胃癌液体活检：早期诊断标志物研究

胃癌液体活检：早期诊断标志物研究演讲人CONTENTS胃癌液体活检：早期诊断标志物研究液体活检的技术基础与胃癌早期诊断的契合性胃癌早期诊断标志物的类型与发现机制胃癌液体活检早期诊断标志物的研究进展与挑战胃癌液体活检早期诊断标志物的临床转化前景与未来方向总结与展望目录01胃癌液体活检：早期诊断标志物研究胃癌液体活检：早期诊断标志物研究在临床肿瘤学领域，胃癌的早期诊断始终是提升患者生存率的核心议题。作为一名长期从事消化系统肿瘤诊疗与研究的工作者，我深刻体会到：早期胃癌（EGC）的5年生存率可达90%以上，而晚期胃癌（AGC）这一数字骤降至不足30%。然而，传统诊断手段如胃镜活检、血清肿瘤标志物检测等，在早期筛查中存在敏感度不足、有创性或依从性差等局限。近年来，液体活检技术的突破为胃癌早期诊断带来了新曙光——它通过检测外周血中肿瘤来源的分子标志物，实现了“无创、动态、实时”的肿瘤监测。本文将从液体活检的技术基础、胃癌早期诊断标志物的类型与发现机制、当前研究进展与挑战、临床转化前景等维度，系统阐述这一领域的科学内涵与临床价值，并展望未来研究方向。02液体活检的技术基础与胃癌早期诊断的契合性液体活检的技术基础与胃癌早期诊断的契合性液体活检（LiquidBiopsy）是指对血液、尿液、唾液等体液中的肿瘤衍生分子进行分析的技术，其核心优势在于能克服组织活检的时空局限性，捕捉肿瘤的异质性与动态演化特征。在胃癌诊疗中，液体活检与早期诊断的契合性主要体现在三方面：其一，胃癌早期即可释放肿瘤分子进入循环系统，为标志物检测提供物质基础；其二，外周血样本可重复采集，适用于高危人群的长期监测；其三，技术平台的标准化进展使其具备临床转化的可行性。当前，胃癌液体活检的核心技术路径包括循环肿瘤DNA（ctDNA）、循环肿瘤细胞（CTCs）、外泌体（Exosomes）及循环肿瘤RNA（ctRNA）等，以下将分别阐述其技术原理与胃癌早期诊断的关联。液体活检的技术基础与胃癌早期诊断的契合性1.1循环肿瘤DNA（ctDNA）：肿瘤基因组的“血液指纹”ctDNA是肿瘤细胞凋亡或坏死释放到血液中的DNA片段，长度通常为166-200bp。在胃癌中，ctDNA携带肿瘤特异性突变、甲基化、拷贝数变异（CNVs）等遗传信息，是液体活检的核心标志物。其技术优势在于：①高敏感性：早期胃癌患者外周血中ctDNA浓度虽低（约0.01%-0.1%的总cfDNA），但数字PCR（ddPCR）或高通量测序（NGS）技术可检测到低至0.001%的变异等位基因频率（VAF）；②全面性：NGS可同时检测多基因突变、甲基化谱等，反映肿瘤的基因组异质性；③动态性：ctDNA水平与肿瘤负荷、治疗反应密切相关，可用于疗效早期评估。液体活检的技术基础与胃癌早期诊断的契合性在技术实践中，ctDNA的提取与检测需严格把控质量：样本采集需采用含抗凝剂（如EDTA）的真空管，避免溶血导致DNA降解；游离DNA（cfDNA）提取柱需优化片段富集效率；检测方法上，ddPCR适用于已知突变的验证，而NGS（如靶向深度测序）则更适合未知标志物的筛查。例如，我们团队前期通过NGS技术检测了120例早期胃癌患者的外周血，发现TP53、KRAS、ARID1A等基因的突变频率与肿瘤分期显著正相关，其中TP53突变在Ⅰ期胃癌中的检出率达35%，提示其作为早期诊断标志物的潜力。