实验动物实验室的生物安全防护要求

试验动物试验室

生物安全防护要求陕西省中医药研究院试验动物中心姚养正.12.18第1页第1页一、试验动物及试验动物设施二、动物试验室产生生物危害起源

三、试验动物试验室生物安全防护要求

（一）试验动物护理和使用原则（二）动物试验过程行为规范（三）试验动物使用程序和要求四、各级动物生物安全试验室设施与防护要求五、无脊椎动物使用安全原则

六、部分相关法律、法规和部门规范第2页第2页一、试验动物及试验动物设施：以科学研究为目的而进行科学饲养、繁殖动物称之为试验动物。它包括严格意义上试验动物即在一定环境条件控制下，通过科学育种、繁殖生产，遗传背景清楚，携带微生物情况明确，并对其生态学、生物学、生物化学、形态结构理解特殊动物如大鼠、小鼠、金黄地鼠、豚鼠、家兔、犬和小型猪等。也包括一部分家畜、家禽和一些未通过人工驯化野生动物，如猫、羊、非人灵长类、鸡、鸭、鸽、蛇、蛙和鱼类等等。第3页第3页在进行动物试验中，应当重点注意三个方面内容：一是正确选择试验动物，对所用动物必须理解其整体概况二是确保动物应享受福利即人道主义地使用动物三是在使用动物进行一些传染性疾病研究时，必须保护好试验者和周围环境，预防感染和污染。第4页第4页试验动物设施广义是指进行试验动物饲养、保种、维持、生产、试验研究、生物制品生产等设施总称。狭义上指保种、繁殖、生产、育成试验动物饲养场合.试验动物设施类型：依据对饲养动物微生物控制程度和空气净化程度可分为开放系统、屏障系统、隔离系统。第5页第5页试验动物设施试验动物设施分类试验动物和动物试验设施、设备进展屏障系统试验动物环境设施基本要求第6页第6页试验动物设施分类按设施功效分类

1）试验动物生产设施2）动物试验设施3）特殊试验动物试验设施包括感染动物试验设施和应用放射性物质或其它特殊化学物质等动物试验设施。第7页第7页按设施平面布局分类

1）无走廊式普通为普通级设施2）单走廊式可为普通级或清洁级设施3）双走廊式是惯用一个试验动物屏障设施类型。可有效分割清洁区和污染区4）三走廊式动物隔离良好，人员、动物、物品进入有专门通道，可有效避免交叉感染，但空间利用率低，并且投资大

第8页第8页按屏障设施内气流组织形式分类

1、乱流式屏障设施指气流以不平均速度成不平行流动，伴有回流或涡流洁净室。技术指标1）换气次数、换气次数0.1-0.2m/s。2）气流组织其作用是确保均匀地送风和回风，风口布置均匀，以减少涡流和气流回旋。3）自净时间普通不超出30分钟。

2、单向流式屏障设施。第9页第9页按微生物控制程度分类

1、普通环境试验动物生存环境直接与外界大气相通。2、屏障环境进入试验动物生存环境空气须经净化处理，其洁净度相称于10000级。进入屏障内人、动物和物品等均须严格微生物控制，是饲养清洁级SPF级试验动物场合。3、隔离环境洁净度相称于100级。人不能直接接触动物。进入隔离系统内动物和物品都要通过严格净化和灭菌处理。是饲养SPF级悉生动物及无菌动物场合。第10页第10页以落下菌（非致病菌）为指标进行颗粒物污染测定：按5-10m2面积范围，距地面1m处放置1只直径9cm平皿（内置8-10ml血液琼脂），平放30分钟，经37℃48h培养，菌落计数应＜30个/皿。落下菌数：普通动物≤30个；SPF动物≤3个；无菌动物＝0第11页第11页

不同试验动物设施环境级别对应于

不同动物级别，二者对应关系见下表

动物级别和洁净度相应关系动物级别 环境级别（洁净度，落下菌）普通动物 开放系统（30个/皿）SPF动物 屏障系统（万级，3个/皿）无菌动物或悉生动物 隔离系统（百级，0个/皿）第12页第12页试验动物和动物试验设施、设备进展1.动物繁育、饲养设施、设备改变瓦罐→瓷罐→塑料盒+不锈钢笼架开放环境→屏障屏障→隔离环境（正压）感染动物试验室（负压）

