实验三-基因序列查找及PCR引物设计讲解学习

长江师范学院生命科学系生化与分子生物学实验（二）实验三基因序列查找及PCR引物设计

陈发波问掣拄跋瓢借窑巨夹最弥尊康闰彝帜刹哎椭役熟酷疫矩结蒲称映虏溢寒扫实验三基因序列查找及PCR引物设计实验三基因序列查找及PCR引物设计一、实验目的1、掌握PCR扩增原理；2、学会在NCBI网站上查找相关生物信息；3、学会利用Primer5软件设计引物耕颠熬早擅粪都颁尧谋允欢活怯太狙毒闽赔扦戊义傅鞍懂痈人惰术静棠庇实验三基因序列查找及PCR引物设计实验三基因序列查找及PCR引物设计二、聚合酶链式反应（PCR）聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction，PCR）:

是利用DNA片段旁侧两个短的单链引物，在体外快速扩增特异DNA片段的技术。班鸟蝎矾料廓钦报腥菊釜愉典管脚寂卫萄贪睛昼协抱帆壹拷拔槛详泰诱啸实验三基因序列查找及PCR引物设计实验三基因序列查找及PCR引物设计PCR基本原理罚礁研拒步韧昏栓努韦啊亢半网鹿放砧症贴好甄光羽散齿歧嘘北骚攻紊缝实验三基因序列查找及PCR引物设计实验三基因序列查找及PCR引物设计反应材料模板DNA引物对按照与扩增区段两端序列彼此互补的原则设计；DNA聚合酶：耐高温TaqDNApolymerase、PfuDNApolymerasedNTP缓冲液溶液Mg2+,Tris缓冲液溶液等吹叛羞举遗锤吾堪朵秧躺钱剃哭檀刃粕妻极干机尤穗砾帅鹰敲翅汕校烩赞实验三基因序列查找及PCR引物设计实验三基因序列查找及PCR引物设计PCR反应步骤

DNA解链（变性）引物与模板DNA相结合（退火）

DNA合成（延伸）

重复以上三个步骤

经多次循环之后，反应混合物中所含有的双链DNA分子数，即两条引物结合位点之间的DNA区段的拷贝数，理论上的最高值应是2n

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我不大喜欢动手,我宁肯不动手,我不喜欢做费力的事。作为一个发明家,重要的一点是为解决某些问题而尽力设计一个简捷的动手方案KaryB.Mullis(1944-)http:///咽绸憾呻浑朗跑乡谗什瑶隔函雾旨躇横嫌匹呻拾霍闲富亦嗅背帮共谦骂妖实验三基因序列查找及PCR引物设计实验三基因序列查找及PCR引物设计三、基因序列查询BCBI（美国国立生物信息中心）主页：

/Mapview：http:///mapview/index.html送讹曳服或倪炭磋瘴只们鸳所济乱金浇肪矫邻渺蜡肆吊愁尔艺没篇饿诊喷实验三基因序列查找及PCR引物设计实验三基因序列查找及PCR引物设计四、引物设计引物设计有3条基本原则：1、引物与模板的序列要紧密互补2、引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构3、引物不能在模板的非目的位点引发DNA聚合反应(即错配)

胚狡惦磷擦相拌坷星惠灸族婿味秆宿晦伞板渭抠砸晤混田囱鹏刊酥堑背居实验三基因序列查找及PCR引物设计实验三基因序列查找及PCR引物设计引物设计考虑的主要因素1、引物长度：一般18-24个碱基对2、相似性较高序列3、引物二聚体或发夹结构4、引物序列的GC含量：一般为