肿瘤干细胞干细胞样亚群与耐药

肿瘤干细胞干细胞样亚群与耐药演讲人01肿瘤干细胞/干细胞样亚群与耐药肿瘤干细胞/干细胞样亚群与耐药作为长期投身肿瘤基础研究与临床转化工作的科研人员，我亲历了肿瘤治疗从“一刀切”到“精准化”的跨越，却也深刻体会到耐药这一“拦路虎”如何让无数治疗方案功亏一篑。在反复的临床前实验与病例观察中，一个特殊的细胞群体逐渐进入我们的视野——肿瘤干细胞（CancerStemCells,CSCs）及其干细胞样亚群。它们如同肿瘤组织中的“种子细胞”，不仅驱动肿瘤的发生、发展与转移，更在治疗压力下展现出惊人的“耐药韧性”，成为制约疗效提升的核心瓶颈。本文将从CSCs的生物学特性出发，系统剖析其介导耐药的分子机制、在不同治疗场景下的耐药表现，并探讨靶向CSCs逆转耐药的策略与挑战，以期为攻克肿瘤耐药提供新的思路与方向。1肿瘤干细胞/干细胞样亚群：定义、生物学特征及其在肿瘤中的地位021肿瘤干细胞与干细胞样亚群的概念界定1肿瘤干细胞与干细胞样亚群的概念界定肿瘤干细胞的概念最早可追溯至20世纪90年代，JohnDick研究组在急性髓系白血病中首次分离出具有自我更新和多向分化能力的白血病起始细胞，奠定了CSCs理论的基础。此后，“肿瘤干细胞假说”逐渐被广泛接受：即在肿瘤组织中存在一小部分具有干细胞特性的细胞，它们通过不对称分裂产生新的CSCs和分化progeny，维持肿瘤的异质性和无限增殖能力。值得注意的是，肿瘤组织中并非仅存在单一类型的CSCs，而是存在具有不同分化潜能和生物学特征的“干细胞样亚群”。这些亚群可能源于肿瘤细胞的可塑性（Plasticity），即在微环境压力或治疗刺激下，非干细胞样肿瘤细胞通过表观遗传重编程、信号通路激活等机制获得干细胞特性；也可能源于CSCs自身的异质性，不同CSCs亚群具有独特的表面标志物、代谢特征和致瘤能力。1肿瘤干细胞与干细胞样亚群的概念界定例如，在乳腺癌中，CD44+/CD24-亚群被经典定义为CSCs，但近年研究发现CD133+、ALDH1+亚群也具有干细胞特性，且在不同亚型乳腺癌中占比与功能存在显著差异。这种“干细胞样亚群”的复杂性，为理解肿瘤耐药的异质性提供了重要线索。032肿瘤干细胞的核心生物学特征2肿瘤干细胞的核心生物学特征CSCs的“干细胞性”主要通过以下生物学特征体现，这些特征也是其介导耐药的基础：2.1自我更新与无限增殖能力自我更新是干细胞的“灵魂”特征。CSCs通过激活保守的干细胞信号通路（如Notch、Wnt/β-catenin、Hedgehog等）维持自我更新能力。例如，在结直肠癌中，Wnt通路的下游效应物β-catenin持续激活，驱动CSCs不对称分裂，产生新的CSCs和分化细胞，使肿瘤得以“永生”。这种自我更新能力意味着即使大部分肿瘤细胞被杀死，残留的CSCs仍可重新启动肿瘤生长，导致治疗后的复发。2.2多向分化潜能CSCs具有分化为肿瘤中不同类型细胞的能力，这种分化潜能是肿瘤异质性的重要来源。例如，在胶质母细胞瘤中，CSCs可分化为神经元样细胞、星形胶质细胞样细胞和少突胶质细胞样细胞，形成高度异质的肿瘤细胞群体。这种异质性使得不同细胞亚群对治疗的敏感性存在差异——分化成熟的肿瘤细胞可能对化疗敏感，而未分化的CSCs则天然耐药，从而在治疗后“筛选”出耐药细胞克隆。2.3高致瘤性与转移能力CSCs的致瘤能力远高于普通肿瘤细胞。