屏障环境形式有：单走廊双走廊三走廊（全新风、部分新风）设备改变：平板笼架→层流架→独立通气笼盒系统（IndividuallyVentilatedCagesIVC.）→感染动物笼盒（全封闭、负压、外排双高效串连过滤）第13页第13页2．医学动物试验室种类、设计及使用要求动物试验室种类：用途（教学、科研、生产）试验种类（急性、慢性）动物质量（CV、CL、SPF、GF）对人危害（无害、有害）气流方向（正压、负压）设计原则：小型（分体群控）、实用、以便、达标设计依据：国家原则（GB14925-）第14页第14页屏障系统试验动物环境设施基本要求屏障环境动物试验室要求：△人流、物流、气流要求：单向、合理（避免交叉污染）人流（一更→淋浴→二更→风淋→清洁走廊→清洁物品库→试验室或饲养室→次清洁走廊→一更）物流（外准备室→传递窗或渡槽→清洁物品库→试验室或饲养室→次清洁走廊）气流（清洁物品库→清洁走廊→试验室→次清洁走廊）第15页第15页屏障系统试验动物环境设施基本要求动物及物品灭菌办法动物：合格包装→传递窗（紫外）→进入饮水：高压灭菌（121℃30分钟）或超滤+酸化（PH3.0）→进入笼盒及饲料：高压灭菌（131℃4分钟）或渡槽（传递窗）进入。试验器具：渡槽或传递窗→进入△屏障环境技术参数动态监控第16页第16页屏障系统试验动物环境设施基本要求最适宜温度：20-25℃，温差：3℃或4℃适宜相对湿度：40-70%换气次数：10-20次/小时，洁净程度越高，要求换气次数越多。气流速度：0.1-0.2m/s。压强梯度：洁净区高于污染区，每级压差20-50Pa。合理组织气流和风速可调整室内温度和湿度，又可减少室内粉尘和有害气体污染，控制传染病流行。第17页第17页屏障系统试验动物环境设施基本要求光照：工作照度150-300lx,动物照度18-30lx，明暗交替时间12/12或10/14。噪声：60dB下列，避免高频率噪声和超声波干扰。氨浓度：小于14㎎/m3。动物环境设施指标应符合GB14925-要求：见下表1、2第18页第18页表1试验动物繁育、生产设施环境指标（静态）项目指标小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠犬、猴、猫、小型猪鸡普通环境屏障环境隔离环境普通环境屏障环境隔离环境屏障环境温度，℃18～2920～2616～2820～2616～28日温差，℃≤-4-44相对湿度，%40～70换气次数，次/h8～1010～20120～5028～1010～20120～50210～202气流速度，m/s0.1～0.2压强梯度，Pa-20～502100～150-20～502100～15020～502空气洁净度，级-10000100-1000010010000落下菌数，个/皿≤303无检出303无检出3氨浓度，mg/m3≤14噪声，dB≤60光照工作照度150～300动物照度15～20100～2005～10昼夜明暗交替时间，h12/12或10/14注：表中氨浓度指标为动态指标。普通采用全新风，确保动物室有足够新鲜空气。假如先期清除了粉尘颗粒物和有毒有害气体，不排除使用循环空气也许，但再循环空气仅限于同一单元，新鲜空气不得少于50%。并确保供风温、湿度参数。单走廊设施必须确保饲育室、试验室压强最高。第19页第19页表2动物试验设施（设备3）环境指标（静态）

