好奇！IHC、ICC和IF如何简单区分？一文理顺免疫组化3大核心实验技术原理

好奇！IHC、ICC和IF如何简单区分？一文理顺免疫组化3大核心实验技术原理免疫组织化学、免疫细胞化学与免疫荧光是基于抗原-抗体特异性结合的三大实验核心技术，用于生物研究中的蛋白质定位、定量和功能分析。然而，文献或抗体说明书中繁杂的简写经常让我们傻傻分不清，如IHC-P、IHC-Fr、IF/ICC。「IHC诊断室」将从技术原理、样本类型、显色方法等维度对这三大技术进行区分，为你在实验设计和抗体选择过程中提供理论依据。姓甚名谁：词根区分IHC是英文字母Immunohistochemistry的简写，中文名为免疫组织化学。其利用抗原抗体的特异性结合及化学反应使显色剂显色，对组织切片中的蛋白质进行定位、定性或定量研究。IHC使组织维持在原始结构，适用于观察细胞间连接、组织微环境及病理改变。IHC-P和IHC-Fr是两种不同的IHC技术，主要在于组织样本的样式。IHC-P为石蜡切片的免疫组织化学，ImmunohistochemistryParaffin。IHC-Fr为冷冻切片的免疫组织化学，ImmunohistochemistryFrozen。如果是使用荧光信号进行检测，还可能会分为IF-P（Immunofluorescence-Paraffin石蜡切片的免疫荧光）和IF-Fr（Immunofluorescence-Frozen冰冻切片的免疫荧光）。ICC的英文是Immunocytochemistry，中文名为免疫细胞化学，对分离的细胞样本（如培养细胞、脱落细胞、细胞爬片）进行蛋白质定位、定性或定量研究。目前几乎不再使用酶促显色了，以荧光显色为主，所以ICC/IF常一起使用，特指细胞免疫荧光技术。ICC检测技术中细胞样本制备过程不像组织样本那样需要复杂的环境和繁琐的操作，细胞形态更为均一，空间分辨率更高，适用于多种细胞学样本，如干玻片、乙醇固定玻片、直接涂片、细胞离心涂片、液基细胞学样本等。IF的英文是Immunofluorescence，中文名为免疫荧光，不区分样本类型（组织或细胞），也不区分样本制备类型（石蜡切片或冰冻切片），区别在于检测信号是“光”而不是“颜色沉淀”。IF可进行多种荧光染色，进行多重标记，用于评估大分子的共定位。可通过词根来区分IHC、ICC和IF。如Histo-表示组织，Cyto-表示细胞。Chemistry-指化学检测方法，Fluorescence-指被激发的荧光团检测。词根释义Immuno-免疫反应，如抗原与抗体的特异性结合Histo-组织，细胞及其周围细胞外基质的完整结构Cyto-细胞，不包含细胞外基质Chemistry化学检测，如酶促反应Fluorescence荧光检测，光信号检测体系二、核心本质区别2.1样本类型（组织

VS

细胞）这是区分IHC和ICC的关键。IHC是保持组织的原始结构，如肝脏组织、肿瘤组织，包括IHC-P和IHC-Fr，ICC是脱离组织微环境的单个细胞、细胞团或细胞簇，如培养皿中的Hela细胞，以及临床诊断中常见的胸腹水、痰液、尿液、宫颈刮片、细针穿刺吸取物等临床细胞样本。2.2检测信号（酶促

VS

荧光）IHC常使用酶（HRP/AP）催化底物产生有色沉淀（如棕褐色）进行显色检测，在普通光学显微镜下观察，结果能够长期保存。IF使用荧光染料（FITC、TRITC等）在荧光显微镜下观察结果，背景通常是黑的，灵敏度高，但容易淬灭。2.3样本制备方式（仅针对组织）根据样本类型可以将IHC分为石蜡切片免疫组化（IHC-P）和冰冻切片免疫组化（IHC-Fr）。石蜡切片操作复杂，但能更好的保持组织的形态结构，切片薄，可连续观察，某些显色产物（如DAB）可长期保存，在实验中更为常用。冰冻切片能更好保存抗原活性，但组织在冷冻过程中易产生冰晶，破坏超微结构，组织形态结构较差。IHC-P和IHC-Fr的区别如下表：维度石蜡切片（IHC-P）冷冻切片（IHC-Fr）包埋剂石蜡冷冻包埋剂（OCT）固定先固定后切片切片前或切片后固定切片厚度基本为4μm5-50μm切片条件石蜡切片机冷冻切片机组织脱水必需非必需切片水化必需非必需抗原修复必需非必需洗涤液PBS或TBSTPBS或TBST封闭液一般用10%的二抗血清一般用10%的二抗血清为了让您一目了然，我们整理了这张对照表。维度IHCICCIF样品类型组织细胞组织或细胞样品制备石蜡包埋（IHC-P）或冷冻切片（IHC-Fr）多聚甲醛固定石蜡包埋、冷冻切片或多聚甲醛固定核心样本石蜡切片、冰冻组织切片细胞爬片、离心涂片、细胞悬液组织切片或细胞样本显色系统酶促反应为主荧光显色为主荧光显色检测设备光学显微镜荧光显微镜荧光显微镜信号持续性DAB染色可长久保存暂时性暂时性多重染色酶促难，荧光容易酶促难，荧光容易容易分辨率较低酶促低，荧光高高结果呈现酶促为棕褐色沉淀，也有红色、蓝色等常见红色荧光和绿色荧光信号主要应用临床诊断，组织中细胞定位，回顾性研究蛋白表达定性或定量，细胞水平筛查亚细胞定位，蛋白共定位，活细胞动态观察三、技术选择：按需匹配无论是IHC、ICC还是IF，理清逻辑就能避免混淆，明确实验目的就能轻松选择。IHC和ICC属于应用场景范畴，两者之间的差别在于样本类型。如果研究对象是肿瘤组织、器官切片等完整组织，需要保留组织结构和细胞间连接，或进行临床病理诊断，需要选择IHC。如果研究对象是细胞系、原代细胞等，需要判断细胞是否表达目的蛋白或分析单个细胞中目的蛋白的表达情况，可以选择ICC技术。IF属于检测工具。无论样本是组织还是细胞，采用荧光素标记抗体进行检测时均属于IF。需要明确目的蛋白在细胞内的具体定位（细胞膜或细胞核），或者分析蛋白是否存在共定位作用，优先选择IF技术。技术推荐研究目的优势IHC-P临床病理诊断，如肿瘤分型、标志物检测结果稳定，可长期保存IHC-Fr对甲醛敏感的抗原检测抗原保存完整，无需修复。可快速检测，周期短IHC-P/IHC-Fr组织微环境研究维持组织结构ICC细胞系表达筛查操作简单，高通量IF亚细胞定位，共定位分析，多重荧光标记分辨率高，同时观察多个靶点正确解读抗体应用说明书不同抗体厂商对IHC、ICC、IF的定义存在差异，在实验设计前一定要仔细核对产品说明书。如义翘神州的抗体产品，会明确标注IHC-P和IHC-Fr，以区分石蜡切片和冰冻切片，但ICC和IF未做区分，标注为ICC/IF指细胞免疫荧光。Abcam采用类似的标注体系，但ICC会单独标注。

结语：