在小鼠移植模型中，仅需几百个CSCs即可形成肿瘤，而需要数百万个分化肿瘤细胞才能达到类似效果。这种高致瘤性与CSCs的耐药能力协同，促进了肿瘤转移。例如，在乳腺癌中，循环肿瘤细胞（CTCs）中的CSCs亚群（如CD44+/CD24-/EpCAM-）能够在血液中存活，通过抵抗化疗和免疫杀伤，定位于远端器官（如肺、骨、肝）形成转移灶。2.4特定的表面标志物与代谢特征不同肿瘤的CSCs具有特异的表面标志物，这为其分离和靶向提供了依据。例如：白血病CD34+/CD38-、乳腺癌CD44+/CD24-/ESA+、胰腺癌CD133+/CD44+、胶质瘤CD133+/Nestin+等。此外，CSCs的代谢模式也与普通肿瘤细胞不同：它们更倾向于依赖糖酵解（Warburg效应）和氧化磷酸化（OXPHOS）的“混合代谢”，且线粒体功能较低，导致对靶向线粒体的药物不敏感；同时，CSCs可通过增强自噬和谷氨酰胺代谢抵抗代谢应激，进一步强化耐药能力。043肿瘤干细胞在肿瘤演进中的核心作用3肿瘤干细胞在肿瘤演进中的核心作用CSCs不仅是肿瘤发生的“起源细胞”，更在肿瘤演进的全过程中扮演“指挥者”角色：-肿瘤发生：CSCs的异常自我更新和分化失控是肿瘤形成的始动因素。例如，APC基因突变导致的Wnt通路持续激活，可使肠上皮干细胞永生化，最终发展为结直肠癌。-肿瘤进展：CSCs通过分泌促血管生成因子（如VEGF）、基质金属蛋白酶（MMPs）等，促进肿瘤血管生成和基质重塑，为肿瘤生长提供“土壤”；同时，CSCs的侵袭和迁移能力是肿瘤局部浸润和远处转移的基础。-治疗抵抗与复发：如前所述，CSCs的耐药特性使其成为治疗后残留和复发的“根源”。临床研究显示，乳腺癌、结直肠癌等肿瘤中，CSCs比例高的患者更容易出现化疗耐药和早期复发。可以说，不理解CSCs，就无法真正理解肿瘤的“耐药本质”；不靶向CSCs，就难以实现肿瘤的“根治”。肿瘤干细胞/干细胞样亚群介导耐药的分子机制耐药是肿瘤治疗失败的核心原因，而CSCs的耐药机制复杂且多样，涉及细胞内药物蓄积减少、DNA修复增强、凋亡抵抗、微环境保护等多个层面。深入解析这些机制，是逆转耐药的前提。051药物外排泵的高表达与细胞内药物浓度降低1药物外排泵的高表达与细胞内药物浓度降低CSCs高表达ABC（ATP-bindingcassette）转运蛋白超家族成员，通过ATP依赖的外排泵功能将细胞内药物泵出，降低药物有效浓度，这是CSCs耐药的经典机制。1.1ABC转运蛋白的作用ABC转运蛋白包括ABCB1（P-gp）、ABCG2（BCRP）、ABCC1（MRP1）等，其中ABCG2在CSCs中研究最为广泛。例如，在乳腺癌CD44+/CD24-亚群中，ABCG2表达水平显著高于非CSCs，可高效外排化疗药物（如蒽环类、拓扑异构酶抑制剂），使细胞内药物浓度降低80%以上；在白血病CD34+/CD38-细胞中，ABCB1的高表达导致伊马替尼等靶向药物的外排，产生耐药。1.2ABC转运蛋白的调控机制ABCG2的表达受多种信号通路调控：Hedgehog通路可通过Gli1转录因子激活ABCG2启动子；Notch通路下游的Hes1可直接结合ABCG2基因增强子；此外，缺氧诱导因子（HIF-1α）在缺氧条件下也可上调ABCG2表达，而肿瘤微环境中的缺氧区域往往是CSCs富集的“巢穴”。