40%丁醚脲·噻虫啉悬浮剂团体标准编制说明

40%丁醚脲·噻虫啉悬浮剂团体标准编制说明浙江威尔达化工有限公司二0二0年八月%丁醚脲·噻虫啉悬浮剂高效液相色谱法分析方法研究浙江威尔达化工有限公司二0二0年八月40%丁醚脲·噻虫啉悬浮剂高效液相色谱法分析方法研究试验部分方法提要试样用甲醇溶解，以甲醇＋水为流动相，使用以C18为填料的不锈钢柱和紫外检测器，对试样中的丁醚脲、噻虫啉进行高效液相色谱分离，外标法定量。试剂和溶液甲醇：HPLC；水：二次蒸馏水或纯净水；丁醚脲标准品：已知丁醚脲ω≥98.0%；噻虫啉标准品：已知噻虫啉ω≥98.0%。仪器液相色谱仪：具可变波长紫外检测器；色谱数据处理机或色谱工作站；色谱柱：内径4.6mm，长250mm不锈钢柱，内装C18、5μm填充物；进样器：50μL；定量进样管：5μL。色谱操作条件流动相：ψ（甲醇＋水）＝85＋15，经滤膜过滤，并进行脱气；流速：1.0mL/min；柱温：室温±2℃；检测波长：240nm；进样体积：5μL；保留时间：噻虫啉约3min；丁醚脲约16min。上述操作参数是典型的，可根据不同仪器的特点，对操作参数作适当调整，以期获得最佳效果。典型的40%丁醚脲·噻虫啉高效液相色谱图见图1、图2。1——噻虫啉；2--丁醚脲；丁醚脲、噻虫啉标样高效液相色谱图1——噻虫啉；2--丁醚脲；40%丁醚脲·噻虫啉悬浮剂高效液相色谱图5.测定步骤5.1标样溶液的配制称取噻虫啉标准品0.03g（精确至0.0001g）、丁醚脲标准品0.12g（精确至0.0001g），置于50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，超声振荡5min，摇匀，备用。5.2试样溶液的配制称取试样0.36g（精确至0.0001g）的试样于50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，超声振荡5min，摇匀，备用。5.3测定在上述操作条件下，待仪器基本稳定后，连续注入数针标准溶液，待相邻两针噻虫啉（丁醚脲）峰面积相对响应值变化小于1.5%后，按下列顺序进样分析：标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液。5.4计算将测得的两针试样溶液以及试样前后两针标样溶液中丁醚脲（噻虫啉）的峰面积进行平均，试样中丁醚脲（噻虫啉）质量分数按公式（1）计算： (1)式中：ω1—试样中丁醚脲（噻虫啉）质量分数，以%表示；A1—标样溶液中丁醚脲（噻虫啉）峰面积的平均值；A2—试样溶液中丁醚脲（噻虫啉）峰面积的平均值；ω—标样中丁醚脲（噻虫啉）的质量分数，以%表示；m1—标样的质量，单位为克（g）；m2—试样的质量，单位为克（g）。实验结果与讨论线性关系试验在一定质量范围内，按照浓度递增的顺序配制数个丁醚脲（噻虫啉）标样样品，测定丁醚脲（噻虫啉）的峰面积，取两次测定的平均结果。以有效成分的质量浓度为横坐标，有效成分的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。结果见表1、表2、图3、图4。表1噻虫啉质量浓度与峰面积的线性关系浓度（mg/mL）0.880.760.630.500.380.13响应面积（mAU*s）2237620103166041289196193310线性方程y=26005x-65.163相关系数R=0.9990图3噻虫啉标准曲线图表2丁醚脲质量浓度与峰面积的线性关系浓度（mg/mL）3.492.992.491.991.500.50响应面积（mAU*s）58009493104138831932235928161线性方程y=16795x-879.12相关系数R=0.9994图4丁醚脲标准曲线图从表1、表2和图3、图4可以看出，在上述的操作条件下，当噻虫啉质量浓度在0.13mg/mL～0.88mg/mL之间，与相应的噻虫啉面积有良好的线性关系，计算回归方程为：y=26005x-65.163，相关系数R=0.9990，可以满足定量分析要求；当丁醚脲质量浓度在0.50mg/mL～3.49mg/mL之间，与相应的丁醚脲面积有良好的线性关系，计算回归方程为：y=16795x-879.12，相关系数R=0.9994，可以满足定量分析要求。精密度试验选取40%丁醚脲·噻虫啉悬浮剂试样，从称样开始，按上述操作条件进行5次平行测定，结果见表3。