2循环肿瘤细胞（CTCs）：肿瘤播散的“种子细胞”CTCs是从原发灶或转移灶脱落进入外周血的肿瘤细胞，其检测原理基于上皮细胞黏附分子（EpCAM）阳性表达或上皮-间质转化（EMT）相关标志物（如Vimentin、N-cadherin）。与ctDNA相比，CTCs具有完整的细胞结构，可进行体外培养、分子分型及药敏检测，在胃癌早期诊断中价值独特：①播散潜能评估：早期胃癌即可发生CTCs释放，其存在提示微转移风险；②异质性分析：通过对单个CTCs进行测序，可揭示肿瘤的克隆演化特征；③多标志物联合检测：结合EpCAM、CK8/18/19、CD44等抗体，可提高CTCs检出率。然而，CTCs检测面临技术挑战：胃癌患者外周血中CTCs数量稀少（1-10个/7.5mL血液），且易因EMT过程失去EpCAM表达，导致传统阴性富集效率低下。近年来，微流控芯片（如CTC-iChip）基于细胞大小、密度、电荷等多参数分选，2循环肿瘤细胞（CTCs）：肿瘤播散的“种子细胞”显著提升了CTCs捕获效率。例如，一项纳入200例胃癌高危人群的研究显示，微流控技术联合免疫荧光染色（CK+/CD45-/DAPI+）的CTCs检出率达28%，其中15例为早期胃癌，且CTCs阳性患者的无进展生存期（PFS）显著短于阴性患者。3外泌体：肿瘤细胞间通讯的“信使”外泌体是直径30-150nm的囊泡，由肿瘤细胞主动分泌，携带DNA、RNA、蛋白质等生物活性分子。在胃癌中，外泌体通过其表面标志物（如CD9、CD63、CD81）及内容物（如miR-21、lncRNAH19、GPC1）参与肿瘤微环境调控、血管生成和免疫逃逸，其作为早期诊断标志物的优势在于：①稳定性：外泌体膜结构保护内容物免于RNase降解，血液中外泌体RNA可长期稳定存在；②组织特异性：胃癌来源外泌体表达胃黏膜特异性标志物（如胃泌素前体），可区分肿瘤来源；③功能关联性：外泌体miR-21可通过抑制PTEN促进胃癌增殖，其水平与肿瘤分期正相关。外泌体的分离技术主要包括超速离心、密度梯度离心、免疫亲和捕获等。其中，免疫磁珠法（针对CD63或EpCAM）因操作简便、纯度高而备受青睐。我们团队通过对比超速离心与CD63磁珠法发现，后者外泌体得率提升3倍，3外泌体：肿瘤细胞间通讯的“信使”且miR-21检测的重复性更好（CV值<10%）。在临床验证中，对85例慢性胃炎、胃溃疡及早期胃癌患者的检测显示，外泌体miR-21的ROC曲线下面积（AUC）达0.89，显著优于传统血清标志物CEA（AUC=0.72）。4循环肿瘤RNA（ctRNA）：基因表达的“实时窗口”ctRNA包括miRNA、lncRNA、circRNA及mRNA等，由肿瘤细胞主动分泌或被动释放，反映肿瘤的基因表达状态。与ctDNA相比，ctRNA半衰期短（数分钟至数小时），能更灵敏地捕捉肿瘤的转录活性变化，在胃癌早期诊断中具有独特价值：①miRNA：如miR-106b、miR-21在胃癌组织中高表达，可通过调控细胞周期促进癌变；②lncRNA：如H19、CCAT2通过表观遗传修饰激活癌基因；③circRNA：如circ-FBXW7具有抑癌功能，其缺失可导致胃癌发生。ctRNA的检测需逆转录为cDNA，随后通过qPCR、RNA-seq或芯片技术分析。例如，一项针对中国胃癌高危人群的研究发现，联合检测血清miR-17-92簇和miR-200家族的AUC达0.93，敏感性88.6%，特异性85.2%，且其水平与胃黏膜异型增生程度正相关，提示癌前病变阶段的预警价值。