这种“信号通路-转运蛋白”的调控网络，使CSCs在治疗压力下持续高表达药物外排泵，维持耐药表型。062DNA损伤修复增强与细胞周期阻滞2DNA损伤修复增强与细胞周期阻滞化疗和放疗的核心机制是通过诱导DNA损伤杀死肿瘤细胞，而CSCs通过增强DNA损伤修复能力和阻滞细胞周期，抵抗治疗导致的DNA损伤。2.1DNA损伤修复通路的激活CSCs中同源重组修复（HRR）、非同源末端连接（NHEJ）等DNA修复通路的关键分子（如BRCA1、RAD51、DNA-PK）表达上调。例如，在卵巢癌CSCs中，BRCA1的高表达促进HRR效率，使顺铂诱导的DNA双链断裂（DSBs）快速修复；在胶质瘤CSCs中，DNA-PK的激活增强NHEJ能力，抵抗放疗导致的DNA损伤。此外，CSCs中“guardianofthegenome”p53的突变率较低（或功能异常），使其在DNA损伤后不易凋亡，反而通过激活G1/S期检查点阻滞细胞周期，为DNA修复提供时间。2.2细胞周期调控的异常CSCs多处于细胞周期的G0期（静息期），对细胞周期特异性药物（如作用于S期的紫杉类、作用于M期的长春碱碱类）天然不敏感。例如，在乳腺癌CSCs中，p21（CDKN1A）和p27（CDKN1B）等细胞周期抑制蛋白高表达，诱导G0期阻滞；而化疗药物主要作用于增殖期细胞，对G0期CSCs“束手无策”。这种“静息”特性使CSCs成为治疗后的“残留细胞库”。073凋亡通路异常与抗凋亡蛋白高表达3凋亡通路异常与抗凋亡蛋白高表达细胞凋亡是化疗药物杀伤肿瘤细胞的主要方式，而CSCs通过抑制凋亡通路、激活抗凋亡蛋白，实现“免疫逃逸”式的耐药。3.1死亡受体通路与线粒体通路的抑制CSCs中死亡受体（如Fas、DR4/DR5）的表达下调，对死亡配体（如TRAIL、FasL）不敏感；同时，线粒体凋亡通路中的关键分子如Bax、Bak表达降低，而Bcl-2、Bcl-xL、Mcl-1等抗凋亡蛋白高表达。例如，在胰腺癌CSCs中，Mcl-1的表达水平是普通肿瘤细胞的5倍以上，通过结合并抑制Bax/Bak，阻止细胞色素c释放，抑制caspase级联激活；在前列腺癌CSCs中，Survivin（IAP家族成员）的高表达直接抑制caspase-3和caspase-7，阻断凋亡执行。3.2NF-κB通路的持续激活NF-κB是调控细胞存活和炎症的核心通路，在CSCs中常处于持续激活状态。激活的NF-κB可上调Bcl-2、XIAP、c-FLIP等抗凋亡分子的表达，同时抑制促凋亡分子（如Bim、Puma）的表达。例如，在多发性骨髓瘤CSCs中，NF-κB的激活通过诱导IL-6自分泌，进一步增强Bcl-xL表达，导致硼替佐米等蛋白酶体抑制剂耐药。084肿瘤微环境对CSCs的保护作用4肿瘤微环境对CSCs的保护作用肿瘤微环境（TME）并非“旁观者”，而是通过复杂的细胞间相互作用和信号网络，为CSCs提供“保护伞”，促进其耐药。4.1缺氧微环境的调控肿瘤内部常存在缺氧区域，缺氧诱导因子（HIFs）是缺氧下的核心调控分子。HIF-1α可通过上调ABCG2、ALDH1等耐药相关基因，增强CSCs的药物外排和代谢适应能力；同时，缺氧可诱导CSCs上皮-间质转化（EMT），促进其侵袭和转移。例如，在乳腺癌中，缺氧区域的CSCs比例显著高于氧合区域，且对多西他赛的耐药性增加3倍以上。