（正式版）DB21∕T 2268-2014 《球孢白僵菌质量控制及防治玉米螟技术规程》

球孢白僵菌质量控制及防治玉米螟技术规程2014-11-19发布辽宁省质量技术监督局发布I 12规范性引用文件 13定义与术语 14工厂化生产步骤与方法 25包装、贮存、运输 46产品质量检测 57防治玉米螟田间使用技术 6本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由辽宁省农村经济委员会提出并归口。本标准由辽宁省植物保护站负责起草。本标准主要起草人：范垂鹏、朴春树、马辉、张万民、洪晓燕、屈丽莉、张丹、杜冰、梁英。1件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。(Deuteromycotina)丝孢纲(Hyphomyeetes)丛梗孢目(Moniliales)丛梗孢科(Moniliaeeae)白僵菌属为斜面试管生产的菌种(分生孢子)。2马铃薯20%、蛋白胨0.5%、蔗糖2%、磷酸二氢钾0.05%、硫酸镁0.03%、琼脂2%。将灭过菌的斜面培养基置于28℃恒温箱中培养2d,如无杂菌长出，方可供接菌种应用。在25℃±1℃的室内或培养箱中培养(逐日检查，如有杂菌者即剔除);培养7d,可作菌种用。米粉7%、花生枯2%、麦麸2%、蛋白胨0.5%、蔗糖2%。3把按配方配好培养液打开手孔倒入种子罐，并加0.2%消泡剂(花生油或其他食用油),然后上紧手纱布，同时迅速点燃酒精火圈，在火焰上方解开接米粉7%、花生枯2%、麦麸2%、蛋白胨0.5%、蔗糖2%。44.5四级固体开放培养4.5.1配方稻壳与麦麸重量比为6:4。4.5.2固体培养基的灭菌压灭菌压力为1.1kg/cm²,保压60min,冷却后待用；常压灭菌，利用蒸气消毒柜消毒，100℃保温2h,冷却待用。4.5.3培养盘灭菌洗净培养盘，放于常压灭菌柜灭菌30min,冷却待用。4.5.4拌种机灭菌每立方米空间用3ml~5ml40%福尔马林溶液和2g~3g高锰酸钾进行熏蒸灭菌。4.5.5培养室、培养盘支架灭菌培养支架用4脚式长方体钢架结构，上、下间距20cm,支架与培养室一起进行熏蒸灭菌。4.5.6液、固接种采用拌种机进行接种，液固接种比例为1:1.5~1.7;固体培养基厚度为3cm~4cm,一般在温度比较低、空气干燥时可达4cm,温度高时3cm,培养盘表面盖通风透气簸箕为好。4.5.7固体培养室的管理培养室温度控制在18℃~24℃;培养室相对湿度在24h内控制在95%以上；在培养基表面如发现杂菌污染，应马上进行处理；揭盖、培养4d后，待培养基表面菌丝全面复盖变白，可揭去培养盘表面的簸箕，两盘对合，中间留些间隙，培养室的温度可提高到25℃±1℃培养室的相对湿度缓慢降低，培养至第7d,培养基里外都长满了乳黄色的孢子，这时可进行干燥处理。4.6白僵菌粉干燥处理将培养好的原菌粉自然晾干4d,然后进行控温干燥，35℃干燥40h或48℃干燥24h,至原菌粉含水率为12%以下。4.7高孢粉的提取用旋风分离法搅拌扬孢6min~8min,打开残渣出口，将残渣排出后可继续进行抽提工作。要求孢子抽提率达10%以上，孢子回收率达85%以上，含孢量达1000×10⁸个/g以上，孢子粉含水率达12%以下，活孢率95%以上。4.8常规菌粉的加工测定原菌粉的含孢量，然后根据所需的含孢量，按比例加入填充料，配成为100×108个/g、50×1085包装、贮存、运输DB21/T2268—20155按需求采用5kg/袋或10kg/袋，用塑料袋包装后，外层再套编织袋；包装袋内应放菌粉使用说明书，包装外挂放标签(标签内容应包括生产厂家、厂址、产品名称、含孢量、活孢率、含水率、生产日期、防治对象、使用方法和有效期等)。5.2贮存、运输及注意事项贮存应选择干燥通风避光场所，常温贮存不超过180d,超过180d使用的应放于4℃处冷藏。运输中应防潮、防晒、防高温(低于35℃),严禁与杀菌剂混用。6产品质量检测6.1产品质量要求95%以上(1000×10⁸个/g)、90%以上(50×108个/g、100×108个/g)。6.1.3含水率12%以下。6.1.4粉粒细度将孢子粉喷在玉米螟5龄幼虫上后，温度控制在20℃~28℃,相对湿度控制在90%以上，5d~7d,玉米螟出现死亡高峰，7d~10d玉米螟死亡率达95%以上。6.2产品质量检验每批产品抽取一个样品，相当于产品总数的千分之一作送检样品，将样品搅拌均匀后摊平按对角线平均法或随机取样点状抽取各项检验用小样品。6.2.2含孢量测定用精度为万分之一的电子天平称取受检菌粉1g,置于组织捣碎机的玻璃缸内，加蒸馏水100ml,再加入吐温-804mL,捣碎2min,再加入300mL再捣碎1min,制成孢子悬浮液，用纽鲍尔(Neubauer)血球计数板(16×25或25×16的计数板)计数，加盖配套专用的盖玻片，用吸管吸取菌液，沿盖玻片边缘滴入，使菌液充满盖玻片与载玻片之间的间隙(勿出现气泡，侧沟内不能溢出菌液),静止片刻，用600倍显微镜镜检计数。每个样品设3个重复，取其平均值。如果用血球计算板计数格为25个中格，每个中格为16个小格，则计算双线范围内4个角上的4个中格和中间一个中格共80个小格内的总孢子数，计算公式为：6将100mL营养液(蛋白胨0.5%、蔗糖2%或2%麦芽浸粉)加入250mL三角瓶，高压灭菌冷却后，放中格，数出每个中格发芽(孢子膨胀比原孢子大1倍或萌芽长度大于孢子半径)与未发芽孢子数，每个不滴水为准。室温保持25±1℃,相对湿度95%。逐日观察记录玉米螟死虫数在越冬代幼虫化蛹前15d~20d完成封垛。也可采取连续调查方法确定当地封垛时间，即发现有越冬幼虫爬出虫洞口活动，开始封垛进行防治。先将含量为100×10⁸个/g白僵菌可湿性粉剂加少量水进行稀释溶解，配制成母液，再按照1:100的比例对水配制成药液。药液配好后，加入到车载喷雾机中。喷药封垛时按每垛12.5kg菌液(每垛按1hm²玉米秸秆计算)。7.1.4施药方法喷雾时根据玉米螟越冬幼虫惊蛰后从秆内爬出寻水，由垛上向垛下、由垛内向垛外的活动规律，按每平方米1点进行喷雾，喷雾深度30cm~50cm为宜，秸秆垛中、下部可以适当增加密度。为保证防治效果，封垛时，秸秆垛必须要喷匀、喷透，不留死角，村屯路边的零散秸秆也要喷到。7.2颗粒剂防治技术7.2.1颗粒剂制法将孢子含量为100×10⁸个/g的菌粉与20倍细砂混合，再加适量水即