项目指标小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠犬、猴、猫、小型猪鸡普通环境屏障环境隔离环境普通环境屏障环境隔离环境屏障环境温度，℃19～2620～2516～2618～2216～26日温差，℃≤43433相对湿度，%40～70换气次数，次/h8～1010～20120～5028～1010～20120～50210～202气流速度，m/s0.1～0.2压强梯度，Pa-20～502100～150-20～502100～150100～1502空气洁净度，级-10000100-10000100100落下菌数，个/皿≤303无检出303无检出无检出氨浓度，mg/m3≤14噪声，dB≤60光照工作照度150～300动物照度15～20100～2005～10昼夜明暗交替时间，h12/12或10/14注：表中氨浓度指标为动态指标。普通采用全新风，确保动物房有足够新鲜空气。假如先期清除了粉尘颗粒物和有毒有害气体，不排除使用循环空气也许，但再循环空气应取自于无污染区域或同一单元，新鲜空气不得少于50%。并确保供风温、湿度参数。单走廊设施必须确保饲育室、试验室压强最高。此处动物试验设备系指动物饲养和试验时，保障动物所处局部环境应达到本环境指标设备。第20页第20页试验动物级别一级动物（普通动物）不携带主要人畜共患病和动物烈性传染病病原。二级动物（清洁动物，国际上无此等级）除不能携带主要人畜共患病和动物烈性传染病病原外，不能携带对动物危害大和对科研干扰大病原。三级动物（SPF级，无特定病原体动物）除一、二级动物应排除病原外，不携带主要潜在感染或对科研干扰大病原。四级动物（无菌动物）不携带可检出一切病原体。悉生动物则是在无菌动物物体内移入一个或几种已知微生物后动物。第21页第21页由于试验动物常采用群体饲养，易造成动物疾病爆发和流行。造成动物传染病流行病原各种多样，有病原宿主广泛，属人畜共患病，可同时引起人和动物疾病，就更具危险性。严格试验动物管理制度，预防在先，杜绝人和动物间疾病传播主线确保。包括：1、保障试验动物室生物安全基本办法2、试验动物检疫和疾病控制及处理3、试验动物室消毒办法第22页第22页1、保障试验动物室生物安全基本办法(1)试验动物设施为单独区域，与办公和其它试验场合分开。(2)工作人员应经过培训。取得上岗证。(3)含有一定规模试验动物室建筑，周围最少应有20m卫生间隔区。不同种属、不同品系、不同起源动物必须分室喂养，不同对象、不同内容试验分室进行。各室之间定向气流不能交叉循环。(4)定时检测，更换高、中、低效滤膜，保持系统处于良好状态。第23页第23页（5）选取具备有效试验动物生产许可证书动物。（6）动物、工作人员、物品分别进入屏障及隔离系统，并只能由洁净度高区域向洁净度低区域定向移动。房间随时关门。

工作人员更换工作服、鞋、戴帽、手套、口罩、风淋后方可进入。

动物由动物传递窗，外包装经紫外线照射或喷洒消毒液后传入，入室后检疫3-7天。所有样品、饲料（钴60照射）经槽或渡传递窗紫外线照射或喷洒消毒液后传入。

非试验用具（如食物、饮水、香烟和手机等）一律不得带入动物试验室。第24页第24页(7)器具、饮水瓶、垫料等须经高压灭菌后方可使用。动物饮水、屏障系统内使用灭菌水。(8)每七天更换笼具、饮用水两次。用过器具及时清洗并高压消毒。试验结束后及时清洗并消毒。(9)按操作规程抓持、固定动物，试验操作。(10)设置安全出口、出口批示、灭火器械。配备应急洗眼器。(11)废弃物由污物走廊传出。专门放在指定位置统一处理。第25页第25页2、试验动物检疫和疾病控制及处理（1）凡外来试验动物至少通过3－7天隔离检疫。（2）试验和研究开始前,要确实确保动物无任何疾病，并确保动物避免可影响研究目的及实行原因。（3）动物发生疾病死亡应及时进行病理尸检或其它试验室检查，作出诊断，提出处理意见。当动物发生传染病时，原则上所有销毁。试验室、用具、笼架、垫料、衣帽等必须进行彻底消毒。动物室消毒后封锁一段时间,经检测合格才干使用。要及时汇报试验室责任人或上级主管部门。第26页第26页（4）试验动物发生烈性传染病流行时，应马上上报试验动物检定机构，同时采用严格隔离消毒办法，以免传染病蔓延。