4.2癌症相关成纤维细胞（CAFs）的旁分泌作用CAFs是TME中主要的基质细胞，通过分泌多种因子（如HGF、SDF-1、IL-6）激活CSCs的干细胞信号通路。例如，CAFs分泌的HGF可激活CSCs的c-Met/PI3K/Akt通路，上调Bcl-2表达，抑制凋亡；分泌的SDF-1（CXCL12）通过与CSCs表面的CXCR4结合，促进其定位于“干细胞龛”（StemCellNiche），逃避化疗药物的杀伤。4.3免疫微环境的免疫抑制CSCs可通过表达免疫检查点分子（如PD-L1、CD47）、分泌免疫抑制因子（如TGF-β、IL-10），抑制T细胞、NK细胞的抗肿瘤活性。例如，CD47是“不要吃我”信号，在白血病CSCs中高表达，通过与巨噬细胞表面的SIRPα结合，抑制吞噬作用；PD-L1在胶质瘤CSCs中高表达，通过PD-1/PD-L1通路抑制T细胞活化，导致免疫治疗耐药。095肿瘤细胞可塑性与干细胞样特性的获得5肿瘤细胞可塑性与干细胞样特性的获得近年来，“肿瘤细胞可塑性”（Plasticity）成为耐药研究的新热点：即非干细胞样肿瘤细胞在治疗压力、微环境刺激下，可通过表观遗传修饰、信号通路重编程获得干细胞特性，转化为新的CSCs亚群，这是“获得性耐药”的重要机制。5.1表观遗传调控的作用DNA甲基化、组蛋白修饰、非编码RNA等表观遗传机制调控着干细胞基因的表达。例如，在结直肠癌中，化疗药物（如5-Fu）可诱导DNMT1（DNA甲基转移酶1）高表达，沉默分化基因（如CDX2），同时激活干细胞基因（如LGR5、ASCL2），使分化肿瘤细胞“去分化”为CSCs；在前列腺癌中，miR-34c的下调可解除其对SIRT1的抑制，激活Notch通路，促进CSCs的生成。5.2EMT与干性的关联上皮-间质转化（EMT）是肿瘤转移的关键过程，近年研究发现EMT与CSCs干性高度相关。EMT转录因子（如Snail、Twist、ZEB1）不仅可抑制E-cadherin表达，促进细胞迁移，还可直接激活干细胞基因（如OCT4、SOX2、NANOG）。例如，在乳腺癌中，紫杉醇治疗可诱导Twist表达，触发EMT并促进CD44+/CD24-CSCs亚群扩增，导致耐药复发。106代谢重编程与耐药6代谢重编程与耐药CSCs的代谢模式与普通肿瘤细胞显著不同，这种“代谢可塑性”是其抵抗治疗应激的重要基础。6.1糖代谢的“混合型”特征普通肿瘤细胞主要依赖糖酵解（Warburg效应），而CSCs同时依赖糖酵解和OXPHOS，且在不同条件下可灵活切换。例如，在氧合条件下，CSCs通过OXPHOS产生ATP；在缺氧条件下，则转向糖酵解，同时增强自噬功能，分解自身大分子（如蛋白质、脂质）为代谢底物，维持能量供应。这种“双轨制”代谢使CSCs对靶向糖酵解的药物（如2-DG）不敏感。6.2氧化应激防御增强CSCs中活性氧（ROS）水平显著低于普通肿瘤细胞，这是因为其抗氧化系统（如谷胱甘肽（GSH）、硫氧还蛋白（Trx）、超氧化物歧化酶（SOD））活性增强。例如，在肺癌CSCs中，γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）的高表达促进GSH合成，中和化疗药物（如顺铂）诱导的ROS积累，抑制氧化应激导致的细胞死亡。