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文档简介
2016-01-20实施2016-01-20实施I 1 13术语和定义 1 1 16苦参种子ITS2序列特征 3 3 39种子DNA提取方法 3 4 4 5 6苦参种子ITS2序列鉴定方法ITS2序列5.1琼脂糖5.4聚乙烯吡咯烷酮(PVP)5.510g/L溴化乙锭(EB)溶液2注：EB有致癌作用，配制和使用时应戴一次性手套操作并妥善处理废液。称取121.1g三羟甲基氨基甲烷(Tris)溶解于800mL水中，用盐酸(HC1)调pH至8.0,用水定 (121℃)条件下灭菌20min。量取1mol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸溶液(5.7)100mL,5mol/L氯化钠溶液(5.9)280mL,500 (121℃)条件下灭菌20min。5.12酚-氯仿-异戊醇(25:24:1)溶液钠溶液(5.8),用冰乙酸调pH至8.0,然后加水定容到1000mL。使用时用水稀释成1×TAE。3b.取上清液转入另一个1.5ml的离心管，加入等体积的酚-氯仿-异戊醇(25:24:1),缓慢翻转混4终浓度单样品体积10×PCR缓冲液10μmol/L上游引物10μmol/L上游引物5U/μLTaq酶(热启动)注：10×PCR缓冲液含氯化镁，以上反应试剂按顺序添加。11.1序列方向11.2序
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