《一种早期快速精准鉴定葡萄苗木生活力和成活率的技术规程》编制说明

《一种早期快速精准鉴定葡萄苗木生活力和成活率的技术规程》

编制说明

一、工作简况

（一）任务来源

为规范葡萄苗木生活力和成活率鉴定技术，由南京农业大学园艺学院提出，经苏园会

〔2021〕8号文件立项批准，由南京农业大学园艺学院承担制定《一种早期快速精准鉴定葡

萄苗木生活力和成活率的技术规程》团体标准。

（二）协作单位

江苏省农业技术推广总站

（三）主要工作过程

成立了标准起草小组，对多个苗木公司的一年生巨峰幼苗进行了苗木质量检测，结合南

京农业大学园艺学院近年来的苗木成活率和生活力检测经验，总结形成了本标准的初稿。

（四）标准主要起草人及其所作工作

房经贵：南京农业大学园艺学院教授，负责指导、执行、修改本标准。

陆爱华：江苏省农业技术推广总站研究员，负责指导、修改本标准。

裴丹：南京农业大学园艺学院研究生，负责写作、执行本标准。

郑婷：南京农业大学园艺学院博士后，负责执行本标准。

卢素文：南京农业大学园艺学院讲师，负责执行本标准。

二、主要技术内容确定的依据

本标准适用于大部分冬季葡萄苗木活力检测。其主要技术要点包括：样品准备、RNA

提取及反转录、cDNA质量检测、看家基因的半定量PCR及其产物检测的操作要求。由于葡

萄在冬季储存及运输的过程中可能出现失水风干等情况，需要对其活力进行鉴定。传统的苗

木质量检测依据外观形态和生理指标等过程繁琐、准确性较差且不能对建园进行提前指导的

缺点。利用分子生物学手段可在生产上可提前精确判断出所购买幼苗的质量，挑选质量较好

的幼苗用于建园，从而加快建园效率，提高果园质量。

本标准内容经过两年重复试验，对辽宁绥中、河北昌黎、山东莱西、江苏张家港等10

个葡萄苗木公司的约200株一年生巨峰幼苗进行了苗木质量检测，也对同期幼苗的萌芽率进

行检测，表明看家基因表达水平与苗木实际生长状况基本一致。

三、主要试验的分析、综述报告，技术经济论证，预期的经济效果

葡萄是多年生果树，高生活力是优质葡萄种苗的重要表现之一，且直接关系到葡萄园的

生产力。葡萄园建园多使用裸根苗，在起苗后到移栽之前受到多种外界因素的影响导致生活

力降低，严重时可出现死苗现象。为确保建园时所用苗木的质量，避免出现苗木生活力弱甚

至苗木无活力等现象，在定植前对幼苗进行生活力的检测至关重要。生活力高的苗木不仅可

以缩短建园时间，还可以为今后果实的生产打下良好的基础。“幼苗质量”包含苗木生活力和

成活率，用于描述幼苗在定植后能够成功存活和生长的程度。一般情况下通过形态学测量幼

苗质量，如高度、茎直径、根部大小和一些生理指标来判断。但是，仅仅通过这些指标无法

准确地判断出幼苗的成活率以及成活以后的生活力。以往葡萄幼苗于春季2月份定植，至4

月份才能观测到苗木成活与否，这样不能及时鉴定苗木成活力易导致缺苗现象。尤其是在冬

季处于休眠期的苗木生命活动轻度弱，生理指标的测定难度较大，检测费时费力且不能快速

精确对苗木生活力进行鉴定。看家基因是一类所有细胞中组成性表达的基因，其产物是维持

细胞各种基本生病活动所必须的。在不同的生长发育阶段或不同的胁迫条件下，看家基因的

表达水平受环境影响较小，表达较稳定。基于看家基因的这一特性，我们发明出一种利用分

子生物学技术在早期、高效、精确鉴定葡萄苗木成活率的方法。通过检测幼苗冬芽的（House

KeepingGenes（HKGs）表达水平的高低精确鉴定出冬芽生活力以及苗木成活率，快速有效

判断出所购买幼苗的质量，挑选质量较好、生活力和成活率较高的幼苗用于建园。并可根据

检测结果精确计算出所需苗木的数量以及定植密度，从而加快建园效率，提高果园质量。

本标准主要涉及了样品准备、RNA提取及反转录、cDNA质量检测、看家基因半定量PCR