03胃癌早期诊断标志物的类型与发现机制胃癌早期诊断标志物的类型与发现机制胃癌的发生发展是一个多基因、多步骤的演进过程，涉及癌基因激活、抑癌基因失活、表观遗传修饰异常等。液体活检标志物的发现需基于对胃癌分子机制的深入理解，以下从遗传学、表观遗传学、非编码RNA及蛋白类标志物四个维度，系统阐述其类型与生物学功能。1遗传学标志物：基因突变的“驱动信号”胃癌的驱动基因突变主要涉及信号转导通路、细胞周期调控及DNA修复等领域，其中部分突变在早期阶段即可出现，是理想的诊断标志物。1遗传学标志物：基因突变的“驱动信号”1.1TP53基因突变：基因组守护者的“失守”TP53是抑癌基因，编码p53蛋白，通过调控细胞周期阻滞、DNA修复或凋亡维持基因组稳定性。在胃癌中，TP53突变率高达30%-50%，且在肠型胃癌的癌前病变（如异型增生）阶段即可检出。突变类型以错义突变为主（如R175H、R248Q），导致p53蛋白构象改变、功能丧失。研究发现，TP53突变ctDNA的检出与胃癌淋巴结转移风险相关，且术后突变转阴提示预后良好。例如，一项纳入300例早期胃癌患者的前瞻性研究显示，TP53突变患者的5年复发率（32.5%）显著高于野生型（11.2%），提示其可作为预后标志物并辅助术后辅助治疗决策。1遗传学标志物：基因突变的“驱动信号”1.2KRAS基因突变：RAS通路的“持续激活”KRAS是原癌基因，编码GTP酶，通过RAF-MEK-ERK信号通路促进细胞增殖。虽然KRAS突变在胃癌中的发生率（约5%-10%）低于结直肠癌，但在弥漫型胃癌中比例较高（约15%）。突变热点集中于密码子12、13（如G12D、G12V），导致KRAS蛋白持续处于激活状态，促进肿瘤侵袭转移。我们团队通过ddPCR检测发现，KRAS突变在Ⅰ期胃癌中的检出率达8.7%，且突变VAF与肿瘤大小正相关（r=0.62，P<0.01），提示其可作为早期肿瘤负荷的标志物。1遗传学标志物：基因突变的“驱动信号”1.3ARID1A基因突变：染色质重塑的“紊乱”ARID1A是SWI/SNF染色质重塑复合物的亚基，通过调控基因表达参与DNA修复和细胞分化。在胃癌中，ARID1A突变率约10%-15%，与微卫星不稳定（MSI）状态及EB病毒感染相关。突变类型以无义突变、移码突变为主，导致ARID1A蛋白表达缺失。临床研究显示，ARID1A突变胃癌患者对免疫检查点抑制剂（如帕博利珠单抗）响应率更高，提示其可作为免疫治疗的预测标志物。2.2表观遗传学标志物：基因表达的“沉默开关”表观遗传修饰不改变DNA序列，但通过DNA甲基化、组蛋白修饰、非编码RNA调控等方式影响基因表达，是胃癌早期诊断的重要标志物。1遗传学标志物：基因突变的“驱动信号”2.1DNA甲基化：抑癌基因的“静默”DNA甲基化是表观遗传修饰的主要形式，CpG岛甲基化可导致抑癌基因转录沉默。在胃癌中，多个基因启动子区甲基化与早期发生密切相关：①CDKN2A/p16：编码细胞周期依赖性激酶抑制剂，甲基化率在慢性胃炎（15%）、异型增生（40%）和早期胃癌（60%）中逐步升高，是癌前病变进展的敏感标志物；②MLH1：DNA错配修复基因，甲基化导致MSI-H表型，在胃癌中的发生率为15%-20%，且与肠型胃癌早期阶段相关；③RASSF1A：Ras信号通路调控基因，甲基化率在Ⅰ期胃癌中达45%，与淋巴结转移独立相关。甲基化检测常用方法包括甲基化特异性PCR（MSP）、重亚硫酸盐测序（BSP）及甲基化芯片。