粮油中黄曲霉毒素B1的快速测定 便携式液相色谱法（征求意见稿）

附件1

团体标准

T/CAQIXX—20XX

粮油中黄曲霉毒素B1的快速检测

便携式液相色谱法

（征求意见稿）

2021-××-××发布2021-××-××实施

中国质量检验协会发布

粮油中黄曲霉毒素B1的快速测定

便携式液相色谱法

1范围

本标准规定了采用便携式液相色谱法测定粮油中黄曲霉毒素B1（AFTB1）的原理、试

剂和材料、仪器和设备、分析步骤、测定、结果计算和精密度等内容。

本标准适用于食品（农产品）检测实验室、快检实验室和移动实验室等场所，进行谷物

及其制品、豆类及其制品、坚果及籽类、油脂及其制品中AFTB1的快速测定，检出阳性的

样品采用GB5009.22的方法测定进行确认。

本标准AFTB1的检出限为0.03μg/kg，AFTB1的定量限为0.1μg/kg。

2规范性引用文件

下列文件对于本标准的应用是必不可少的，凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适

用于本标准，凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用本标准。

GB5009.22食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定

GB/T5491粮食、油料检验扦样、分样法

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3原理

用乙腈-水溶液提取试样中的黄曲霉毒素B1，免疫磁珠法或固相净化柱法净化，液相色

谱分离，柱后衍生荧光检测，外标法定量。

4试剂和材料

除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

4.1试剂

4.1.1乙腈(CH3CN):色谱纯。

4.1.2甲醇(CH3OH)：色谱纯。

4.1.3氯化钠(NaCl)。

4.1.4磷酸氢二钠(Na2HPO4)。

4.1.5磷酸二氢钾(KH2PO4)。

4.1.6氯化钾(KCl)。

4.1.7盐酸(HCl)。

4.2试剂配制

4.2.1乙腈水溶液（70+30，体积比）：量取70mL乙腈（4.1.1），用水稀释至100mL。

4.2.2磷酸盐缓冲溶液（PBS溶液）：称取8.00g氯化钠（4.1.3）、1.20g磷酸氢二钠（4.1.4）、

0.20g磷酸二氢钾（4.1.5）、0.20g氯化钾（4.1.6），用900mL水溶解，用盐酸（4.1.7）调

节pH至7.4，用水定容至1000mL。

4.3标准品

3

黄曲霉毒素B1标准品（C17H12O6，CAS：1162-65-8）：纯度≥98%，或经国家认证并授

予标准物质证书的标准物质。

4.4标准溶液配制

4.4.1标准储备溶液(10.0μg/mL):准确称取AFTB1（4.3）1mg(精确至0.01mg)，置于100mL

容量瓶，用乙腈（4.1.1）溶解并稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度为10μg/mL的标准储备

