消毒与灭菌课件

第一节概述第二节物理方法第三节化学方法第四节高压蒸汽灭菌法的灭菌效能验小结

第三章消毒与灭菌第一部分

微生物基础知识概念灭菌消毒防腐相同点不同点微生物范围程度敏感菌用理化方法所有病原性杀死杀死防止或抑制生长繁殖第一节概述消毒灭菌有关概念2026/2/5无菌操作：防止微生物进入机体或对象的方法，称无菌操作。无菌：在物体上或容器内没有活的微生物存在。消毒灭菌方法物理方法热力法辐射杀菌法过滤除菌法其他化学方法醛类、醇类、酚类、含氯消毒剂、过氧化物、环氧乙烷等一、热力灭菌法原理：使微生物蛋白质变性凝固，酶失活核糖体解体破坏细胞膜的结构微生物体内的DNA断裂热力灭菌法干热灭菌法湿热灭菌法第二节物理方法（一）干热灭菌法方法条件效果适用范围焚烧焚烧炉灭菌病原体污染物品或携带病原体的动、植物尸体。灼烧火焰表面灭菌接种环、接种针、试管口、锥形瓶口、手术刀、手术剪、金属镊子等。烘烤160～170℃2h（250℃30min除热原）灭菌金属、陶瓷、玻璃制品、熔点高的耐干热原辅料、油类、液体石蜡红外线125℃15min900℃3～4s消毒灭菌消毒碗柜接种环红外线灭菌器烘烤箱（二）湿热灭菌法方法条件效果适用范围煮沸法100℃5～10min

消毒饮水、餐具、刀、剪等流通蒸汽法100℃5～45min

消毒餐具、口服液、小容量不耐高温的注射剂、输送管道等间歇蒸汽灭菌法100℃蒸汽15～30min，连续3次灭菌不耐高温的物品、营养液、培养基的灭菌巴氏消毒法63℃30min或72℃15s消毒牛奶、酒类、糖浆、果汁等不耐高温的食品，注射用水储藏巴氏消毒法（二）湿热灭菌法方法条件效果适用范围高压蒸汽灭菌121.3℃0.1MPa15～30min灭菌耐高温不怕湿的物品：包括微生物实验材料、药品生产、医疗用品等115℃0.069MPa15～30min灭菌含糖培养基2026/2/511高压蒸汽灭菌法适用范围2026/2/5111.用饱和水蒸汽,灭菌条件需要验证2.湿热灭菌法中效果最好的方法3.高压蒸汽灭菌器（1）种类：手提式、立式、卧式高压蒸汽灭菌法手提式卧式:单、双层立式（2）高压蒸汽灭菌注意点：检查压力表是否灵敏，压力与温度是否对应；灭菌初期先排净锅内冷空气；灭菌时间计算：达到规定压力和温度开始计；锅内水分要充足；灭菌物品装量不宜太满，不超85％容积为宜；灭菌结束需缓慢减压；灭菌结束，趁热取出物品。排冷空气情况压力温度排净冷空气103.42kP121.3℃排2/3冷空气103.42kP115℃排一半冷空气103.42kP112℃排1/3冷空气103.42kP109℃未排冷空气103.42kP100℃冷空气排放与压力、温度的关系2026/2/517湿热灭菌与干热灭菌的比较：同一温度下，湿热灭菌比干热灭菌效果好原因1.湿热中细菌菌体蛋白较易凝固2.湿热的穿透力比干热强3.湿热的蒸汽有潜热辐射灭菌种类装置原理效果适用范围紫外线紫外灯使DNA分子中的胸腺嘧啶交联形成二聚体，干扰复制和转录消毒空气消毒：车间、微生物实验室、手术室、传染病房、表面消毒：设施水层：薄水层微波微波炉产热及失水灭菌食品、药品二、辐射灭菌法19紫外线防护眼镜紫外消毒注意事项：辐照剂量：距离：1.5～2m湿度：40%～60%温度：20～40℃杂质：无尘灰、杂质使用寿命：1000h注意防护：护眼镜、