及其产物检测等检测步骤。随后根据看家基因半定量PCR产物的有无及亮度高低判断幼苗冬

芽的活力，进一步对葡萄幼苗的生活力及成活率做出判断。

在技术层面上，本标准制定小组成员均有较好的葡萄遗传育种与分子生物学理论、实验

基础，同时小组依托的葡萄遗传育种与基因组学实验室与南京农业大学园艺学院均能为本标

准的制定提供相关的平台支持。在经济层面上，本标准采用分子生物学方法对冬季休眠期葡

萄幼苗的生活力和成活率进行检测，价格适中、耗时短、准确率高，最关键的是能够在定植

前对苗木活力进行检测，避免定植后出现的缺苗现象，最大程度上减少果农的经济损失。

经过两轮试验，对10家苗木公司的葡萄苗木成活率与生活力及进行了检测，部分公司的

葡萄苗木的看家基因表达水平较高，同时萌芽率和萌芽数也达到建园标准。但是也存在部分

公司的苗木以次充好，看家基因检测表达水平低，萌芽率低的现象（低于50%）。以一亩

地在栽种700株葡萄苗为例，当萌芽率低于50%时，需要进行补苗约300株，造成直接经济

损失1500~3000元不等。

四、采用国际标准的程度及水平的简要说明

尚未有类似内容的国际标准为本标准的制定提供参考。

五、重大分歧意见的处理和依据

1.术语与定义中的英文不需要括号。

已采纳该意见。删除了术语与定义中的括号。

2.文本5、6两点，建议量化苗木活力与成活率指标。

已采纳该意见。本标准通过分子生物学手段检测葡萄冬芽中看家基因的表达量对葡萄苗

木活力进行判断，表达水平的如图1所示，条带清晰明亮表明表达量高、苗木活力好，反之

条带模糊暗淡表明表达量低、苗木活力差；通过实际栽培并统计萌芽率、新稍数目等指标进

行验证后表明本标准通过分子生物学手段预测葡萄苗木活力与实际栽培效果基本一致。

3.苗木活力、生活力、成活率之关系？

已采纳该意见。在术语与定义中补充了相关说明。

4.标准文本中列出可检测的5种看家基因，通过5种看家基因来进行判定苗木活力的方

法模糊，该标准文本中应该有一个全面的、科学的判定方法。

已采纳该意见。修订同2。

六、采用江苏省园艺学会团体标准的措施建议

本标准为生产技术标准，并不涉及有关国家安全、保护人体健康和人身财产安全、环境

质量要求等有关强制性标准或强制性条文等的要求，因此建议将其作为推荐性团体标准予以

颁布实施。

七、其它应予说明的事项

暂无。

《一种早期快速精准鉴定葡萄苗木生活力和成活率的技术规程》

编制说明

一、工作简况

（一）任务来源

为规范葡萄苗木生活力和成活率鉴定技术，由南京农业大学园艺学院提出，经苏园会

〔2021〕8号文件立项批准，由南京农业大学园艺学院承担制定《一种早期快速精准鉴定葡

萄苗木生活力和成活率的技术规程》团体标准。

（二）协作单位

江苏省农业技术推广总站

（三）主要工作过程

成立了标准起草小组，对多个苗木公司的一年生巨峰幼苗进行了苗木质量检测，结合南

京农业大学园艺学院近年来的苗木成活率和生活力检测经验，总结形成了本标准的初稿。

（四）标准主要起草人及其所作工作

房经贵：南京农业大学园艺学院教授，负责指导、执行、修改本标准。

陆爱华：江苏省农业技术推广总站研究员，负责指导、修改本标准。

裴丹：南京农业大学园艺学院研究生，负责写作、执行本标准。

郑婷：南京农业大学园艺学院博士后，负责执行本标准。

卢素文：南京农业大学园艺学院讲师，负责执行本标准。

二、主要技术内容确定的依据

本标准适用于大部分冬季葡萄苗木活力检测。其主要技术要点包括：样品准备、RNA

提取及反转录、cDNA质量检测、看家基因的半定量PCR及其产物检测的操作要求。由于葡

萄在冬季储存及运输的过程中可能出现失水风干等情况，需要对其活力进行鉴定。传统的苗

木质量检测依据外观形态和生理指标等过程繁琐、准确性较差且不能对建园进行提前指导的