6.2氧化应激防御增强不同治疗模式下肿瘤干细胞/干细胞样亚群的耐药特点肿瘤治疗手段多样，包括化疗、靶向治疗、免疫治疗、放疗等，不同治疗模式下CSCs的耐药机制和表现存在差异，理解这些差异对制定个体化治疗方案至关重要。111化疗耐药：以“细胞毒性药物”为核心的抵抗1化疗耐药：以“细胞毒性药物”为核心的抵抗化疗是肿瘤治疗的基石，但CSCs通过多种机制对化疗药物产生耐药，表现为“初始耐药”（治疗前即存在）和“获得性耐药”（治疗后产生）。1.1常用化疗药物的CSCs耐药机制-蒽环类（如阿霉素）：依赖拓扑异构酶II诱导DNA断裂，但CSCs中ABCG2高表达可外排阿霉素，同时BRCA1介导的HRR修复DNA损伤，导致耐药。12-铂类药物（如顺铂）：通过形成DNA加合物杀伤细胞，但CSCs中谷胱甘肽（GSH）和金属硫蛋白（MT）可螯合铂离子，减少DNA加合物形成；同时，ERCC1（核苷酸切除修复关键分子）的高表达促进DNA修复。3-紫杉类（如紫杉醇）：通过稳定微管抑制细胞分裂，但CSCs的G0期静息特性使其对细胞周期特异性药物不敏感；此外，βIII-tubulin（微管异构体）在CSCs中高表达，可降低紫杉醇与微管的结合能力。1.2化疗后CSCs的“富集”现象临床前研究显示，化疗后残留肿瘤组织中CSCs比例显著升高。例如，乳腺癌患者接受新辅助化疗后，肿瘤组织中CD44+/CD24-CSCs比例从治疗前的5%升至20%以上；在结直肠癌小鼠模型中，5-Fu治疗后，Lgr5+CSCs富集3-5倍。这种“富集”一方面是因为化疗杀死了普通肿瘤细胞，另一方面是因为化疗可诱导EMT和表观遗传重编程，促进非CSCs向CSCs转化，形成“化疗筛选耐药克隆”的恶性循环。122靶向治疗耐药：以“信号通路”为靶点的逃逸2靶向治疗耐药：以“信号通路”为靶点的逃逸靶向治疗通过特异性抑制肿瘤驱动信号通路发挥作用，但CSCs的信号通路异质性和可塑性导致其易产生耐药。2.1酪氨酸激酶抑制剂（TKI）耐药-伊马替尼（治疗慢性髓系白血病）：虽然CML的CSCs（CD34+/CD38-）对伊马替尼初始敏感，但长期治疗后可出现BCR-ABL点突变（如T315I），抑制药物结合；同时，CSCs中Wnt/β-catenin通路激活，通过下调BCR-ABL表达，维持白血病干细胞存活。-吉非替尼/厄洛替尼（治疗EGFR突变肺癌）：EGFR突变肺癌的CSCs（如CD133+）通过激活AXL替代EGFR信号，或诱导上皮-间质转化（EMT），导致耐药；此外，EGFRT790M突变（占50%以上耐药病例）可增强与ATP的结合能力，降低TKI亲和力。2.2单克隆抗体耐药-曲妥珠单抗（治疗HER2阳性乳腺癌）：HER2阳性乳腺癌的CSCs（如CD44+/CD24-）通过下调HER2表达或激活PI3K/Akt/mTOR旁路通路，抵抗曲妥珠单抗的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性（ADCC）；同时，Notch通路的激活促进CSCs自我更新，削弱疗效。-西妥昔单抗（治疗KRAS野生型结直肠癌）：CSCs中EGFR下游的RAS/RAF/MEK/ERK通路持续激活，或通过分泌EGFR配体（如TGF-α、EGFR）形成自分泌环，导致耐药。