DB32-T 5372-2026 医用凝胶类产品检验前处理技术规范

DB32/T5372—2026医用凝胶类产品检验前处理技术规范Technicalspecificationforpreinspectiontreatment2026-04-03发布江苏省市场监督管理局I前言 Ⅲ 12规范性引用文件 13术语和定义 14检验前处理方法分类 15强酸沉淀法 25.1原理 25.2试剂 25.3设备 25.4处理方法 25.5注意事项 36盐析超滤法 36.1原理 36.2试剂 36.3设备 36.4处理方法 36.5注意事项 37有机溶剂萃取法 47.1概述 47.2试剂 47.3设备 47.4处理方法 47.5注意事项 4附录A(资料性)前处理组合调整方式示例 5参考文献 7Ⅲ本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由江苏省药品监督管理局提出并组织实施。本文件由江苏省医药标准化技术委员会归口。本文件起草单位：江苏省医疗器械检验所、南京天纵易康生物科技股份有限公司。1医用凝胶类产品检验前处理技术规范法的要求。型凝胶)进行相关检测和试验前的处理过程。本文件没有规范性引用文件。下列术语和定义适用于本文件。利用物质在酸性条件下生成沉淀的性质达到分离的方法。利用蛋白质水溶液在加入中性盐后生成沉淀达到分离的方法。利用系统中各组分在溶剂中溶解度不同的性质达到分离混合物的方法。常用的医用凝胶类产品检验前处理方法主要有强酸沉淀法、盐析超滤法和有机溶剂萃取法。具体方法选择可根据实际检测项目进行组合调整，组合调整方式示例见附录A。表1给出了上述方法适用的产产品类别方法目的代表产品蛋白类(有干扰物质影响蛋白沉淀，分离后备用蛋白类(存在不同分子量蛋白留液备用明质酸钠凝胶2表1医用凝胶类产品检验前处理方法分类(续)产品类别方法目的代表产品利用有机溶剂萃取，收集有机相备用5强酸沉淀法5.1原理通过强酸的酸性特征，降低医用凝胶类产品体系的pH,产品体系的pH接近于蛋白质的等电点，致使蛋白质的净电荷接近于零，分子间相互排斥力减弱，聚集力增强而形成沉淀。5.2试剂5.2.110%(体积分数)三氯乙酸、6%(体积分数)高氯酸、5%(体积分数)偏磷酸、0.01mol/L磷酸盐缓冲液(PBS缓冲液)。5.2.2除非另有说明，本方法所用的试剂皆为分析纯，水为符合《中华人民共和国药典》2025年版标准的纯化水。5.3设备分析天平(分度值为0.0001g)、超声波清洗器、分液漏斗、低温冷冻离心机、超滤管等。5.4处理方法5.4.1强酸选择强酸可以选择任一种：10%三氯乙酸、6%高氯酸、5%偏磷酸。5.4.2强酸沉淀处理取待检测医用凝胶类产品5g～10g,加入等质量的强酸溶液，超声(超声频率为20kHz～40kHz)5min~10min(推荐的超声频率与超声时间对应如表2所示);将超声后的凝胶/强酸混合物在离心转速6000r/min～12000r/min、4℃~20℃低温条件下离心5min～10min;除去离心后上清液，取沉淀，用0.01mol/LPBS缓冲溶液复溶后，用于后续检测。图1给出了强酸沉淀法前处理流程。表2推荐超声频率与时间对应关系表5图1强酸沉淀法前处理流程图5.5注意事项酸沉过程中所使用的强酸试剂具有高腐蚀性和强刺激性，实验人员应做好防护，实验过程应在通风橱中进行。6盐析超滤法6.1原理高浓度的盐离子可以夺取蛋白质分子的水化层，导致蛋白质失水并沉淀，结合超滤膜两侧的压力差为传质动力，根据溶质分子之间相对分子质量的差异进行分离，只有小于膜孔径的分子才能通过膜，而大于膜孔径的分子则被截留。6.2.1硫酸铵溶液、0.01mol/L磷酸盐缓冲液(PBS缓冲液)。6.2.2除非另有说明，本方法所用的试剂皆为分析纯，水为符合《中华人民共和国药典》2025年版的纯化水。