液。溶液转移至试剂瓶中后,在-20℃下避光保存,备用。临用前进行浓度校准(校准方法参见

GB5009.22附录A)。

4.4.2标准工作液(100ng/mL)：准确移取AFTB1标准储备溶液(4.4.1)1.00mL至100mL容量

瓶中,乙腈（4.1.1）定容。此溶液密封后避光-20℃下保存，有效期三个月。

4.4.3标准工作溶液(1ng/mL)：准确移取浓度为100ng/mLAFTB1标准溶液0.50mL于50mL

容量瓶中，用流动相定容至刻度。

4.5材料

4.5.1黄曲霉毒素免疫磁珠前处理试剂盒：回收率≥85%。

注：对于不同批次的试剂盒在使用前需进行质量验证。

4.5.2黄曲霉毒素快速净化柱：5mL，含有极性、非极性及离子交换等多种类型基团的吸附

剂，适用于粮食、食用油样品基质净化的固相净化柱（多功能净化柱）。

4.5.3玻璃纤维滤纸。

5仪器和设备

5.1便携式液相色谱仪：便携式液相色谱仪（配备柱后衍生和荧光检测器），或黄曲霉毒素

检测仪（配备液相色谱系统和黄曲霉毒素检测器），或液相色谱仪（配备柱后衍生和荧光检

测器，在符合分析仪器实验室环境条件下使用）。

5.2分析天平：感量分别为0.01mg和0.01g。

5.3涡旋混合器。

5.4粉碎机。

6分析步骤

警示：整个分析操作过程应在指定区域内进行。该区域应具备相对独立的操作台和废弃

物存放装置。在实验过程中,操作者在配制AFTB1标准溶液时应按照接触剧毒物的要求采取

相应的保护措施。

6.1试样制备

参考GB/T5491，对于固体样品经粉碎机粉碎。

6.2试样前处理

6.2.1提取

准确称取2.5g（精确到0.01g）样品于50mL离心管中，加入10mL提取液（4.2.1），

涡旋提取3min，静止或过滤，上清液（或滤液）用免疫磁珠法或固相净化柱法净化。

6.2.2净化

4

6.2.2.1固相净化柱法

移取4mL上清液（或滤液），过黄曲霉毒素固相净化柱（4.5.2）净化，取1mL净化后

液体，经0.45μm滤膜过滤后，置于液相色谱进样瓶中自动进样或注射器吸取手动进样测定。

6.2.2.1免疫磁珠法

移取1mL提取液于20mL离心管中，加入8mLPBS（4.2.2），加入10mg黄曲霉毒素免

疫磁珠，涡旋振荡反应3min，磁吸分离，磁珠转移至10mL离心管中，加入1mL甲醇（4.1.2）

涡旋振荡洗脱1min，磁吸分离，收集洗脱的净化液，经0.45μm滤膜过滤后，置于液相色谱

进样瓶中自动进样或注射器吸取手动进样测定。

注1：使用不同厂商的免疫磁珠时在操作方面可能有所不同，应按照其使用说明要求进

行操作。

注2：全自动免疫磁珠净化仪可优化操作参数后使用。

注3：免疫磁珠净化效果优于固相净化柱，对于基质比较复杂的样品（例如花椒油、辣

椒油等）和固相净化柱净化检测阳性的样品，可以取固相净化柱净化液，用免疫磁珠法净化

后测定。

6.3仪器测定

6.3.1液相色谱参考条件

a)色谱柱：C18柱，4.6mm×100mm，粒径5.0µm，或性能相当者。

b)流动相：A为水，B为乙腈（4.1.1），梯度洗脱。

c)流速：1.0mL/min。

d)柱温：40℃。

e)进样量：50μL。

f)荧光检测波长：激发波长360nm；发射波长440nm。

流动相梯度洗脱程序

时间（min）流动相A（%）:水流动相B（%）:乙腈

07030

26040

4.53070

6.57030

87030

6.3.2标准溶液测定

将浓度为1ng/mL标准溶液（4.4.3）进样测定。

6.3.3试样溶液的测定

将待测试样净化液（6.2.2）溶液进样测定。

6.3.4定性和阳性样品确认

试样液相色谱图与标准物质色谱图比较，根据保留时间（见附录A）进行定性判定是否

检出AFTB1。

5

7.结果计算

按以下公式计算测定结果。

计算公式：

cV1000

X…………………（1）

m1000

式中：

X—试样中AFTB1的含量，单位为微克每千克（g/kg）；

c—进样溶液中AFTB1的浓度，按照标准溶液浓度乘于进样溶液与标准溶液峰面积比

计算，或仪器软件自动计算，单位为纳克每毫升（ng/mL）；

V—试样提取液体积，单位为毫升(mL)；

m—试样的称样量，单位为克（g）。

计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算数平均值表示，保留至小数点后

两位。

8精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。