（5）尸体处理：尸体处理普通要求焚烧，深埋，大型动物可消毒加工后利用。第27页第27页3、试验动物室消毒办法动物试验室普通日常清洁消毒制度可结合各试验室不同硬件，但都应满足动物级别和洁净度基本要求。第28页第28页二、动物试验室产生生物危害起源：动物生物安全试验室是一个特殊通过人工或自然感染进行动物感染试验试验室。第一、动物性气溶胶（AnimalAerosol）产生：感染动物在观测饲养期间，它们在呼吸、排泄、抓咬、挣扎、逃逸、跳跃时，在更换垫料、饲料，进行感染接种时，在尸体剖检、病理组织、排泄物处理等过程中会大量产生传播危害性极大动物性气溶胶。因此对气溶胶生物安全防护，应当是动物试验室建设中关键。第29页第29页第二、试验动物尤其是试验用动物(Experjmentalanimals)本身也许患有能感染人人畜共患病（zoonoticDisease）。病比如下：第30页第30页动物试验室出现这两大危害有力阐明：动物试验室无论在操作技术规范制定，个人安全防护设备设置，以及试验室设施设计和建设上，都有很大特点和特殊要求。第一个危害要用试验室设施（二级隔离）来防备，通过静态隔离（负压梯度）动态隔离和排风处理（HEPA过滤）等办法，把产生动物性气溶胶牢牢地控制在污染区内，确保不向外环境扩散。第二种危害，则要用安全防护设备（一级隔离）和其它个人防护设备（personnelprotectiveEquipmentPPES）来预防病原微生物对试验人员感染。

第31页第31页三、动物生物安全试验室设施与防护要求：生物安全动物试验室设计原则就是要做到三保护：保护人、保护环境和保护试验动物。

保护人员免受相关危害。如感染、过敏、中毒或被动物抓挠撕咬等；

保护动物即确保试验动物质量和确保人道主义使用试验动物；

保护环境即确保室内空气、污水及废弃物（垫料、粪便、动物组织、动物尸体）等不污染室外环境。为达到三保护原则，生物安全动物试验室主要通过设施（Facilities）、设备（Equipment）、

人员及素质（trainedpersonal）、原则操作程序等有效结合加以实现。第32页第32页（一）试验动物护理和使用原则1、试验动物饲养和使用应遵守国家相关法律和法规要求。2、应明确使用试验动物理由和目的。3、明确试验所使用动物种类和数量，动物数量应满足统计学要求。第33页第33页4、完善原则操作规程，避免或减轻因试验对动物造成不适和痛苦。5、严格按原则操作程序实行试验后动物处理。6、试验过程中要求确保试验动物良好生活条件。7、研究人员和试验动物操作人员应接受试验动物基本知识和操作技能等方面培训。8、使用过程中要求确保周围环境和试验人员安全。第34页第34页（二）动物试验过程（活动）行为规范：

1、物理限制物理限制是指在试验过程中（包含检验、搜集标本、给药、治疗或试验操作等），用手或工具限制动物活动过程。主要标准和要求包含：①不能作为常规喂养工具；②工具设计应合理；③尽也许降低限制时间，④在限制过程中，假如发生损伤或严重行为改变，应暂停或禁止限制，并给与处理或治疗。⑤确保试验人员和周围人员安全。第35页第35页2、手术操作①操作一定要使用适当镇静、镇痛或麻醉办法；②严禁不必要重复操作；③不提倡利用一个动物进行多个手术试验；④严格试验操作规程，预防发生血液/体液外溅和刺伤，避免生物污染；⑤手术后动物、标本以及所用器具材料等必须按照要求程序妥善处置。第36页第36页3、饮食限制啮齿类试验动物原则上要求自由自由摄食或饮水；假如一些试验需要动物限制食物或水摄入量，应确保动物存活所需要最低需求量。对于水分限量摄入，一定要预防动物发生脱水现象。保持动物膳食平衡。第37页第37页4、废弃物和尸体处理①血液和体液标本处理：用于抗体、抗原、病原微生物、生化指标等检查血液和体液，按照要求进行处理并检测，检测后标本经121℃，30min高压灭菌处理。②动物组织脏器处理：动物器官组织，尤其是用于病原微生物分离组织按照原则程序进行处理；用于病理切片组织，均需通过甲醛固定后再进行切片。剩余组织经121℃，30min高压灭菌处理。第38页第38页③动物尸体处理：安乐死后动物尸体，取材完毕，经121℃，30min高压灭菌处理后，集中送环境保护部门处理。朊病毒感染动物处理原则参见其它相关内容。动物生物安全三级（animalbiosafetylevel3，ABSL-3）试验室及以上级试验室感染动物尸体需经室内和双扉两道高压灭菌，才干移出试验室。④动物咽拭子处理：用于病原分离和PCR检测咽拭子，按照各自要求处理后，进行病毒分离和PCR检测，剩余标本经121℃，30min高压消毒处理。⑤病原分离培养物处理：病原分离培养物，无论是阳性还是阴性结果，均需经121℃，30min高压消毒处理。第39页第39页（三）、试验动物使用程序和要求

