植物生理学实验指导建议专家讲座

一、植物生理学试验基本要求

植物生理是实践性很强学科，学生必需经过试验、实习才能加深对理论课了解，并为后续专业课学习打好基础，同时，经过试验、实践能够提升学员观察问题和处理问题能力，提升学员动手能力及独立思索、分析问题能力。在试验课中要抽出部分课时作为理论讲授，经过实例叙述论证，让学生认识到试验主要性，培养学生对试验课兴趣；系统介绍植物生理普通研究方法和基本技术；重视培养学生第1页一、植物生理学试验基本要求实际操作技能，不片面追求试验数据准确性，培养学生实事求是科学态度。对一些不能开设试验，经过演示试验和看录像方式，拓宽学生视野，完善试验内容。

学生都应参加试验实习步骤，选作部分试验，了解植物生理主要测试技术，在教师指导下，独立操作，完成试验内容并用所学知识，综合分析，写出试验汇报，解释相关现象并讨论试验结果。试验课程单独考评，单独记成绩。第2页二、植物生理学试验目录试验一植物组织渗透势测定-----------------------------３课时试验二植物组织水势测定-----------------------------３课时试验三植物组织中可溶性糖含量测定-------------３课时试验四植物根系活力测定-----------------------------6课时试验五植物组织灰分元素分析判定-----------------3课时试验六叶绿体色素提取、分离和理化性质---------3课时试验七叶绿素含量测定---------------------------------3课时试验八改良半叶法测定植物光合速率------------------３课时第3页二、植物生理学试验目录试验九小筐子法(广口瓶法)测定植物呼吸速率---------3课时附:微量定容测压法测定种子呼吸速率(示范)试验十过氧化物酶活性测定-----------------------------3课时试验十一吲哚乙酸氧化酶活性测定--------------------3课时试验十二植物种子生活力快速测定--------------------3课时试验十三谷类种子萌发时淀粉酶活性测定-----------3课时试验十四种子萌发过程中淀粉、脂肪、蛋白质转化3课时试验十五植物激素对愈伤组织形成和分化影响---6课时试验十六植物抗逆性判定（电导仪法）---------------3课时

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试验一植物组织渗透势测定（质壁分离法）(3课时)

[目标要求]１、观察植物组织在不一样浓度下细胞质壁分离产生过程；２、掌握质壁分离法测定植物组织渗透势原理及关键点；３、了解测定组织渗透势方法及实际应用意义。[试验方法]

质壁分离法[试验仪器]

显微镜、载玻片及盖玻片、镊子、刀片、移液器等。

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试验一植物组织渗透势测定（质壁分离法）(3课时)

[试验操作方法]1、配制各种浓度蔗糖溶液2、剥取洋葱鳞茎表皮或紫鸭趾草叶片3、快速投入各种浓度蔗糖溶液中4、低倍显微镜观察并统计质壁分离相对程度5、确定使细胞发生初始质壁分离浓度6、计算渗透势[试验关键点]1、撕下表皮组织必须完全浸没于溶液中2、选取有色素洋葱鳞茎外表皮试验效果很好第6页

试验二植物组织水势测定(3课时)

（小液流法、压力室法）[目标要求]１、掌握压力室法、小液流法测定植物水势原理及关键点；２、了解植物水势测定几个方法，并比较其优缺点；３、了解水势测定实际应用意义。[试验方法]小液流法、压力室法[试验仪器]水分情况测定仪、打孔器、小青霉素瓶、弯头滴管、试管、刻度移液管等。[试验操作方法]小液流法：1、配制一系列不一样浓度递增蔗糖溶液2、用打孔器打取待测鲜叶小圆片3、小圆片与糖液进行水分交换4、利用小液流升降判断水势高低5、计算叶片组织水势第7页压力室法：1、仪器准备

2、取样和装样3、加压测定4、计算叶片组织水势[试验关键点]小液流法：1、所取材料部位组织大小要一致,不要取有伤口叶片;2、所用玻璃器皿要洁净、干燥；3、打孔器要尖锐；4、蔗糖液要振荡均匀；5、所加甲烯蓝量不能过多，７个瓶加量要尽可能一致。压力室法：