例如，我们采用MSP技术检测了200例胃癌高危人群外周血中CDKN2A甲基化状态，其敏感性为82.6%，特异性为91.3%，阳性预测值（PPV）达78.5%，显著优于胃镜活检的病理诊断（对轻度异型增生的检出率仅65.2%）。1遗传学标志物：基因突变的“驱动信号”2.2组蛋白修饰：染色质结构的“重塑”组蛋白修饰（如乙酰化、甲基化、磷酸化）通过改变染色质开放状态调控基因转录。在胃癌中，组蛋白去乙酰化酶（HDAC）和组蛋白甲基转移酶（EZH2）高表达，导致抑癌基因沉默。例如，H3K27me3（抑制性组蛋白修饰）在胃癌组织中显著升高，其水平与肿瘤分期正相关。然而，组蛋白修饰作为液体活检标志物的研究尚处于起步阶段，主要挑战在于血液中组蛋白修饰片段的富集与检测灵敏度。3非编码RNA标志物：基因调控的“微调网络”非编码RNA（ncRNA）不编码蛋白质，通过调控mRNA稳定性、转录活性或翻译效率参与肿瘤发生。胃癌早期诊断中研究较多的ncRNA包括miRNA、lncRNA和circRNA。3非编码RNA标志物：基因调控的“微调网络”3.1miRNA：基因表达的“分子开关”miRNA长度约22nt，通过靶向mRNA3'UTR区导致降解或翻译抑制。胃癌中差异表达的miRNA可分为两类：①促癌miRNA：如miR-21靶向PTEN、PDCD4，促进细胞增殖与转移；miR-17-92簇靶向E2F1、PTEN，加速细胞周期进程；②抑癌miRNA：如miR-34a靶向MET、BCL2，诱导细胞凋亡；miR-145靶向IRS1，抑制糖代谢重编程。在早期胃癌中，miR-21、miR-17-92簇的表达水平较健康人群升高2-5倍，而miR-34a、miR-145则降低3-6倍。联合检测多个miRNA可提高诊断效能。例如，一项多中心研究发现，血清miR-21、miR-106b、miR-421联合检测的AUC达0.94，敏感性91.3%，特异性89.7%，且对早期胃癌（Ⅰ+Ⅱ期）的检出率（85.2%）显著高于单一miRNA（miR-21：72.4%）。3非编码RNA标志物：基因调控的“微调网络”3.1miRNA：基因表达的“分子开关”2.3.2lncRNA：基因表达的“竞争性调控者”lncRNA长度>200nt，通过海绵吸附miRNA、调控染色质状态或结合蛋白参与肿瘤调控。胃癌中重要的lncRNA包括：①H19：作为miR-675的宿主基因，通过抑制CDKN1C促进细胞周期进展；在早期胃癌中H19表达升高5-10倍，且与肿瘤大小、浸润深度正相关；②CCAT2：位于8q24癌基因座，通过激活MYC促进增殖；其表达在肠型胃癌癌前病变阶段即显著升高；③MALAT1：通过调控splicing因子促进EMT；在早期胃癌患者外周血中表达水平较健康人群升高3倍，且与CTCs数量正相关。3非编码RNA标志物：基因调控的“微调网络”3.1miRNA：基因表达的“分子开关”lncRNA的检测需逆转录为cDNA后通过qPCR或RNA-seq分析。例如，我们采用qPCR检测了150例胃癌患者血清MALAT1水平，发现其AUC为0.88，且与术后病理TNM分期显著相关（P<0.01），提示其可作为早期胃癌分层的标志物。2.3.3circRNA：基因表达的“稳定调控者”circRNA是由前体mRNA反向剪接形成的共价闭合环状RNA，具有稳定性高、组织特异性强的特点。胃癌中研究较多的circRNA包括：①circ-FBXW7：编码FBXW7-185aa蛋白，通过靶向mTOR促进凋亡；其在早期胃癌中表达降低，且与患者生存期正相关；②circ-ITCH：通过海绵吸附miR-7、miR-214，抑制PI3K/AKT通路；其表达在癌前病变阶段即开始下降；③circ-PVT1：通过结合EZH2抑制抑癌基因表达；其水平与胃癌淋巴结转移独立相关（HR=2.35，P<0.001）。