王东琦课件步长脑心通调脂抗炎症保护内皮功能和抗动脉粥样硬化的系列研究

步长脑心通调脂-抗炎症-保护内皮功能和抗动脉粥样硬化的系列研究

西安交通大学医学院第一附属医院王东琦1.动脉粥样硬化的进程ModifiedfromPepine,CJ,AmJCard,1998急性心肌梗死缺血性中风/短暂性脑缺血不稳定心绞痛泡沫细胞脂质条纹中间阶段损伤动脉粥样化纤维斑块复合病变破裂

从十几岁开始

从30岁开始

从40岁开始

主要为脂肪积聚平滑肌细胞和胶原栓塞出血内皮功能不全周围血管疾病心脏猝死稳定性心绞痛无临床症状极高危2.Lipidloweringwithstatins

UpToDate

13.3Sep1,2005

调脂粑目标的目的是AS-CHD-SCD动脉粥样硬化的发病机制和危害性3.

动脉粥样硬化

脂代谢紊乱学说

调脂治疗--脂代谢平衡LDL-oxLDL-foamcell

平滑肌移行泡末细胞形成T细胞激活血小板

粘附聚集白细胞

粘附侵入4.

动脉粥样硬化内皮功能障碍学说

1975-1993RossR创立

动物模型-球囊损伤血管内皮

循环中的单核细胞血管腔血管腔内的LDL内皮细胞细胞介导性氧化修饰oxLDL泡沫细胞平滑肌细胞内皮下内皮损伤内皮功能障碍内皮下单核细胞-巨吞噬细胞泡沫细胞坏死-屏障功能：血管内与内皮下组织之间的屏障作用；-分泌功能：分泌NO–ET，促凝－抗凝等；-调节功能：调节血管的收收缩和舒张，调节血压；5.动脉粥样硬化慢性炎症学说

1999RossR创立

动物模型–

衣原体感染

RossR.Atherosclerosisisaninflammatorydisease.NEnglJMed.1999;340:115-126.慢性炎症引起内皮的损伤

高血压糖尿病高LDL/TG/TC，低HDL

吸烟肥胖少动

高龄高半胱氨酸血症高尿酸血症促凝与抗凝紊乱交感副交感紊乱衣原体感染各种病毒感染遗传因素MEF2A6.1、在各种慢性炎症和危险因素的作用下，氧化修饰的低密度脂蛋白（ox-LDLc）致使内皮损伤，内皮功能障碍。2、损伤的内皮细胞激活，使单核细胞、血小板在血管内膜表面聚集和粘附。3、炎症性单核细胞迁移进入内皮下。4、炎症细胞—单核细胞和巨噬细胞激活，刺激平滑肌细胞、产生基质金属蛋白酶（MMP）。DynamicBalanceofatherosclerosisEricJ.Topol:TextbookofCardiovascularMedicine2003;AtherosclerosisP.5-117.5、平滑肌细胞迁移进入内皮下组织,形成新的粥样斑块的纤维帽。斑块增大．6、平滑肌细胞迁移进入内皮下组织和粥样斑块的纤维帽。6-7、内皮细胞迁移并且在各种保护因素的作用下形成纤维帽。8-9、纤维帽在各种促炎症因素下破裂或损害，表面血小板聚集，形成血栓，导致急生冠脉事件。纤维帽破裂或损伤后，血栓形成，在各种保护因素的作用下，在血栓的表面形成新的纤维帽，使急性冠脉事件，得到新的平衡。DynamicBalanceofatherosclerosis:EricJ.Topol:TextbookofCardiovascularMedicine2003;AtherosclerosisP.5-118.步长脑心通中医药是中华文明的宝库，应当在动脉粥样硬化的防治中有更大的贡献。脑心通是中药复方制剂，由黄芪、丹参、川芎、地龙、水蛭等十六味药物制成，具有益气活血、化瘀通脉的功效。现代药理学证明，该药的主要成分地龙、水蛭有抗血栓形成的作用。川芎有扩管、抑制炎症反应的作用。丹参有降脂、抗炎等多种作用……步长脑心通可能在多个环节、广泛领域具有抗动脉粥样硬化的作用。我们借鉴西药研究的手段和经验研究步长脑心通抗动脉粥样硬化的作用原理，试图从西药的角度论证中医药理论，为新药研发开拓新的途径。9.动脉粥样硬化是炎性细胞（主要是单核巨噬细胞）吞噬“入侵”动脉壁的“病原性”脂蛋白即oxLDL的慢性炎症反应过程。巨噬细胞表面清道夫受体（SR）尤其是SR-A和CD36均介导巨噬细胞吞噬oxLDL。其表达量与泡沫细胞的多少及AS的发展进程有密切关系。本研究显示阿托法伐他汀明显抑制SR-A和CD36的表达，较对照组分别降低了63.3%和70.5%。脑心通则轻度抑制两者表达，并呈剂量依赖性，1g/L脑心通使CD36及SR-A表达分别降低22.3%和25%，大约是阿托伐他汀的1/3。10.

controlAtorvastatin(1μmol/L)Naoxintong(g/L)

0.1250.250.51SR-A19.67±0.045.81±0.03▲★18.82±0.02▲※17.63±0.15▲※16.75±0.01▲※14.75±0.01▲※CD3615.24±0.045.59±0.03▲★14.93±0.04▲※14.11±0.04▲※13.01±0.04▲※11.84±0.03▲※