表3精密度试验样品编号12345噻虫啉标样净重（丁醚脲标样净重），mg31.5（124.6）31.5（124.6）31.5（124.6）31.5（124.6）31.5（124.6）噻虫啉标样峰面积（丁醚脲标样峰面积）19056(46682)19119(46713)19108（46666）19098（46768）19101(46089)40%噻虫啉（丁醚脲）样重，mg376.8410.7375.2388.4407.2噻虫啉样峰面积（丁醚脲样峰面积）18420(45112)20143(49034)18523（45029）19049（46652）19998(48289)噻虫啉质量分数，%（丁醚脲质量分数，%）8.08（31.96）8.08（31.85）8.14（32.04）8.09（32.00）8.10(32.06)噻虫啉（丁醚脲）质量分数平均值，%8.10（31.98）噻虫啉（丁醚脲）标准偏差，%0.03（0.08）噻虫啉（丁醚脲）变异系数（相对标准偏差），%0.37（0.25）Horwits公式计算值，%(2(1-0.5logC)×0.67)（NY/T2887-2016RSD要求），%≤2.0（1.6）从上表3可以看出，本方法对40%丁醚脲·噻虫啉悬浮剂中噻虫啉（丁醚脲）的含量测定变异系数低于NY/T2887-2016中3.2.1c公式要求，具有良好的精密度。准确度试验为验证本方法的可靠性，按照配方比例要求，分别称取5份适量空白制剂于50mL容量瓶中，然后按制剂标示值，分别加入已知质量分数的噻虫啉（丁醚脲）标样，制成准确度试验样品，然后按本标准测定其含量，所得到的测定值与理论值进行比较，得到回收率见表4。表4噻虫啉（丁醚脲）回收率试验样品编号12345空白制剂，mg221.5220.6219.2220.2219.9加入噻虫啉（丁醚脲）重量，mg31.0（122.0）33.6(133.2)34.6(128.4)32.0(125.8)34.4(121.1)噻虫啉（丁醚脲）质量分数，%98.5（98.7）加入噻虫啉（丁醚脲）理论值，mg30.5（120.4）33.1（131.5）34.1（126.7）31.5（124.2）33.9（119.5）噻虫啉标样净重（丁醚脲标样净重），mg31.5（124.6）31.5（124.6）31.5（124.6）31.5（124.6）31.5（124.6）噻虫啉标样峰面积（丁醚脲标样峰面积）A116615(41494)16581(41447)16664（41502）16629（41489）16598(41500)样品中噻虫啉峰面积（样品中丁醚脲峰面积）16190（40297）17552(43780)18204(42356)16658(41569)18047(40046)噻虫啉（丁醚脲）实测值，mg30.7（121.0）33.3(131.6)34.4(127.2)31.6(124.8)34.2(120.2)噻虫啉（丁醚脲）回收率，%100.7（100.5）100.6（100.1）100.9（100.4）100.3（100.5）100.9（100.6）噻虫啉（丁醚脲）回收率范围，%97-103（98-102）噻虫啉（丁醚脲）平均回收率，%100.7（100.4）从表中说明，噻虫啉最大回收率、最小回收率、平均回收率分别为100.9%、100.3%、100.7%在标准97%-103%之间，丁醚脲最大回收率、最小回收率、平均回收率分别为100.6%、100.1%、100.4%，在标准98%-102%之间，均具有良好的准确度。非分析物干扰称取空白制剂222.2mg，加适量甲醇超声溶解，冷却至室温后用甲醇定容备用作为非分析物干扰试验的空白溶液，另称取噻虫啉（丁醚脲）原药30.2（121.4）mg作为参照试验溶液。按3操作条件进行测定，待标样相邻两针峰面积相对变化率小于1.5%后，分别进样空白溶液及原药样品，结果显示，空白制剂与噻虫啉（丁醚脲）原药之间无相互干扰。特异性测定本试验采用HPLC-DAD峰纯度分析法来鉴别40%丁醚脲·噻虫啉悬浮剂中的丁醚脲、噻虫啉。试样中的丁醚脲、噻虫啉HPLC-DAD峰纯度均大于99.9%，如图5、图6。从色谱图可以清晰的看出，有效成分处无其它物质干扰，符合定量分析要求。图540%丁醚脲·噻虫啉悬浮剂中噻虫啉HPLC-DAD峰纯度色谱图图640%丁醚脲·噻虫啉悬浮剂中丁醚脲HPLC-DAD峰纯度色谱图样品不同实验室验证结果选取一个40%丁醚脲·噻虫啉悬浮剂，按相同方法由不同人员不同仪器在不同的实验室，对统一试样中的丁醚脲（噻虫啉）质量分数进行测定，结果见表5。表5不同实验室验证结果验证单位噻虫啉质量分数（%）丁醚脲质量分数(%)浙江威尔达化工有限公司7..932.0浙江威原天盛作物科技有限公司8.032.1操作条件的确立检测波长的确定噻虫啉（丁醚脲）的紫外光谱图如图7、图8所示，从图7、图8可以看出，噻虫啉和丁醚脲均在240nm波长处有较大吸收峰，故确定检测波长为240nm，在该检测波长处干扰较少，灵敏度均较高。图7噻虫啉紫外光谱图图8丁醚脲紫外光谱图结论本标准采用高效液相色谱法对40%丁醚脲·噻虫啉悬浮剂中的噻虫啉、丁醚脲进行分离和测定。在噻虫啉（丁醚脲）质量