6.3设备分析天平(分度值为0.0001g)、机械搅拌机、超滤管等。6.4处理方法6.4.1硫酸铵盐析取待检测医用凝胶类产品5g～10g,加入等质量的质量浓度为50%～70%的硫酸铵溶液，在转速100r/min~300r/min下搅拌5min~10min;搅拌结束后利用PBS缓冲溶液透析5min~10min。6.4.2超滤将透析后的样品利用不同孔径的超滤膜(超滤膜孔径依据待测蛋白质的分子量范围进行选择)进行超滤，超滤的工作压力范围在0.1MPa～0.6MPa,分别收取截留液和超滤液待用。图2给出了盐析超滤法前处理流程。6.5注意事项依据待检测成分的分子量大小，超滤后选择截留液或超滤液进行浓缩后处理。47有机溶剂萃取法利用两种互不相溶且具有密度差的液体，通过它们之间的溶解度和分配性质的差异，实现物质从一种相转移到另一种相的过程，从而实现有效分离。7.2.2除非另有说明，本方法所用的试剂皆为分析纯，水为符合《中华人民共和国药典》2025年版的纯化水。分析天平(分度值为0.0001g)、分液漏斗、真空干燥箱、旋转蒸发仪、冷冻干燥器等。7.4处理方法取待检测医用凝胶类产品5g~10g,先加入等质量的纯化水，混合均匀后加入分液漏斗中；加入与上述溶液等质量有机溶剂(如甲苯、乙酸乙酯、乙醚等),在通风橱中进行萃取操作，振摇3min~5min后，打开漏斗上盖静置，至漏斗中的气泡消散(若气泡长期无法消散，可加入少量无水硫酸钠),收集有机相，重复萃取3次。以下为3种有机溶剂去除法，可根据检验实际情况选择相应的方法：a)旋转蒸发法：以甲苯为例，收集后的有机溶剂采用旋转蒸发去除，水浴温度范围为40℃~60℃,真空度范围为100mbar~300mbar(10kPa~30kPa),转速范围为100r/min～200r/min冷凝剂温度为—5℃~10℃;b)真空干燥法：以乙酸乙酯为例，收集后的有机溶剂采用真空干燥去除，温度范围为30℃~50℃,真空度范围为50mbar～300mbar(5kPa～30kPa),干燥时间约6h;c)冷冻干燥法：以乙醚为例，收集后的有机溶剂采用冷冻干燥去除，预冻阶段的温度设置需在—80℃以下，真空度设置范围为0.1mbar~10mbar(10Pa～1kPa),冷阱温度≤-80℃。收集去除溶剂后的样品待测。图3给出了有机溶剂萃取法前处理流程。图3有机溶剂萃取法流程图7.5注意事项根据所需萃取的油性物质特性，选择有机溶剂。甲苯、乙醚等有机溶剂具有一定毒性，试验全程应在通风橱内进行。收集后的有机溶剂应按照三废处理原则处理。5(资料性)前处理组合调整方式示例在实际医用凝胶类产品检测前处理过程中，通常单一的前处理方式无法满足产品检测的需求，因此需要将本文件中所呈现的前处理方式进行调整组合。合方案流程图如图A.1所示。具体前处理组合过程为：a)将待测医用凝胶类产品5g~10g,加入等质量的纯化水后，与所选择的等质量有机溶剂混合，利用萃取装置萃取3次，静置5min;c)取萃取后的水相，加入等质量的10%三氯乙酸或6%高氯酸处理，收集沉淀物；d)将强酸沉淀后收集的沉淀物用适量PBS缓冲液复溶，选择合适孔径的超滤膜超滤，收集截留本组合方案的分离装置图如图A.2所示。图A.2有机溶剂萃取、强酸沉淀、超滤组合分离装置图本附录以硅酮体系卡波姆凝胶(含胶原蛋白)前处理为例，结合图A.2分离装置流程图，详细介绍硅酮体系卡波姆凝胶(含胶原蛋白)的前处理过程，具体前处理过程如下：a)将硅酮体系卡波姆凝胶加入萃取装置，并加入医用凝胶类产品等质量的甲苯，以60r/min~100r/min的转速搅拌5min,排气后静置5min;b)静置后将下层液体(水相)通过管道传送至酸沉装置，分离出萃取装置的上层液体(甲苯溶液),利用旋转蒸发仪除去甲苯溶液中的甲苯，收集旋转蒸发后得到的样品用于后续检测；c)在酸沉装置中加入10%三氯乙酸溶液，静置，待有