CN119424661A 一种牛蛙提取生物胶原蛋白组合物及其制备方法 （广东省农业科学院农业生物基因研究中心）

一种牛蛙提取生物胶原蛋白组合物及其制本发明公开了胶原蛋白技术领域的一种牛三酶联产法将牛蛙皮和牛蛙软骨中的胶原蛋白240_50℃,进行酶解处理4_5h后，升高温度至90_95℃,进行灭酶处理10min后，置于6000_2.根据权利要求1所述的一种牛蛙提取生物胶原蛋白组合物，其特征在于：在步骤S23.一种根据权利要求1或2所述的牛蛙提取生物胶原T21、将牛蛙源胶原蛋白肽溶解于DMF中并转移至盛有MBHA树脂中，加入T22、将步骤T1所制备的活化MBHA树脂置于烧杯中，将牛蛙源弹性3疏水化MBHA树脂_牛蛙源胶原蛋白肽；T4、取步骤T31所制备的疏水化MBHA树脂_牛蛙源胶原蛋白肽和步骤T32所制备的疏水化MBHA树脂_牛蛙源弹性蛋白肽切割试剂中，在室温避光条件下，按照200_250rpm进行搅T6、将步骤T51所制备的聚谷氨酸_疏水化牛蛙源弹性蛋白肽和步骤T52所制备的聚赖的活化前的MBHA树脂之间的质量比为1_二异丙基乙胺之间的质量体积比为12.5_18.5g/mL；所述牛蛙源弹性蛋白肽与步骤T1所述4述切割试剂的用量按照步骤T21和步骤T22所述MBHA树脂的总用量进行计算，所述步骤T21和步骤T22所述MBHA树脂总量与步骤T4所述切割试剂的质量体积比为0.05_0.08述聚赖氨酸_疏水化牛蛙源胶原蛋白肽在DMSO中的质量浓度为40_50m5牛蛙成为一种极具开发潜力的胶原蛋白提取来源。在提取技术方面，现有的胶原蛋白提取6[0010]优选地，在步骤S2中，所述预处理牛蛙粉末在PBS缓冲液中的质量浓度为0.1_[0013]优选地，在步骤S3中，所述酶解粗蛋白①在PBS缓冲溶液中的质量浓度为0.08_[0017]优选地，在步骤S4中，所述酶解粗蛋白②溶解于PBS缓冲溶液中的质量浓度为MBHA树脂与哌啶溶液之间的质量体积比为0.5_1g[0025]优选地，在步骤T21中，所述牛蛙源胶原蛋白肽、HATU和HOBt之间的质量比为1:7[0030]优选地，在步骤T22中，所述牛180rpm速度搅拌混合3_5min后，加入至步骤T21所制备的MBHA树脂_牛蛙源胶原蛋白肽中，肽；[0039]T4、取步骤T31所制备的疏水化MBHA树脂_牛蛙源胶原蛋白肽和步骤T32所制备的8[0048]T6、将步骤T51所制备的聚谷氨酸_疏水化牛蛙源弹性蛋白肽和步骤T52所制备的性胶原蛋白组合物，并通过高交联特性的胶原蛋白和低交联特性的弹性蛋白肽进行配合，9[0054]图2为本发明实施例4_6和对比例1_3所述胶原蛋白组合物对姜黄素的包埋率结果[0055]图3为本发明实施例4_6和对比例1_3所制备的胶原蛋白组合物在肠胃环境中的释[0056]图4为本发明实施例4_6和对比例1_3所制备的胶原蛋白组合物的包埋和缓释性能[0064]本发明所述聚谷氨酸为聚_L_谷氨酸钠盐，购自于上海阿拉丁生化科技股份有限肽酶A，升高温度至37℃,进行酶解处理，酶解4h后，升高温度值95℃灭酶处理10min后，用；肽酶A，升高温度至40℃,进行酶解处理，酶解5h后，升高温度值90℃灭酶处理10min后，加入0.6g弹性蛋白酶，调节酶解温度至37℃,酶解处理1h后，升高温度至90℃进行灭酶，肽酶A，升高温度至35℃,进行酶解处理，酶解5h后，升高温度值95℃灭酶处理10min后，用；加入0.8g弹性蛋白酶，调节酶解温度至35℃,酶解处理2h后，升高温度至95℃进行灭酶，[0086]本实施例提供一种牛蛙提取生物胶原蛋白组合物的制备方法，具体包括以下步异丙基乙胺76μL加入反应体系中，按照180rpm速度混合5min后，转移至合成管中，加入[0095]T6、将步骤T51所制备的聚谷氨酸一疏[0098]本实施例提供一种牛蛙提取生物胶原蛋白组合物的制备方法，具体包括以下步异丙基乙胺120μL加入反应体系中，按照180rpm速度混合5min后，转移至合成管中，加入[0110]本实施例提供一种牛蛙提取生物胶原蛋白组合物的制备方法，具体包括以下步异丙基乙胺95μL加入反应体系中，按照150rpm速度混合8min后，转移至合成管中，加入异丙基乙胺78μL加入反应体系中，按照180rpm速度混合5min后，转移至合成管中，加入[0119]T6、将步骤T51所制备的聚谷氨酸一疏[0127]本实验例针对实施例1_3所制备的牛蛙源胶原蛋白肽和牛蛙源弹性蛋白肽的氨基定》对实施例1_3所述牛蛙源胶原蛋白肽和牛蛙源弹性蛋白肽中的水解氨基酸组成和含量液；分别称取本实施例1_3所制备的牛蛙源胶原蛋白肽和牛蛙源弹性蛋白肽20mg溶解于[0128]下表为本发明实施例1_3所制备的牛蛙源胶原蛋白肽和牛蛙源弹性蛋白肽中氨基[0131]本实验例采用5%浓缩胶、12%分离胶对胶原蛋白肽和弹性蛋白肽进行SDS_PAGE测为实施例1所制备的牛蛙源弹性蛋白肽的条带，条带e为实施例2所制备的牛蛙源弹性蛋白原蛋白肽的分子量在1000_2500Da之间，所述牛蛙源弹性蛋白肽的分子量在800_2000Da之[0133]本发明针对实施例4_6和对比例1_3所制备的胶原蛋白组合物对药物的包载和缓为6.8的模拟肠液，取实施例4_6和对比例1_3所制备的胶原蛋白组合物1g置于20mL模[0138]其中，Ct为时间t时采样的姜黄素浓度（以mg/mL表示V为释放介质的总体积[0139]图2为本发明实施例4_6和对比例1_3所述胶原蛋白组合物对姜黄素的包埋率结果本发明实施例4_6中采用胶原蛋白肽和弹性蛋白肽进行复合，通过小分子多肽侧链上的不同基团对姜黄素形成稳定的包覆作用。[0140]图3为本发明实施例4_6和对比例1_3所制备的胶原蛋白组合物在肠胃环境中的释[0142]本发明针对实施例4_6和对比例1_3所制备的胶原蛋白组合物对药物的包载和缓为6.8的模拟肠液，取实施例4_6和对比例1_3所制备的胶原蛋白组合物1g分别置于20mL模