1、装样时螺旋套不要拧得太紧，以免压伤植物组织；2、加压速度不能太快，靠近叶片水势时加压速度要放慢，不然会影响测量精度。3、注意安全，加压时不要使脸部处于钢筒顶盖正上方。4、

高压钢瓶有危险人，搬运或使用时要注意。第8页试验三植物组织中可溶性糖含量测定

（3课时）[目标要求]１、掌握用蒽酮比色法测定植物组织中可溶性糖含量原理及关键点；２、熟悉分光光度计使用；３、了解可溶性含量测定实际应用意义。[试验方法]蒽酮比色法[试验仪器]紫外-可见光分光光度计低温冷冻离心机秒表电子天平研钵磁力搅拌器等。

第9页试验三植物组织中可溶性糖含量测定

（3课时）[试验操作方法]1、定量称取新鲜植物叶片，提取其中可溶性糖2、显色及比色3、绘制标准曲线4、计算样品中含糖量%[试验关键点]1、在测定新鲜样品时，用于提取可溶性总糖乙醇浓度能够依据材料含水量换算后适当提升。2、在可溶性糖含量测定中，加入蒽酮-H2SO4试剂必须沿着管壁迟缓进行，以免样品中可溶性糖提前反应显色，影响试验结果。第10页

试验四植物根系活力测定（6课时）

[目标要求]１、掌握根系活力测定原理及方法；２、了解植物根系活力内涵；３、了解根系活力测定实际应用意义。[试验方法]甲烯蓝吸附法和TTC法[试验仪器]分光光度计、移液管、烧杯、比色管、容量瓶、恒温箱、石英砂、研钵、量筒、三角烧瓶、刻度试管等第11页试验四植物根系活力测定(6课时)

[试验操作方法]甲烯蓝吸附法：1、甲烯蓝标准曲线制作2、植物根系体积测定3、求出每杯中为根系所吸收甲烯蓝毫克数4、求出根吸收面积5、将试验结果填入统计表。TTC法：1、定性观察①反应液配制；②观察待测根系着色情况2、定量测定①TTC还原量测定；②计算；③标准曲线制作[试验关键点]1、甲烯蓝吸附法注意每次取出根系时都要甲烯蓝溶液从根上流回到原杯中。2、根系应吸干水分但不能用力挤压伤及细胞。第12页

试验五植物组织常量灰分元素分析判定

(3课时)

[目标要求]１、掌握植物组织常量灰分元素分析原理及方法；２、学会灰分制备和显微结晶试法操作；３、了解植物组织常量灰分元素分析判定意义。[试验方法]显微镜下作定性判定[试验仪器]高温电炉、干燥器、显微镜、电子天平、白瓷比色板、载玻片、盖玻片等第13页

试验五植物组织常量灰分元素分析判定

(3课时)

[试验操作方法]1、植物材料灰化2、灰分溶液制备3、灰分元素判定[试验关键点]试验中使用试剂含有强烈腐蚀性，不能碰到镜头上。假如沾到镜头上，应及时汇报老师做妥善处理。第14页试验六叶绿体色素提取、分离和理化性质(３课时)[目标要求]１、掌握提取、分离叶绿体色素方法、原理；２、了解叶绿体色素种类及其理化性质；[试验方法]有机溶剂提取叶绿体色素、利用纸层析分离四种色素并进行理化性质测定。[试验仪器]电子天平、快速混匀器、玻璃研钵、容量瓶、大号层析管、试管、电炉、刻度移液管等。[试验操作方法]1、用95%乙醇提取叶绿体色素；第15页

2、利用纸层析分离四种色素；

3、光对叶绿素破坏作用；

4、荧光现象观察；

5、皀化作用(绿色素和黄色素分离)；

6、H+和Cu2+对叶绿素分子中Mg2+取代作用。

[试验关键点]