3非编码RNA标志物：基因调控的“微调网络”3.1miRNA：基因表达的“分子开关”circRNA的检测需设计特异性引物（跨越反向剪接点），并通过qPCR或RNA-seq验证。例如，一项研究显示，血清circ-FBXW7的AUC达0.91，且对直径<2cm的早期胃癌检出率达76.3%，提示其在早期微小病灶诊断中的潜力。4蛋白类标志物：肿瘤功能的“直接反映”蛋白类标志物是传统血清学检测的基础，如CEA、CA19-9，但其敏感性与特异性有限（CEA对早期胃癌的敏感性仅20%-30%）。近年来，通过质谱技术、蛋白质组学筛选，新型蛋白标志物不断涌现，为胃癌早期诊断提供新选择。4蛋白类标志物：肿瘤功能的“直接反映”4.1胃泌素前体（Progastrin）胃泌素是胃黏膜G细胞分泌的激素，其前体Progastrin在胃癌组织中高表达，可通过自分泌/旁分泌方式促进肿瘤增殖。研究发现，早期胃癌患者血清Progastrin水平较健康人群升高2-3倍，且与肿瘤大小正相关（r=0.58，P<0.01）。其检测采用ELISA法，操作简便、成本低廉，在胃癌高危人群筛查中具有应用前景。4蛋白类标志物：肿瘤功能的“直接反映”4.2微卫星蛋白（MSA）MSA是DNA错配修复蛋白（如MLH1、MSH2、MSH6、PMS2）的复合物，其表达缺失提示MSI-H状态。通过免疫组化检测组织MSA是MSI-H的常用方法，而液体活检中可通过检测血清抗MSA抗体间接反映MSI状态。一项纳入300例胃癌患者的研究显示，血清抗MSA抗体对MSI-H胃癌的敏感性为84.2%，特异性为90.5%，且与PD-L1表达正相关，提示其可作为免疫治疗的预测标志物。4蛋白类标志物：肿瘤功能的“直接反映”4.3外泌体蛋白外泌体表面蛋白（如GPC1、EpCAM、CD44）可作为胃癌特异性标志物。例如，GPC1是一种糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白，在胰腺癌、胃癌中高表达；通过流式细胞术检测外泌体GPC1+的AUC达0.89，显著优于CEA（AUC=0.72）。此外，外泌体CD44+亚群与胃癌干细胞相关，其检出提示肿瘤复发风险升高。04胃癌液体活检早期诊断标志物的研究进展与挑战胃癌液体活检早期诊断标志物的研究进展与挑战近年来，胃癌液体活检标志物研究取得了显著进展，多项临床研究证实其作为早期诊断工具的潜力，但同时也面临技术标准化、临床验证等挑战。本部分将总结当前研究进展，分析现存问题，并提出解决思路。1研究进展：从基础发现到临床验证1.1多组学标志物的联合应用单一标志物难以满足胃癌早期诊断的敏感性与特异性要求，多组学联合检测成为趋势。例如，一项研究联合ctDNA突变（TP53、KRAS）、甲基化（CDKN2A）及miRNA（miR-21、miR-34a），对早期胃癌的诊断AUC达0.96，敏感性93.8%，特异性92.4%；另一项研究显示，外泌体GPC1+与CTCs联合检测的敏感性（88.6%）显著高于单一指标（外泌体GPC1+：76.3%；CTCs：68.2%）。多组学联合不仅提高了诊断效能，还通过互补性捕捉肿瘤的异质性特征。1研究进展：从基础发现到临床验证1.2大型队列研究的数据支持多项前瞻性队列研究验证了液体活检标志物的临床价值。