缺点。利用分子生物学手段可在生产上可提前精确判断出所购买幼苗的质量，挑选质量较好

的幼苗用于建园，从而加快建园效率，提高果园质量。

本标准内容经过两年重复试验，对辽宁绥中、河北昌黎、山东莱西、江苏张家港等10

个葡萄苗木公司的约200株一年生巨峰幼苗进行了苗木质量检测，也对同期幼苗的萌芽率进

行检测，表明看家基因表达水平与苗木实际生长状况基本一致。

三、主要试验的分析、综述报告，技术经济论证，预期的经济效果

葡萄是多年生果树，高生活力是优质葡萄种苗的重要表现之一，且直接关系到葡萄园的

生产力。葡萄园建园多使用裸根苗，在起苗后到移栽之前受到多种外界因素的影响导致生活

力降低，严重时可出现死苗现象。为确保建园时所用苗木的质量，避免出现苗木生活力弱甚

至苗木无活力等现象，在定植前对幼苗进行生活力的检测至关重要。生活力高的苗木不仅可

以缩短建园时间，还可以为今后果实的生产打下良好的基础。“幼苗质量”包含苗木生活力和

成活率，用于描述幼苗在定植后能够成功存活和生长的程度。一般情况下通过形态学测量幼

苗质量，如高度、茎直径、根部大小和一些生理指标来判断。但是，仅仅通过这些指标无法

准确地判断出幼苗的成活率以及成活以后的生活力。以往葡萄幼苗于春季2月份定植，至4

月份才能观测到苗木成活与否，这样不能及时鉴定苗木成活力易导致缺苗现象。尤其是在冬

季处于休眠期的苗木生命活动轻度弱，生理指标的测定难度较大，检测费时费力且不能快速

精确对苗木生活力进行鉴定。看家基因是一类所有细胞中组成性表达的基因，其产物是维持

细胞各种基本生病活动所必须的。在不同的生长发育阶段或不同的胁迫条件下，看家基因的

表达水平受环境影响较小，表达较稳定。基于看家基因的这一特性，我们发明出一种利用分

子生物学技术在早期、高效、精确鉴定葡萄苗木成活率的方法。通过检测幼苗冬芽的（House

KeepingGenes（HKGs）表达水平的高低精确鉴定出冬芽生活力以及苗木成活率，快速有效

判断出所购买幼苗的质量，挑选质量较好、生活力和成活率较高的幼苗用于建园。并可根据

检测结果精确计算出所需苗木的数量以及定植密度，从而加快建园效率，提高果园质量。

本标准主要涉及了样品准备、RNA提取及反转录、cDNA质量检测、看家基因半定量PCR

及其产物检测等检测步骤。随后根据看家基因半定量PCR产物的有无及亮度高低判断幼苗冬

芽的活力，进一步对葡萄幼苗的生活力及成活率做出判断。

在技术层面上，本标准制定小组成员均有较好的葡萄遗传育种与分子生物学理论、实验

基础，同时小组依托的葡萄遗传育种与基因组学实验室与南京农业大学园艺学院均能为本标

准的制定提供相关的平台支持。在经济层面上，本标准采用分子生物学方法对冬季休眠期葡

萄幼苗的生活力和成活率进行检测，价格适中、耗时短、准确率高，最关键的是能够在定植

前对苗木活力进行检测，避免定植后出现的缺苗现象，最大程度上减少果农的经济损失。

经过两轮试验，对10家苗木公司的葡萄苗木成活率与生活力及进行了检测，部分公司的

葡萄苗木的看家基因表达水平较高，同时萌芽率和萌芽数也达到建园标准。但是也存在部分

公司的苗木以次充好，看家基因检测表达水平低，萌芽率低的现象（低于50%）。以一亩

地在栽种700株葡萄苗为例，当萌芽率低于50%时，需要进行补苗约300株，造成直接经济

损失1500~3000元不等。

四、采用国际标准的程度及水平的简要说明

尚未有类似内容的国际标准为本标准的制定提供参考。

五、重大分歧意见的处理和依据

1.术语与定义中的英文不需要括号。

已采纳该意见。删除了术语与定义中的括号。

2.文本5、6两点，建议量化苗木活力与成活率指标。

已采纳该意见。本标准通过分子生物学手段检测葡萄冬芽中看家基因的表达量对葡萄苗

木活力进行判断，表达水平的如图1所示，条带