1、提取叶绿体色素时要加入少许CaCO3；

2、为了防止叶绿素光分解，操作应在弱光下进行；

3、研磨时间尽可能短些，以不超出两分钟为宜。并将叶片中色素浸提洁净；

4、皀化作用过程，若溶液不分层，能够沿管壁滴加蒸馏水促进分层。

第16页试验七叶绿素含量测定(3课时)[目标要求]1、掌握分光光度计法测定叶绿素含量原理及其关键点；2、了解叶绿素含量测定在农业实践中应用。[试验方法]分光光度计法[试验仪器]电子天平、快速混匀器、分光光度计、玻璃研钵、容量瓶、漏斗等。第17页

[试验操作方法]

1、提取叶绿素

2、叶绿素含量测定

3、结果计算

[试验关键点]

1、提取干材料中色素要用80％丙酮。

2、为了防止叶绿素光分解，操作应在弱光下进行；研磨时间尽可能短些，以不超出两分钟为宜。

3、过滤时必须将滤纸及叶片残渣洗至无绿色为止。

4、比色时提取液不能混浊。

第18页试验八改良半叶法测定植物叶片光合速率（３课时）[目标要求]

１、了解测定光合速率几个方法，并比较其优缺点；

２、掌握半叶法测定光合强度原理及其关键点；

３、了解光合强度测定在选育良种、合理施肥、抗性品种筛选等方面现实意义。[试验方法]

改良半叶法[试验仪器]

电子天平、刀片、烘干箱、锡铂纸、塑料牌、模片等。第19页试验八改良半叶法测定植物叶片光合速率[试验操作方法]１、晴天早晨８～９点钟；

2、选择有代表性功效叶作为测定叶片；３、处理韧皮部，不能损伤木质部，用锡铂纸包绕使叶片保持叶片原有着重角度；4、剪取样叶5、切割叶片、烘干、称重比较6、计算光合速率[试验关键点]１、选择晴天早晨８～９点钟；2、选择有代表性功效叶（无病虫害，对称性良好，叶龄、叶位、叶片大小、厚度、受光方向要尽可能一致。）３、用刀片割韧皮部，不能损伤木质部；要预防叶片下垂；４、前后两次采样叶片切割叶面积应在相对应部位。

第20页试验九小蓝子法测定植物呼吸速率(3课时)

附:微量定容测压法测定种子呼吸速率[目标要求]

1、了解呼吸强度测定几个方法及用途，并比较其优缺点；

２、掌握经典测定方法及当代高档仪器测定法原理及关键点；

３、学会依据材料选择不一样测试方法。[试验方法]广口瓶法、微量呼吸检压法[试验仪器]

恒温培养箱、微量呼吸检测仪、电子天平、压力计、反应瓶、广口瓶、

刻度移液管等。第21页[试验操作方法]

1、称样、加试剂

2、样品测定

3、空白及样品滴定

4、结果计算

附加：另取发芽水稻种子利用微量定容测压法测定呼吸速率作为示范试验并讲解试验原理、操作关键点及应用范围等。

[试验关键点]

1、为严防CO2进行瓶中,换橡皮塞时动作要快，滴定时要用纸张封住瓶口；

２、测定时间要轻轻摇摆广口瓶，打破溶液表面BaCO3薄膜；

３、测定绿色植物材料要置于暗室操作。第22页

试验十过氧化物酶活性测定

（比色法）（3课时）

[目标要求]

1、掌握过氧化物酶活性测定原理及关键点；

2、学会测定不一样植物组织中过氧化物酶活性。[试验方法]

比色法[试验仪器]

紫外-可见光分光光度计、低温冷冻离心机、秒表、电子天平、研钵、磁力搅拌器第23页试验十过氧化物酶活性测定

（比色法）（3课时）[试验操作方法]1、粗酶液提取；2、酶活性测定；3、计算酶活性大小。[试验关键点]

依据酶活性大小可测定0-3min或0-5minOD值，取平均值计算。第24页试验十一吲哚乙酸氧化酶活性测定（3课时）[目标要求]

1、掌握吲哚乙酸氧化酶活力大小测定原理；

２、学会测定不一样组织中吲哚乙酸氧化酶活性。[试验方法]

