CN119432968A 一种c4差向异构酶全细胞的选育方法以及d-塔格糖的制备方法 （东台市浩瑞生物科技有限公司）

一种C4差向异构酶全细胞的选育方法以及本发明公开一种C4差向异构酶全细胞的选得到的C4差向异构酶全细胞生长健壮、性能优2将果糖C4差向异构酶重组大肠杆菌用灭菌水按照10_1_10_9的比例进行梯度稀释，得到从LB培养基中挑选颜色均匀单一、菌落凸起、菌落直径为1_2mm的菌落接种于含30_向LB培养基菌液中加入L_阿拉伯糖至L_阿拉伯糖终浓度为1_2g/L，以转速为200_3.一种D_塔格糖的制备方法，包括使用权利要求1_2任一所述C4差向异构酶全细胞的向600_800g/L的果糖溶液中添加所述C4差向异构酶全细胞，使体系菌种浓度达到10_将所述转化液经陶瓷膜过滤得到清液，所述陶瓷膜的孔径为20_10所述清液先通过阳离子交换树脂，流出液再通过阴离子交换树脂脱盐38.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述真空浓缩在温度50_70℃、真空≤_4格糖在2001年被美国食品药品监督管理局(USFDA)正式批准为普遍公认安全食品(GRAS)，[0004]中国专利文献CN201610937656.55[0009]将果糖C4差向异构酶重组大肠杆菌用灭菌水按照10_1_10_9的比例进行梯度稀释，[0010]将所述多组稀释液按照1_2％的接种量分别接种至选择培养基中培养18_24h；其[0012]从LB培养基中挑选颜色均匀单一、菌落凸起、菌落直径为1_2mm的菌落接种于含[0021]本发明提供的C4差向异构酶全细胞的选育方法通过在选择培养基内加入D_果糖能够继续生长的菌株；采用本发明中选育方法得到的C4差向异构酶全细胞对果糖进行处6[0026]将果糖C4差向异构酶重组大肠杆菌用灭菌水按照10_1_10_9的比例进行梯度稀释，[0027]将所述多组稀释液按照1_2％的接种量分别接种至选择培养基中培养18_24h；其[0029]从LB培养基中挑选颜色均匀单一、菌落凸起、菌落直径为1_2mm的菌落接种于含[0031]本发明首先将果糖C4差向异构酶重组大肠杆菌用灭菌水按照10_1_10_9的比例进的梯度比例稀释得[0032]在得到多组稀释液后，本发明将所述多组稀释液按照1_2％的接种量分别接种至7落直径为1_2mm的菌落接种于含30_50ug/mL硫酸链霉素的LB培养基中，在转速为200_8移动床控制参数优选为：运行温度50_70℃,进料流量30_35ml/min，洗脱剂流量45_55ml/待洗涤物体积的0.5_2BV；所述真空干燥箱的参数设置为：温度40_50℃,真空度≤_[0053]S2.将上述9组稀释液按照1.5％的接种量分别接种至9组选择培养基中培养21h；[0059]S2.将上述9组稀释液按照1％的接种量分别9[0062]S5.向15LLB培养基菌液中加入L_阿拉伯糖10L稀释液；[0065]S2.将上述9组稀释液按照2％的接种量分别[0068]S5.向15LLB培养基菌液中加入L_阿拉伯糖[0069]实施例4_6示出了关于利用C4差向异构酶全细胞制备D_塔格糖的方法的三组实施[0071]S1.向60L浓度为700g/L的果糖溶液中添[0073]S3.将上述清液先通过D67阳离子交换树脂(过柱流速为2BV/h)，流出液再通过[0074]S4.将上述脱盐液经装有钙型阳离子抽滤、浓度为92％(v/v)乙醇溶液洗涤和真空干燥箱(45℃,真空度_0.09MPa)干燥后得到[0079]S1.向60L浓度为600g/L的果糖溶液中添[0080]S2.将上述转化液经陶瓷膜(孔径为100nm，进膜压力为0.3MPa，出膜压力为[0081]S3.将上述清液先通过D67阳离子交换树脂(过柱流速为1BV/h)，流出液再通过[0082]S4.将上述脱盐液经装有钙型阳离子滤、浓度为90％(v/v)乙醇溶液洗涤和真空干燥箱(50℃,真空度一0.095MPa)干燥后得到[0087]S1.向60L浓度为800g/L的果糖溶液中添[0089]S3.将上述清液先通过D67阳离子交换树脂(过柱流速为4BV/h)，流出液再通过[0090]S4.将上述脱盐液经装有钙型阳离子滤、浓度为95％(v/v)乙醇溶液洗涤和真空干燥箱(40℃,真空度一0.10MPa)干燥后得到[0101]与实施例1对比，本对比例将步骤S2中选择培养基中的“D_果糖4g/L、阿拉伯糖[0102]下表1中示出了实施例4_6和对比例1_4中得到的D_塔格糖产品的纯度、收率及晶99.587