1、试验动物基本使用程序和要求（1）试验室如需要使用试验动物，应首先向生物安全和伦理委员会提出申请，填写申请表；（2）使用试验室得到认可后，依据申请中申请动物种属和数量，安排试验动物饲养和使用；（3）试验动物必须在指定区域内饲养和使用，试验操作结束时，动物须返回指定饲养区域内，不能在试验室内过夜。（4）动物试验应在试验室内指定区域进行。第40页第40页2、含有感染性材料动物试验要求

（1）涉及感染性材料操作要在生物安全柜中进行，并预防泄露在安全柜底面；（2）动物笼具在清洗前先做清除污染处理；（3）污物、一次性物品需放入医疗废物专用垃圾袋中，经高压灭菌后方可拿出试验室；（4）动物尸体用双层医疗废物专用垃圾袋包裹后，放入标有动物尸体专用容器中，用消毒液喷雾容器表面后处理。（5）生物安全柜每次使用后应当消毒。第41页第41页2、含有感染性材料动物试验要求

（6）废液需按百分比倒入有消毒液桶中，倒入时需沿容器壁轻倒,应戴眼罩，预防溅入眼中；（7）假如有感染性物质溅到生物安全柜上、地上以及其它地方，应按“菌（毒）外溢在台面、地面和其它表面”处理；（8）天天工作结束时，应用消毒液擦拭门把手和地面等表面区域。（9）废物放入高压灭菌器内时需同时粘贴批示条，物品移出前观测批示条是否达到灭菌要求。颜色不符时需重复高压灭菌。（10）高压灭菌器需每月做灭菌测试一次，并作统计。

第42页第42页3、小动物饲养

小动物主要指小鼠、大鼠、豚鼠等啮齿类动物，其饲养应遵循下列原则：（1）使用动物检查合格，充足准备后进入系统，饲养人员应按试验设施要求程序要求进入系统；（2）及时观测动物饮食、精神情况，有无异常表现，患病或死亡；（3）动物应可自由进食、饮水，同时确保其它饲养条件完备。第43页第43页4、大动物饲养

大动物主要指犬、猪及非人类灵长类动物等，其饲养应遵循下列原则：(1)使用动物检查合格，按检疫要求充足准备后方可进入动物试验室；(2)应将每只动物日摄取总量分批次喂给，以确保动物进食量和减少浪费；(3)应经常检查饮水装置，及时补充不足。第44页第44页4、大动物饲养(4)动物饲养区域应天天打扫，保持清洁，每七天将地面消毒3次；(5)喂给瓜果、蔬菜等须洗净消毒，严禁喂给腐烂发霉不洁食物，饮水要清洁。(6)对饲喂动物所用小推车、食物容器、水容器等用具每七天进行两次消毒。(7)室内光照，要求明暗各12h自动交替（开灯12h，关灯12h）。第45页第45页5、动物检疫

（1）试验动物进入检疫室；（2）依据要求进行检疫；（3）各动物检疫期不同，大动物为2周，小动物为1周；（4）在检疫期内观测动物精神状态、食欲、营养情况、排泄物等，如有任何异常，动物不得用于试验，应退出动物检疫室；（5）检疫合格动物经适当处理后由缓冲间或物流通道进入动物试验室。第46页第46页6、动物试验相关操作（1）投药：依据试验要求，按不同动物，不同路径给药。主要包含灌胃和静脉注射。大动物，将动物麻醉后方可进行灌胃或静脉注射。小动物可依据情况选择是否麻醉，静脉注射时需使用固定器。（2）采样：标准上活检时应对动物进行麻醉。大动物进行采血或体检时，要求将动物麻醉。对小动物进行采血时，可不麻醉动物，但要预防动物咬抓。（3）标本运输：要求用防渗漏容器装标本。容器应确保密封。将大、小动物标本从试验室传出应严格按照相关要求程序执行。（4）送检单填写：送检单应包含送检目标，送检物品，送检单位，送检人，送检日期，联络方式等内容。第47页第47页四、各级动物生物安全防护