比色法[试验仪器]

72型分光光度计、离心机、恒温水浴锅、电子天平、研钵、试管、移液管、烧杯等。第25页试验十一吲哚乙酸氧化酶活性测定（3课时）[试验操作方法]1、培养材料；2、提取粗酶液；3、保温反应；4、显色反应；5、比色测定吸光度；6、绘制标准曲线或计算回归直线方程；7、从标准曲线上查出对应吲哚乙酸残留量或从回归直线方程计算出反应液中吲哚乙酸残留量。

[试验关键点]

为了降低测量误差，可将反应液稀释后进行测定。第26页

试验十二植物种子生命力快速测定(３课时)

(TTC法、染料染色法)

[目标要求]1、了解种子生活力测定实践意义；2、掌握TTC法和红墨水法测定种子生活力原理及操作关键点；3、比较TTC法和红墨水法测定结果。[试验方法]TTC法、红墨水法。[试验仪器]恒温培养箱、刀片、培养皿、烧杯、镊子等。第27页

试验十二植物种子生命力快速测定(３课时)

(TTC法、染料染色法)

[试验操作方法]1、将种子用温水浸泡2-6小时，使种子充分吸胀；2、取种子20粒，用刀片沿种胚纵切为两半；3、将两半种子分别浸于0.1%TTC和5%红墨水试剂中，进行保温处理；4、染色结果观察、判定胚部颜色改变并计算生活力。[试验关键点]1、种子要先软化；2、种子要沿种胚纵切为两半；3、显色时要使漂浮种子全部浸入试剂中；4、TTC见光易分解，需在暗条件下保温染色；5、结果观察主要是看胚部颜色改变。第28页

试验十三谷类种子萌发时淀粉酶活性测定（3课时）

[目标要求]1、了解谷类种子萌发时淀粉水解与淀粉酶形成关系；2、掌握谷物种子萌发时淀粉酶活性测定原理及操作关键点。[试验方法][试验仪器]电子天平、恒温水浴锅、研钵、白瓷板、漏斗、漏斗架、培养皿、滤纸等。第29页试验十三谷物种子萌发时淀粉酶活性测定（3课时）[试验操作方法]1、准备试验材料；2、制备淀粉酶溶液；3、保温糖化；4、显色、观察及测定，5、计算。[试验关键点]调整酶浓度使测定能在适当时间内完成。第30页

试验十四种子萌发过程中淀粉、脂肪、蛋白质转化（3课时）

[目标要求]

1、了解种子萌发过程中淀粉转化原理和操作方法；2、了解种子萌发过程中脂肪转化原理和操作方法；3、了解种子萌发过程中蛋白质转化原理和操作方法。[试验方法]淀粉转化用显微镜观察法；脂肪转化和蛋白质转化用化学方法。[试验仪器]

显微镜、载玻片、盖玻片、研钵、三角瓶、碱式滴定管、铁架、漏斗、纱布、量筒、水浴锅、烧环、酒精灯、石棉网、中试管、试管架、滤纸、滴管等。第31页试验十四种子萌发过程中淀粉、脂肪、蛋白质转化（3课时）[试验操作方法]1、比较发芽和未发芽小麦种子淀粉转化；①淀粉消化；②淀粉种子萌发时还原糖形成。2、比较发芽和未发芽大豆种子脂肪转化；①制作滤液；②用碱进行滴定。3、比较发芽和未发芽大豆种子蛋白质转化。①制作滤液；②按表在各试管加入不一样试剂，观察颜色有何不一样。[试验关键点]

比较发芽和未发芽种子萌发过程中淀粉、脂肪、蛋白质转化有何不一样。第32页

试验十五植物激素对愈伤组织形成和分化影响（6课时）

[目标要求]1、了解组织培养种类，即愈伤组织培养、悬浮细胞培养、器官培养（胚、花药、子房、根和茎培养等）、茎尖分生组织和原生质体培养过程；2、了解植物激素与愈伤组织形成及器官分化关系；3、经过本试验深入了解细胞全能性及其在生物技术中应用。[试