EffectsofNaoxintongandAtorvastatinononSR-Aexpression▲P＜0.05vs.control；★P＜0.05vs.eachgroupofNXT；※P＜0.05

vs.othergroupsofNXT11.在AS慢性炎症反应过程中，IL-6和TNF-α是两个传统的细胞炎症因子，主要由单核巨噬细胞分泌。脑心通抑制IL-6和TNF-α分泌，最大抑制效果分别为1μmol/L阿托法他汀的32%和33.9%。12.

controlAtorvastatin（1μmol/L）Naoxintong（g/L）0.1250.250.51IL-6(pg/ml)700.6±1.8153.4±1.4▲▲★★624.5±1.8▲▲※※524.6±1.2▲▲※※572.4±1.4▲▲※※529.3±1.5▲▲※※TNFα(pg/ml)899.3±1.9252.4±1.1▲▲★★835.7±1.4▲▲※※802.4±1.6▲▲※※745.3±1.3▲▲※※679.5±1.7▲▲※※▲▲P＜0.01vs.control；★★P＜0.01vs.eachgroupofNaoxintong；※※P＜0.01vs.othergroupsofNaoxintong

InfluencesofNaoxintongandAtorvastatin

oncellinflammatoryreactionpromotedbyoxLDL13.VSMC增殖是AS发生、发展过程中最重要的环节之一。ox-LDL通过诱发一系列与细胞增殖有关的反应，包括增加原癌基因的表达，刺激白细胞介素-1及血小板源性生长因子的产生等，促进VSMC的增殖。本研究结果显示10mg/L的ox-LDL可刺激VSMC增殖，脑心通具有抑制ox-LDL诱导VSMC增殖的作用。14.不同药物对VSMC增殖的影响）组别剂量OD值对照——0.509±0.036*Ox-LDL10mg/mL0.733±0.033Ox-LDL+阿托伐他汀0.1mmol/L0.519±0.057*Ox-LDL+脑心通1g/L0.672±0.035**Ox-LDL+脑心通0.5g/L0.702±0.058Ox-LDL+脑心通0.1g/L0.700±0.041与ox-LDL组相比*P<0.01，**P<0.0515.血管内皮损伤及功能障碍的特征表现为由内皮细胞产生的NO水平降低及所介导的内皮依赖性血管舒张功能受损，同时伴有ET-1含量的增加。脑心通不但能够促进正常状态下的血管内皮细胞NO的表达与释放，而且能够促进损伤状态下的内皮细胞NO表达与释放，在高剂量组尤为明显，呈现出剂量依赖性的趋势和效应。说明脑心通能够促进血管内皮细胞的NO的表达释放而发挥保护性作用，16.

脑心通对ox-LDL损伤HUVEC前NO分泌量的影响

*P＜0.01vs对照组比较；**P＜0.05vs对照组比较；a

P＜0.01vs其余脑心通组比较.17.脑心通对ox-LDL损伤HUVEC后NO分泌量的影响*P＜0.01vsox-LDL组比较；**P＜0.05vsox-LDL组比较；b

P＜0.05vs其余脑心通组比较18.各组动物血脂水平的比较分组NCHLDL-CHDL-CTG高脂组

0周

8周

16周脑心通组

0周

8周

16周辛伐他丁组

0周

8周

16周20

20

20

1.62±0.13b42.35±4.21f43.28±4.14

1.87±0.13b35.71±1.29cf31.78±0.63adf

1.73±0.13d23.34±0.85d13.89±0.44d

0.87±0.10b8.43±0.838.48±0.98a

1.08±0.11b7.14±0.19cf6.62±0.26cf

0.98±0.13d4.20±0.15d4.56±0.22d

0.46±0.300.44±0.070.46±0.07

0.54±0.32b0.64±0.06cf0.74±0.08adf

0.49±0.37a0.89±0.04d1.01±0.05d

1.04±0.18b2.81±0.502.69±0.53

1.14±0.23b2.35±0.38ae2.43±0.39e

0.89±0.25a1.09±0.12e1.07±0.12ea为p＜0.05，b为p＜0.01，与8周时相比较;c为p＜0.05,d为p＜0,01,与高脂组相比较;e为p＜0.05,f为p＜0,01,与辛伐他汀组相比较19.图C图B图A肉眼观察可见高脂组腹主动脉内膜苏丹Ⅳ染色显示阳性区广泛,有明显粥样斑块形成,

脂质斑块增厚卷曲，弥漫至整个腹主动脉管壁。脑心通治组可见斑块成颗粒状，较薄，面积虽多辛伐他汀组，但显著少于高脂组。兔腹主动脉苏丹Ⅳ染色（1×）A为高脂组，B为脑心通组，C为辛伐他汀组。红色区为粥样脂纹和斑块。20.图A图B图C40倍40倍40倍可见高脂组粥样斑块形成，内皮细胞消失，粥样斑块明显增厚，大量无定形坏死物聚集，并可见灶状泡沫细胞及炎细胞浸润，病变累及肌壁浅肌层（图A）。脑心通组斑块厚度较辛伐他汀组增厚，但明显较高脂组薄，由少量泡沫细胞聚集，肌层及外膜无明显异常（图B）。辛伐他汀组斑块最少。