2.3靶向CSCs信号通路药物的耐药针对CSCs核心通路（如Notch、Wnt、Hedgehog）的抑制剂在临床中面临“疗效有限”的问题，原因在于：1-通路代偿激活：抑制Notch通路可激活Wnt通路，反之亦然，形成“此消彼长”的代偿；2-CSCs亚群异质性：不同CSCs亚群依赖不同通路，单一靶向难以覆盖所有CSCs；3-微环境保护：CAFs分泌的因子（如Jagged1、Wnt3a）可旁路激活靶向通路，降低药物效果。4133免疫治疗耐药：以“免疫逃逸”为核心的抵抗3免疫治疗耐药：以“免疫逃逸”为核心的抵抗免疫治疗（如PD-1/PD-L1抑制剂、CAR-T）通过激活机体免疫系统杀伤肿瘤，但CSCs的免疫抑制特性使其成为免疫治疗的“冷区”。3.1PD-1/PD-L1抑制剂的耐药-CSCs的免疫检查点高表达：CSCs高表达PD-L1、CD47、LAG-3等免疫检查点分子，通过抑制T细胞、NK细胞活性逃避免疫监视。例如，黑色素瘤CSCs（CD271+）中PD-L1表达水平是普通肿瘤细胞的3倍以上，可与T细胞PD-1结合，抑制其增殖和细胞因子分泌。-抗原呈递缺陷：CSCs表面肿瘤特异性抗原（TSAs）和新抗原表达较低，且MHCI类分子表达下调，使T细胞无法识别；同时，CSCs分泌的TGF-β可抑制抗原呈递细胞（DCs）的成熟，降低免疫原性。3.2CAR-T细胞治疗的耐药-CSCs的低免疫原性：CAR-T细胞主要识别肿瘤表面抗原（如CD19、CD20），但CSCs中这些抗原表达下调或不表达（如CD19阴性急性B淋巴细胞白血病），导致CAR-T“脱靶”。-免疫抑制微环境：CSCs通过分泌IL-10、TGF-β等因子，招募调节性T细胞（Tregs）、髓源性抑制细胞（MDSCs），抑制CAR-T细胞的浸润和功能；此外，肿瘤微环境中的代谢竞争（如葡萄糖消耗）也可导致CAR-T细胞能量耗竭。3.3肿瘤疫苗的耐药CSCs的“免疫静息”特性使其对肿瘤疫苗（如DC疫苗、多肽疫苗）不敏感。例如，前列腺癌CSCs（CD133+/CD44+)通过低表达PSA（前列腺特异性抗原）和MHCI类分子，逃避疫苗激活的T细胞杀伤；同时，疫苗诱导的免疫应答主要针对分化肿瘤细胞，对CSCs“鞭长莫及”。144放疗耐药：以“DNA修复与微环境”为屏障4放疗耐药：以“DNA修复与微环境”为屏障放疗通过电离辐射诱导DNA双链断裂（DSBs）杀伤肿瘤细胞，但CSCs的DNA修复能力和微环境保护使其对放疗不敏感。4.1DNA修复增强CSCs中HRR和NHEJ通路的关键分子（如BRCA1、RAD51、DNA-PK）表达上调，可快速修复放疗诱导的DSBs。例如，胶质瘤CSCs（CD133+）的DNA修复效率是普通肿瘤细胞的2倍以上，导致放疗后残留细胞比例升高。4.2微环境的辐射保护-缺氧：肿瘤内部缺氧区域的CSCs对辐射不敏感，因为氧是辐射诱导DNA损伤的“敏化剂”，缺氧状态下辐射产生的自由基减少，DSBs形成减少。-CAF分泌的生长因子：CAFs分泌的HGF、EGF可激活CSCs的PI3K/Akt和ERK通路，促进DNA修复和细胞存活，增强放疗抵抗。4.3放疗诱导的CSCs扩增paradoxically，放疗不仅可杀死肿瘤细胞，还可诱导CSCs的自我更新和分化。例如，在乳腺癌中，辐射可激活CSCs的Notch通路，通过Hes1转录因子上调Sox2和Oct4表达，促进CSCs扩增；同时，放疗可释放损伤相关分子模式（DAMPs），如HMGB1、ATP，通过激活TLR4/NF-κB通路，增强CSCs的存活和耐药能力。