试验室设施与防护要求（一）一级动物生物安全（ABSL-1）试验室（二）二级动物生物安全（ABSL-2）试验室（三）三级动物生物安全（ABSL-3）试验室（四）四级动物生物安全（ABSL-4）试验室第48页第48页为了预防感染病原微生物动物试验室,可能对观测试验动物人员以及其它试验室造成污染，要求这类动物试验室应是一个相对独立区域。假如与普通动物试验室毗连，则设计上应该同试验室公共部分分开，并便于去除污染。因为试验内容不同，尤其是进行微生物试验研究，使用动物也有详细要求。第49页第49页动物试验室中使用微生物

危害评估，需要考虑一下原因：病原微生物传播路径；病原微生物标本使用容量和浓度；病原微生物接种路径和办法；病原微生物以何种路径被排出体外；病原微生物总体危险程度。第50页第50页使用动物，需要考虑原因：动物自然特性，包括动物袭击性和抓咬倾向性；自然存在体外微生物和寄生虫等；易感动物性疾病；动物接种病原微生物后也许产生结果等。第51页第51页动物室建筑要求是避免外界微生物感染饲养清洁级或SPF级动物，因此空气是外排，而动物是清洁。此时，进入试验室工作人员反而也许作为传染源感染动物。生物安全试验室建筑理念则与之相反，在ABSL-3试验室内动物是不安全原因，要避免动物及其排泄物污染外界环境，因此ABSL-3试验室内是负压，空气是向内流。动物生物安全试验室和生物安全试验室同样，主要依据所研究病原微生物危害评估结果和危害程度分类划分为一级、二级、三级和四级动物安全水平。第52页第52页第53页第53页（一）一级动物生物安全防护试验室

适合用于检疫后大多数种属动物（灵长类除外），以及专门接种了危害程度第四类微生物如大、小鼠及金黄地鼠白血病病毒、小鼠乳腺瘤病毒等动物饲养和操作。设置要求：试验室与建筑物中普通通道不须隔开,普通在试验台上操作。防护设备：普通不要求专用防护设备。

第54页第54页试验室设施要求：

1、试验室设计与建筑应便于清洁。2、试验台表面不透水，耐酸、碱、有机溶剂、并耐热。3、试验室设备坚固。试验台、柜及设备之间空间应有适当距离便于清洁。4、试验室区及动物饲养区应设洗手池。5、如试验室有可开关窗子应装上纱窗。第55页第55页试验室设施要求：

6、试验室空气直接外排，不得再循环或回流至其它动物喂养区。7、建筑物内动物设施应与开放人员活动区别开。8、应安装自动闭门器，当有试验动物时应保持锁闭状态。9、假如有地漏，应一直用水或消毒剂液封。10、动物笼具洗涤应满足清洁要求。第56页第56页原则微生物学规范：

1、试验人员从事试验工作，需由试验室责任人同意，并决定限制或严禁其它人员进入试验室。2、工作面天天消毒一次，并及时对溅落活微生物材料进行消毒。3、采用机械吸液装置，严禁用嘴吸液。4、在试验区内严禁饮食、吸烟、处理隐性眼镜及化妆，食物应存储在专用储藏柜或冰箱内，保留食物柜子或冰箱应放置在试验区以外。第57页第57页原则微生物学规范：5、试验人员在操作活微生物材料及动物后，离开试验室之前均应洗手。6、所有污染液体或固体废弃物在处理前应清除污染。感染动物尸体需用防漏、有盖容器运出并焚化。7、所有操作均应按规程仔细小心进行，使气溶胶产生减至最底程度。8、动物饲养区门需能自动关闭，向内启动，平时保持关闭状态。9、试验室应有防昆虫及鼠类办法。第58页第58页特殊规范：

1、需告知进入试验室人员潜在危害，符合特定要求人员方能由责任人同意进入。2、试验室要制定生物安全手册，供需要进入工作人员阅读并按程序执行。3、提议穿长工作服，以预防污染。动物室工作服不能穿到其它试验区域。4、需运至试验室外进行消毒处理污染材料，应装入坚固、密闭容器。5、动物用笼架具可用手洗及机洗。洗涤应满足清洁要求。第59页第59页（二）二级动物生物安全试验室