9性能指标

9.1特异性

特异性≥95%。

9.2假阴性率

假阴性率应≤0.1%。用基质空白加标进行方法检出限和回收率的验证：AFTB1的检出

限小于0.03μg/kg，回收率大于70%，以保证按照本标准方法测定结果不出现假阴性。

9.3假阳性率

假阳性率≤5%。

9.4确证检测

为保证检测结果的准确性，当检测结果为阳性时，应采用GB5009.22第一法进行测定

确证。

9.5其他

本方法参比标准为GB5009.22第二法和第三法。

6

附录A

（资料性附录）

黄曲霉毒素B1液相色谱图

A.1黄曲霉毒素B1柱后光化学衍生法检测色谱图见图A.1

图A.1黄曲霉毒素B1柱后光化学衍生法检测色谱图（1ng/mL标准溶液）

7

前言

本标准按GB/T1.1-2020给出的规则起草。

本标准由吉林省产品质量监督检验院提出，由中国质量检验协会归口。

本标准起草单位：吉林省产品质量监督检验院、安徽科博产品检测研究院有限公司、成

都英柏检测技术有限公司、中国检验检疫科学研究院、北京康源泰博生物科技有限公司、广

州京诚检测技术有限公司、博颐医疗器械（上海）有限公司、北京纳鸥科技有限公司

本标准起草人：

本标准为首次发布。

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粮油中黄曲霉毒素B1的快速测定

便携式液相色谱法

1范围

本标准规定了采用便携式液相色谱法测定粮油中黄曲霉毒素B1（AFTB1）的原理、试

剂和材料、仪器和设备、分析步骤、测定、结果计算和精密度等内容。

本标准适用于食品（农产品）检测实验室、快检实验室和移动实验室等场所，进行谷物

及其制品、豆类及其制品、坚果及籽类、油脂及其制品中AFTB1的快速测定，检出阳性的

样品采用GB5009.22的方法测定进行确认。

本标准AFTB1的检出限为0.03μg/kg，AFTB1的定量限为0.1μg/kg。

2规范性引用文件

下列文件对于本标准的应用是必不可少的，凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适

用于本标准，凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用本标准。

GB5009.22食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定

GB/T5491粮食、油料检验扦样、分样法

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3原理

用乙腈-水溶液提取试样中的黄曲霉毒素B1，免疫磁珠法或固相净化柱法净化，液相色

谱分离，柱后衍生荧光检测，外标法定量。

4试剂和材料

除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

4.1试剂

4.1.1乙腈(CH3CN):色谱纯。

4.1.2甲醇(CH3OH)：色谱纯。

4.1.3氯化钠(NaCl)。

4.1.4磷酸氢二钠(Na2HPO4)。

4.1.5磷酸二氢钾(KH2PO4)。

4.1.6氯化钾(KCl)。

4.1.7盐酸(HCl)。

4.2试剂配制

4.2.1乙腈水溶液（70+30，体积比）：量取70mL乙腈（4.1.1），用水稀释至100mL。

4.2.2磷酸盐缓冲溶液（PBS溶液）：称取8.00g氯化钠（4.1.3）、1.20g磷酸氢二钠（4.1.4）、

0.20g磷酸二氢钾（4.1.5）、0.20g氯化钾（4.1.6），用900mL水溶解，用盐酸（4.1.7）调

节pH至7.4，用水定容至1000mL。

4.3标准品

3

黄曲霉毒素B1标准品（C17H12O6，CAS：1162-65-8）：纯度≥98%，或经国家认证并授

予标准物质证书的标准物质。

4.4标准溶液配制

4.4.1标准储备溶液(10.0μg/mL):准确称取AFTB1（4.3）1mg(精确至0.01mg)，置于100mL

容量瓶，用乙腈（4.1.1）溶解并稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度为10μg/mL的标准储备

液。溶液转移至试剂瓶中后,在-20℃下避光保存,备用。临用前进行浓度校准(校准方法参见

GB5009.22附录A)。

4.4.2标准工作液(100ng/mL)：准确移取AFTB1标