4.3放疗诱导的CSCs扩增靶向肿瘤干细胞/干细胞样亚群逆转耐药的策略与挑战针对CSCs的耐药机制，研究者提出了多种靶向策略，旨在“斩草除根”，清除耐药的CSCs，延长患者生存期。然而，从基础研究到临床转化仍面临诸多挑战。151靶向CSCs表面标志物的治疗1靶向CSCs表面标志物的治疗CSCs的特异性表面标志物是靶向治疗的理想靶点，目前主要包括抗体偶联药物（ADC）、CAR-T细胞和双特异性抗体等。1.1抗体偶联药物（ADC）010203ADC通过抗体识别CSCs表面标志物，将细胞毒性药物精准递送至CSCs内部。例如：-靶向CD33的Gemtuzumabozogamicin（GO）用于治疗急性髓系白血病（AML），可杀伤CD33+白血病干细胞；-靶向CD133的ADC（如CAR-101）在结直肠癌前临床模型中显示可显著降低CD133+CSCs比例，抑制肿瘤生长。1.2CAR-T细胞治疗01针对CSCs标志物的CAR-T细胞是近年研究热点。例如：02-靶向CD44v6（CSCs标志物）的CAR-T细胞在胰腺癌和胶质瘤模型中可清除CSCs，延长生存期；03-靶向EpCAM（部分CSCs高表达）的CAR-T细胞在卵巢癌中显示出初步疗效，但需警惕“靶向分化肿瘤细胞而遗漏CSCs”的问题。1.3双特异性抗体双特异性抗体可同时结合CSCs表面标志物和免疫细胞表面的激活分子（如CD3），招募T细胞杀伤CSCs。例如，靶向CD123（白血病CSCs标志物）和CD3的双抗（如Tagraxofusp）在CD123+急性髓系白血病中已获批上市，但部分患者因CSCs异质性产生耐药。162抑制CSCs关键信号通路2抑制CSCs关键信号通路Notch、Wnt、Hedgehog等通路是维持CSCs干性的核心，抑制这些通路可诱导CSCs分化或凋亡，逆转耐药。2.1Notch通路抑制剂-γ-分泌酶抑制剂（GSIs，如DAPT、RO4929097）可阻断Notch受体活化，抑制CSCs自我更新。在乳腺癌前临床模型中，GSIs联合紫杉醇可显著降低CD44+/CD24-CSCs比例，增强化疗效果；-Notch受体单抗（如OMP-59R5）在胰腺癌、卵巢癌中显示出与化疗协同的作用，但因胃肠道毒性（如腹泻、呕吐）限制了临床应用。2.2Wnt通路抑制剂-小分子抑制剂（如LGK974，靶向Porcupine蛋白）可阻断Wnt配体分泌，在结直肠癌、乳腺癌中可抑制CSCs增殖；-Dickkopf-1（DKK1）抗体（如DKN-01）可拮抗Wnt共受体LRP5/6，在胃癌、子宫内膜癌中与化疗联合可延长患者无进展生存期（PFS）。2.3Hedgehog通路抑制剂-Smoothened（SMO）抑制剂（如Vismodegib、Sonidegib）在基底细胞癌中已获批，但在实体瘤（如胰腺癌、肺癌）中疗效有限，原因在于CSCs可通过GLI1（Hedgehog下游转录因子）的“非经典激活”绕过SMO抑制；-靶向GLI1的小分子抑制剂（如GANT61）可阻断Hedgehog通路的下游效应，在胰腺癌CSCs中显示出体外抗肿瘤活性，但需解决体内递送问题。173破坏CSCs微环境保护3破坏CSCs微环境保护CSCs的“干细胞龛”为其提供了生存和耐药的微环境，靶向微环境可