防护服紫外线水体消毒器辐射灭菌种类装置原理效果适用范围X-射线X射线发生器使其它物质氧化或产生自由基，破坏和改变生物大分子的结构，尤其是DNA,从而抑制或杀死微生物灭菌不耐热的药品、食品、医疗器械、塑料制品γ-射线钴-60铯-137三、过滤除菌法1.物理阻留方法：除菌除尘

2.过滤材质液体：微孔滤膜，孔径0.22～0.45μm；砂滤

棒、垂熔玻璃、纤维状或颗粒状滤材3.适用范围：具流动性物品不耐热的药品：血清、抗毒素、维生素、生物制品、输液、抗生素（如粉针剂类）水空气空气：纤维状或颗粒状滤材22棉花、玻璃纤维或石棉滤膜中空纤维超滤设备四、其它物理方法低温抑菌法：抑制生长繁殖。超声波：裂解细胞，可用于容器清洗、提取

细胞内容物。干燥：脱水和盐类浓度升高导致微生物死亡。高渗作用：质壁分离导致微生物死亡。第三节化学方法利用化学药物破坏微生物的化学组成、物理结构和生理活动，达到防腐灭菌目的。种类：酚、醇、醛、酸碱、氧化剂、重金属盐、表面活性剂、脂溶剂、卤素等一、化学消毒作用原理1.促进菌体蛋白质变性凝固（酚、醇、醛、酸碱类等）2.干扰细菌酶系统和代谢（氧化剂、重金属盐类等）3.损伤细菌细胞膜，增加其通透性（表面活性剂、脂溶剂等）2026/2/526类型名称及使用方法作用原理应用范围醇类70%～75%乙醇脱水、蛋白质变性皮肤、器皿、设备醛类0.5%～10%甲醛2%戊二醛(pH=8)蛋白质变性房间、物品消毒（不适合食品厂）精密器械消毒灭菌酚类3%～5%石炭酸(苯酚)2%(煤酚皂)来苏儿3%～5%来苏儿破坏细胞膜、蛋白质变性地面、器具皮肤地面、器具氧化剂3%过氧化氢0.2%～0.5%过氧乙酸0.1%高锰酸钾氧化蛋白质活性基团，酶失活皮肤、物品表面水果、蔬菜、塑料皮肤、水果、蔬菜二、常用的消毒剂常用的消毒防腐剂及其应用类型名称及使用方法作用原理应用范围卤素及其化合物0.2～0.5mg/L氯气10%～20%漂白粉0.5%～1%漂白粉2.5%碘酒破坏细胞膜、蛋白质饮水、游泳池水地面水、空气等皮肤表面活性剂0.1%～1.0%新洁尔灭0.05%～0.1%杜灭芬蛋白变性、破坏细胞膜皮肤、粘膜、器械皮肤、金属、棉织品、塑料环氧乙烷800～1000mg/L蛋白质变性,酶失活医疗器械、卫生用品及精密仪器酸类

0.1%苯甲酸

0.1%山梨酸食品药品防腐食品药品防腐2026/2/5三、影响消毒剂作用的因素2026/2/529四、化学消毒剂在药品生产中的应用种类浓度使用方法适用范围环氧乙烷环氧乙烷:CO2(或氮气)=2:8熏蒸洁净车间空气、设施、设备消毒及医疗器械灭菌甲醛溶液36%甲醛按30ml/m3洁净车间及无菌室的空气、设施、设备、管道内表面等臭氧臭氧发生器洁净车间及无菌室空气、设施、设备、无菌室、水气态过氧化氢过氧化氢蒸汽发生器

无菌室、传递窗一些较小空间易燃、易爆、有毒有毒（一）气态消毒剂适用于密闭空间3110ml/m3,37%甲醛溶液蒸汽夹层压力锅总进风道洁净车间等室温25℃鼓风持续3h密闭熏蒸12-24h25%氨水加热送氨气15min通入洁净空气甲醛溶液加热熏蒸法