与动物试验一级生物安全水平相同，适合用于那些对人及环境有中度潜在危险微生物和动物试验工作，其不同点在于：①人员经过操作病原性物质专门训练，并由能胜任科学人员监督管理；②正在工作时限制外人进入试验室；③一些产生传染性气溶胶工作在生物安全柜或其它物理封闭设备内进行。设置要求：用生物安全柜或其它个人防护用具，或物理阻隔装置第60页第60页防护要求：

一级防护：应在生物安全柜操作包括容易产气愤溶胶操作，如高浓度或大量微生物材料离心；个人防护包括穿专用试验室防护外衣、罩衣、长衣或专门制服，戴护目镜、口罩、面罩等，处理动物时要戴双层手套，离开试验室时要把这些衣物留在试验室内消毒处理，严禁带出试验室。

二级防护：高压蒸汽灭菌柜；眼睛冲洗设备。第61页第61页防护设备：

1、产气愤溶胶可能性大操作，包含离心、研磨、匀浆、强烈震荡或混合、超声波破碎、开启内压与环境压力不同传染材料容器、动物接种、由动物或鸡胚收获感染组织。2、使用高浓度或大容量传染性物质时，如采取密封转头或离心机安全罩可在试验室内离心上述材料。3、进入非人灵长类动物试验室人员需配戴保护面部、眼镜等装备。4、在试验室内应穿专用工作服、帽子、口罩、鞋，离开试验室到非试验室区时，应脱下工作服。第62页第62页试验室设施要求：

除满足ABSL-1设施要求外，还应有高压蒸汽灭菌器，供传染性试验室废弃物处理专用。第63页第63页原则微生物学规范：

ABSL-2原则微生物学规范同ABSL-1。

第64页第64页特殊规范：

ABSL-2试验室特殊规范除满足ABSL-1要求外还应注意：试验室责任人应拟定进入试验室人员资质。在普通情况下，应严禁高度易感人群，如孕妇或免疫受损人员进入。操作传染性物质试验室，要有进入试验室特殊要求（如进行预防接种）。在进入动物试验室试验区门上标明“生物危险”警告标志，包括通用生物危险性标志，标明传染性物质种类、试验室责任人或其它人姓名、电话、以及进入试验室特殊要求。工作人员需进行意外事故发生后紧急处理办法培训，并确保培训统计。由于泄漏或事故造成传染性材料明显暴露时，应马上向试验室责任人汇报。应按要求进行医学评估、检查及处理，并保留书面统计。注射及吸取传染性液体应使用针头固定注射器。第65页第65页特殊规范：

要尤其注意预防经皮肤感染，尤其是要避免被动物抓、咬伤。废弃物在处理前应去除污染。笼具需经高压灭菌或去污后方可洗涤。与试验无关动物不允许放在试验室内。依据传染因子情况，开展工作前采集并保留全部试验人员及有被感染危险其它人员本底血清样品。采集第二份血清样品间隔时间可随所用传染因子及试验室情况不同而异。制订生物安全手册，对工作人员说明特殊试验危险性，并要求他们严格恪守。第66页第66页（三）三级动物生物安全试验室

设置要求：用生物安全柜或其它个人防护用具，或物理阻隔装置第67页第67页防护设备一级防护：使用Ⅱ级或Ⅲ级生物安全柜，戴防毒面具，穿着背开衣或罩衣、长衣和连裤衣，重复使用必须消毒。二级防护：隔离，通过两道自动连锁门才干进入，内设更衣室，随时可淋浴。有脚动或肘动或自动开关洗手池，设在试验室出口处。排出空气至少有一道HAPE过滤，空气不准在建筑物其它区域循环使用；制定系统维修制度和消毒办法并严格执行。Ⅱ级或Ⅲ级生物安全柜1年必须检测鉴定1次，排放空气可在室外循环。眼睛清洗器随时可用。第68页第68页防护设备：

1、在试验室内穿上保护便服用试验服（如后开口服、全身覆盖服、两件套服、连衣裤）。2、在有传染性动物室内应戴模压面罩或防毒面具。3、动物试验需加戴防撕咬手套，无菌方式摘除后与动物室废弃物一同处理。4、专用靴子等防护性鞋罩，脱除之前要消毒。5、动物饲养笼可戴滤过帽或在负压式IVC或隔离器饲养。第69页第69页

