消毒

接种之前，接种的剪刀、镊子和解剖刀器械用报纸包好后高温高压进行消毒，接种过程中，在酒精

灯上灼烧或在高温消毒器内进行消毒。

5培养基制备

基本培养基的选择

选择MS培养基为基本培养基。

母液的配制

5.2.1配制培养基前，先配制培养基母液。大量元素配制10倍，二水氯化钙单独配制。微量元素配制

1000倍，有机元素配制100倍，铁盐配制200倍，具体参数见附录A。

5.2.2植物生长调节剂一般配制浓度为1mg/mL的母液，具体参数见附录B。

母液的保存

母液配制好后贴上标签，标签信息包括名称、配制时间、配制人、浓度、倍数，放入4℃冰箱保存

备用。使用前观察有无沉淀或长菌情况,若有异样，须及时重新配制。

培养基的配制

5.4.1