种类浓度使用方法适用范围2%戊二醛喷雾浸泡擦拭洁净车间和无菌室的(地面、天花、门窗、墙壁、空气、内部设备表面)、洁净区的水池、洁具0.2～0.5%过氧乙酸0.1%新洁尔灭5%石炭酸2%来苏尔(煤酚皂)0.5%84消毒液（二）生产场所、设备、设施的消毒剂种类浓度使用方法70%～75%乙醇擦拭浸泡5%～10%漂白粉0.1%新洁尔灭2%来苏尔(煤酚皂)0.1％洗必泰（三）操作人员皮肤消毒剂1.口服固体药物制剂一般不加防腐剂2.口服液体制剂用防腐剂常用对氨基苯甲酸酯（尼泊金类）、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钠（钾）等3.外用制剂用防腐剂尼泊金、乙醇等防腐、滴眼剂中可加苯扎氯（或溴）铵（四）防腐剂4.生物制品用防腐剂苯酚、甲酚、三氯叔丁醇、硫柳汞等不得加防腐剂的药物：一次注射量大于15ml的注射剂眼科手术用药静脉输液（大容量）脑池内、硬膜外、椎管内用的注射液药品中添加防腐剂示例药品名称防腐剂药品名称防腐剂安神补脑液苯甲酸、苯甲酸钠盐酸卡替洛尔滴眼液苯扎氯铵四逆汤、小青龙合剂苯甲酸钠伤寒疫苗苯酚消咳喘糖浆山梨酸钾百白破联合疫苗硫柳汞小儿腹泻宁糖浆山梨酸森林脑灭活疫苗硫柳汞牛黄蛇胆川贝液尼泊金乙酯破伤风抗毒素、冻干白喉抗毒素、抗银环蛇毒血清硫柳汞或甲酚生物学方法1.抗生素：抑制细菌细胞壁合成、改变其通透性、抑制菌体蛋白合成和抑制核酸合成。2.噬菌体：裂解细菌。第四节

高压蒸汽灭菌法的灭菌效能验证

采用灭菌指示剂法测定在设定的灭菌参数下经过一个灭菌周期，灭菌对象是否达到无菌要求，以此评价其灭菌效能是否符合规定。（二）灭菌指示剂1.化学指示剂：不能反映真实效果化学物质指示管:灭菌前后物理性状变化化学物质指示带(卡):灭菌前后颜色变化2.生物指示剂：真实反映是否杀死芽孢自含式高压蒸汽灭菌生物指示剂芽孢菌片生物指示剂一、试验器材（一）基准被灭菌物品灭菌标准包或准备灭菌的物品，要有代表性（1）化学指示管灭菌前后形状有变化或熔化，判符合要求；没变化，不符合要求。安替比林（110~112℃）碘仿（115℃）升华硫（117℃）苯甲酸（121~133℃）上述化学试剂的熔点与灭菌所需温度相同灭菌前灭菌后1.化学指示剂结果判断（2）灭菌用化学指示剂卡(带)灭菌前后指示卡或指示带颜色变化均匀，判符合要求；没变化或变化不均匀，不符合要求。高压蒸汽灭菌化学指示卡、带

2.生物指示剂培养与结果判断灭菌后芽孢片溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨液体培养基56℃培养48h至5d紫色→无菌长,符合黄色→有菌长,不符合自带培养基，培养后黄色，有菌长,说明灭菌不彻底一般灭菌验证用的生物指示剂：湿热灭菌法甲醛熏蒸法过氧化氢灭菌法干热灭菌法环氧乙烷灭菌法辐射灭菌法：嗜热脂肪芽孢杆菌的芽孢菌片(ATCC7953)枯草芽孢杆菌黑色变种的芽孢菌片(ATCC9372)短小芽孢杆菌E601的芽胞菌片(ATCC27142)（三）培养基溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基。使用前呈紫色。二、确定灭菌参数基准被灭菌物品装载方式（达满载要求）生物指示剂放置数量和方式灭菌参数（灭菌温度、压力、时间）三、验证步骤按方案装载物品按要求放置灭菌指示剂经一个灭菌周期取出灭菌指示剂化学指示剂:直接判断结果生物指示剂:培养后判断结果两种指示剂均符合要求，

按相应的参数灭菌任一不符合要求，重新

设定灭菌参数主要参数：装量、装载方式、温度、压力、时间等消毒灭菌方法种类适用范围物理方法热力灭菌法灼烧接种环、剪刀、金属镊子、试管口、锥形瓶口烘烤