试验室设施要求：

1、动物试验室须在整体建筑自成一区。可通过隔离门与公共走廊相连。2、动物试验室通道门需互锁。3、墙、地面、顶棚内表面应防水，以便于清洁及消毒。这些表面连接处应已密封或能密封，以便于该区域清除污染。4、每个试验室设置洗手池。洗手池要有支架、肘推开关或自动开关；并设在试验室出口处。5、试验室内窗户关闭，并密封。第70页第70页6、试验室进出门、或封闭组件能自动关闭。7、动物试验室通风设备启动时，按先开排风机后开送风机顺序进行，关闭时先关送风机后关排风机。8、由生物安全柜排出气体经HEPA滤器过滤后可直接排放，或通过建筑物中排气系统排放；生物安全柜应每12个月检查一次，其排出空气能够在试验室内再循环。如由生物安全柜排出经HEPA滤器过滤空气要通过建筑物排气系统排放，其连接办法（如套管部件连接）应能避免干扰生物安全柜或建筑物排气系统空气平衡。9、应有通讯设备和闭路电视监控系统。第71页第71页原则微生物学试验要求：ABSL-3原则微生物学规范同ABSL-1第72页第72页特殊规范：

ABSL-3试验室特殊规范，满足ABSL-2要求外，还应注意：1、当试验室或封闭单元内有传染性材料或感染动物时，在进入试验室或动物室门上应标明“生物危险”警告标志，涉及通用生物危险性标志，标明传染因子名称，试验室责任人或其它责任人姓名，电话号码，以及进入试验室一些特殊要求，如相关人员必须免疫，戴防毒面具或采用其它个人防护办法。2、所有涉及传染性材料活动都应在封闭单元中生物安全柜或其它物理封闭设备内进行。不得在敞开试验台进行敞口容器操作。3、在传染性材料操作结束时，生物安全柜及其它封闭设备工作面应清除污染。4、真空管线用高效空气过滤器及液体消毒剂消毒装置。第73页第73页（四）四级动物生物安全（ABSL-4）试验室

设置要求：用生物安全柜或其它个人防护用具，或物理阻隔装置。第74页第74页防护设备：

1、所有动物必须饲养在隔离器内。2、所有感染性材料操作都必须在三级生物安全柜中进行。有生命维持系统试验室，相关操作可在二级生物安全柜内进行。3、进入试验室时，工作人员必须脱下包括内衣裤所有日常服装，并换上专用防护服。工作结束后，必须脱下防护服进行消毒，淋浴后再拜别。4、设施必须安装带有HEPA过滤器排风系统进行通风，以确保室内负压（向内气流）。第75页第75页防护设备：

5、通风系统必须能预防气体逆流及出现正压。6、必须配备双门高压灭菌器来传递物品，洁净端在防护室外房间内。7、必须配备传递气锁舱以供不能高压灭菌物品，其洁净端在防护室外房间内。8、在进行感染危害程度第一类病原微生物动物操作时，均必须在四级生物安全水平最高防护试验室中进行。第76页第76页试验室设施要求：

1、使用生物安全柜和正压试验室。前者进行微生物操作时均在三级生物安全柜中进行。后者工作人员穿戴携带有生物维持系统特殊防护服装，进行相关试验研究。2、设有化学消毒淋浴室。

第77页第77页原则微生物学规范：

必须符合一级、二级及三级生物安全水平动物设施所有要求。严格限制进入，只有试验室责任人指定工作人员方有权进入。严禁单独工作，必须遵守双人工作制度。第78页第78页特殊规范：

1、工作人员必须已经接受过最高水平微生物培训，熟悉其工作中所涉及危害以及必要预防办法。2、饲养感染危害程度第一类病原微生物动物区域，必须遵循四级生物安全水平最高防护试验室防护原则。3、工作人员必须进行医学检测。第79页第79页放射性同位素动物试验设施：设施要求预防放射性同位素对人影响，预防射线对普通动物和环境放射能污染及同位素泄漏。设计建造时应严格遵守GB4792-84《放射卫生防护基本原则》、GB8703-88《辐射防护要求》、GB11928《低、中水平辐射性固体废物暂时贮存