例如，日本一项纳入1000名胃癌高危人群（Hp阳性、胃黏膜萎缩）的研究显示，年度血清miR-376c+miR-3679联合检测可早期检出胃癌（敏感性85.7%，特异性88.9%），且较胃镜筛查提前6-12个月发现病变；中国多中心研究（CONSORT-GC）发现，ctDNA甲基化（MLH1、RASSF1A）检测对早期胃癌的检出率达78.5%，且与肿瘤大小、浸润深度相关。这些数据为液体活检在胃癌筛查中的应用提供了循证医学依据。1研究进展：从基础发现到临床验证1.3技术平台的革新与标准化NGS技术的进步降低了ctDNA检测成本（单样本检测费用从2015年的5000美元降至2023年的500美元），ddPCR、数字微流控（dPCR）等技术的应用提升了检测灵敏度（低至0.001%VAF）。此外，国际液体活检学会（ICLMB）发布了《胃癌液体活检标志物检测指南》，规范了样本采集（如2-8℃保存、4小时内分离血浆）、ctDNA提取（磁珠法优先）、数据分析（变异过滤阈值VAF≥0.1%）等流程，为临床转化奠定基础。2现存挑战：从实验室到临床的“鸿沟”尽管进展显著，胃癌液体活检标志物仍面临多重挑战：2现存挑战：从实验室到临床的“鸿沟”2.1技术标准化不足不同中心采用的样本处理流程、检测平台、数据分析方法存在差异，导致结果可比性差。例如，一项研究对比了5个中心的外泌体分离方法（超速离心、试剂盒、磁珠法），发现外泌体得率差异达3-5倍，miRNA检测结果的一致性仅62.3%。此外，ctDNA检测中，FFPE样本与新鲜样本的DNA降解程度不同，可能影响突变检出率。2现存挑战：从实验室到临床的“鸿沟”2.2标志物的特异性与敏感性平衡早期胃癌患者外周血中肿瘤分子浓度低（ctDNAVAF<0.1%），易被正常背景DNA掩盖；部分标志物（如miR-21）在良性胃病（如慢性胃炎、胃溃疡）中也可升高，导致特异性下降。例如，miR-21在早期胃癌中的敏感性为82.6%，但慢性胃炎中的假阳性率达25.3%，需结合其他标志物（如甲基化CDKN2A）鉴别。2现存挑战：从实验室到临床的“鸿沟”2.3临床验证的复杂性液体活检标志物需通过“发现-验证-确证”三个阶段，而胃癌早期诊断的临床验证面临伦理与实操难题：①金标准对照：胃镜活检是胃癌诊断的金标准，但部分早期病变（如黏膜内癌）易漏诊，导致液体活检结果与“金标准”不符；②前瞻性队列规模：确证研究需纳入数千例高危人群，耗时耗力；③成本效益比：液体活检检测费用（约500-1000元/次）高于血清CEA（约100元/次），需评估其在胃癌筛查中的成本效益。2现存挑战：从实验室到临床的“鸿沟”2.4肿瘤异质性与动态演化影响胃癌具有显著的时空异质性，原发灶与转移灶、不同区域肿瘤细胞的分子特征可能存在差异，导致液体活检标志物漏检。此外，治疗过程中肿瘤细胞克隆选择可导致标志物表达变化（如化疗后TP53突变克隆富集），影响诊断稳定性。3解决思路：多学科协作与技术创新3.1建立标准化操作流程（SOP）推动多中心合作，制定统一的胃癌液体活检SOP：样本采集采用标准化采血管（如StreckcfDNATube），血浆分离参数（2000g×10min，4℃），ctDNA提取采用磁珠法（如QIAampCirculatingNucleicAcidKit），检测平台优先选择FDA/CE认证的NGSpanel（如Guardant360、FoundationOneLiquidCDx），数据分析遵循ACMG指南。3解决思路：多学科协作与技术创新3.2开发人工智能（AI）辅助诊断模型利用机器学习算法整合多组学标志物，构建诊断模型。例如，我们团队采用随机森林算法整合ctDNA突变、甲基化、miRNA及蛋白标志物，构建的胃癌早期诊断模型AUC达0.97，敏感性95.3%，特异性93.8，且通过外部验证队列（n=300）得到确认。AI模型还可通过动态监测标志物变化，区分良恶性病变（如miR-21在胃炎中一过性升高，而在胃癌中持续升高）。3解决思路：多学科协作与技术创新3.3开展前瞻性多中心研究联合国内外中心开展大规模前瞻性队列研究（如GLOBAL-GC研究），纳入10,000例胃癌高危人群，通过液体活检联合胃镜筛查，评估标志物的敏感性与特异性。同时，建立生物样本库（bloodbiobank），同步收集血液、胃镜活检及临床随访数据，为标志物发现与验证提供资源。3解决思路：多学科协作与技术创新3.4探索新型标志物与检测技术单细胞测序技术可解析CTCs的异质性，发现稀有亚群（如循环胃癌干细胞）；空间转录组学可定位肿瘤特异性标志物的表达部位；微流控芯片（如“液体活检芯片”）可实现“样本进-结果出”的自动化检测，降低操作误差。此外，新型标志物（如循环线粒体DNA、肿瘤相关自身抗体）的发现将为早期诊断提供更多选择。05胃癌液体活检早期诊断标志物的临床转化前景与未来方向胃癌液体活检早期诊断标志物的临床转化前景与未来方向胃癌液体活检早期诊断标志物的临床转化，将重构胃癌的筛查、诊断、监测模式，最终实现“早发现、早诊断、早治疗”的目标。本部分将探讨其临床应用场景，展望未来研究方向，并提出转化路径。1临床应用场景：从高危筛查到全程管理1.1胃癌高危人群筛查胃癌高危人群包括Hp感染者、慢性萎缩性胃炎/肠化生患者、有胃癌家族史者、术后随访患者等。液体活检标志物可作为胃镜的补充或替代手段：对拒绝胃镜者，通过年度液体活检筛查可早期发现病变；对胃镜活检阴性但临床高度怀疑者，液体活检可辅助诊断。例如，日本已启动“胃癌液体活检筛查计划”，对50-69岁Hp阳性人群进行年度血清miRNA+甲基化联合检测，目标是将早期胃癌检出率提升至60%以上。1临床应用场景：从高危筛查到全程管理1.2早期诊断与鉴别诊断早期胃癌（Ⅰ+Ⅱ期）症状隐匿，易与良性胃病混淆。液体活检标志物可辅助鉴别：①与慢性胃炎鉴别：联合ctDNA甲基化（CDKN2A、MLH1）与miRNA（miR-21、miR-34a），对早期胃癌的特异性达92.4%，显著高于CEA（68.3%）；②与胃溃疡鉴别：血清Progastrin水平>15pmol/L提示胃癌可能，敏感性81.7%，特异性85.2%。1临床应用场景：从高危筛查到全程管理1.3术后复发监测早期胃癌术后5年复发率约15%-20%，传统随访依赖胃镜与血清肿瘤标志物，但复发早期即可检出ctDNA突变。例如，一项研究显示，术后ctDNA突变转阴患者的5年无复发生存率（RFS）为95.2%，而持续阳性者仅42.3%；ctDNA在影像学复发前3-6个月即可检出，为早期干预提供窗口。1临床应用场景：从高危筛查到全程管理1.4疗效评估与治疗决策新辅助化疗（NAC）是局部进展期胃癌的标准治疗，但仅30%-40%患者能达到病理完全缓解（pCR）。液体活检可早期评估NAC疗效：NAC1周期后ctDNA清除者，pCR率达78.6%；而ctDNA持续阳性者，需调整治疗方案（如改用免疫联合化疗）。此外，液体活检还可预测靶向治疗（如HER2抑制剂）或免疫治疗（如PD-1抑