40%氰霜唑·烯酰吗啉sc编制说明征求意见稿

40%氰霜唑·烯酰吗啉悬浮剂团体标准编制说明（征求意见稿）浙江威尔达化工有限公司二0二一年九月%氰霜唑·烯酰吗啉悬浮剂高效液相色谱法分析方法研究浙江威尔达化工有限公司二0二一年六月40%氰霜唑·烯酰吗啉悬浮剂高效液相色谱法分析方法研究试验部分方法提要试样用甲醇溶解，以甲醇+水为流动相，采用高效液相色谱仪，使用以C18为填料的不锈钢柱和紫外检测器，对试样中的氰霜唑、烯酰吗啉进行反相高效液相色谱和分离，外标法定量。试剂和溶液甲醇：色谱纯。水：新蒸二次蒸馏水或超纯水。氰霜唑标样：已知含量≥97.0%。烯酰吗啉标样：已知含量≥97.0%。仪器高效液相色谱仪：具有可变波长紫外检测器。色谱数据处理系统。色谱柱：250mm×4.6mm（i.d.）不锈钢柱，内装填充5μm，C18填充物（或具有同等效果的色谱柱）。过滤器：滤膜孔径约0.45μm。微量进样器：50μL。定量进样管：5μL。超声波清洗器。色谱操作条件流动相：ψ（甲醇:水）=75:25。流速：1.0mL/min。柱温：室温（温度变化应小于2℃）。检测波长：300nm。进样体积：5μL。保留时间：烯酰吗啉E体约6min，烯酰吗啉Z体约7min，氰霜唑约9min。上述操作参数是典型的，可根据不同仪器特点，对给定操作参数作适当调整，以期获得最佳效果。典型的40%氰霜唑·烯酰吗啉悬浮剂的高效液相色谱图见图1、图2。标引序号说明：1—烯酰吗啉E体，2—烯酰吗啉Z体，3—氰霜唑。图140%氰霜唑·烯酰吗啉悬浮剂标样的高效液相色谱图标引序号说明：1—烯酰吗啉E体，2—烯酰吗啉Z体，3—氰霜唑。图240%氰霜唑·烯酰吗啉悬浮剂的高效液相色谱图5.测定步骤5.1标样溶液的配制准确称取氰霜唑标样0.02g，烯酰吗啉标样0.06g(精确至0.00001g)于50mL容量瓶中，加入甲醇溶解，在超声波清洗器上振荡10min，使标样完全溶解，冷却至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀，备用。5.2试样溶液的配制准确称取约0.20g（精确至0.0001g）的试样于50mL容量瓶中，加入甲醇溶解，在超声波清洗器上振荡10min，使试样完全溶解，冷却至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀。使用前用过滤器过滤，取过滤液进样。5.3测定在上述操作条件下，待仪器基本稳定后，连续注入数针标准溶液，待相邻两针峰面积相对变化小于1.5%后，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。5.4计算将测得的两针试样溶液以及试样前后两针标样溶液中氰霜唑（或烯酰吗啉E+Z）的峰面积进行平均，试样中氰霜唑（或烯酰吗啉E+Z）质量分数按公式（1）计算： (1)式中：ω1—试样中氰霜唑（或烯酰吗啉E+Z）质量分数，以%表示；A1—标样溶液中氰霜唑（或烯酰吗啉E+Z）峰面积的平均值；A2—试样溶液中氰霜唑（或烯酰吗啉E+Z）峰面积的平均值；ω—标样中氰霜唑（或烯酰吗啉E+Z）的质量分数，以%表示；m1—标样的质量，单位为克（g）；m2—试样的质量，单位为克（g）。实验结果与讨论线性关系试验在一定质量范围内，按照浓度递增的顺序配制数个氰霜唑（或烯酰吗啉）标样样品，测定氰霜唑（或烯酰吗啉）的峰面积，取两次测定的平均结果。以有效成分的质量浓度为横坐标，有效成分的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。结果见表1、表2、图3、图4。表1氰霜唑质量浓度与峰面积的线性关系浓度（mg/L）91322388492543响应面积（mAU*s）3481352168323432573线性方程y=4.9705x-165.36相关系数R=0.9964图3氰霜唑标准曲线图表2烯酰吗啉质量浓度与峰面积的线性关系浓度（mg/L）275971121414571578响应面积（mAU*s）16205845728387649601线性方程y=6.0879x-68.041相关系数R=0.9999图4烯酰吗啉标准曲线图从表1、表2和图3、图4可以看出，在上述的操作条件下，当氰霜唑质量浓度在91mg/L～543mg/L之间，与相应的氰霜唑面积有良好的线性关系，计算回归方程为：y=4.9705x-165.36，相关系数R=0.9964，可以满足定量分析要求；当烯酰吗啉质量浓度在275mg/L～1578mg/L之间，与相应的烯酰吗啉面积有良好的线性关系，计算回归方程为：y=6.0879x-68.041，相关系数R=0.9999，可以满足定量分析要求。精密度试验选取40%氰霜唑·烯酰吗啉悬浮剂试样，从称样开始，按上述操作条件进行5次平行测定，结果见表3。表3氰霜唑（或烯酰吗啉）精密度试验结果测定次数12345氰霜唑（或烯酰吗啉）质量分数，%9.94（30.01）9.88（29.94）9.88（29.83）9.87（30.09）9.83（30.00）氰霜唑（或烯酰吗啉）极差，%0.11（0.26）氰霜唑（或烯酰吗啉）平均值，%9.88（29.97）氰霜唑（或烯酰吗啉）标准偏差，%(S)0.04（0.10）氰霜唑（或烯酰吗啉）相对标准偏差，%（RSD）0.40（0.33）从上表3可以看出，本方法对40%氰霜唑·烯酰吗啉悬浮剂中氰霜唑（或烯酰吗啉）的含量测定变异系数低于NY/T2887-2016中3.2.1c公式要求，具有良好的精密度。准确度试验为验证本方法的可靠性，按照配方比例要求，分别称取5份适量空白制剂于50mL容量瓶中，然后按制剂标示值，分别加入已知质量分数的氰霜唑（或烯酰吗啉）标样，制成准确度试验样品，然后按本标准测定其含量，所得到的测定值与理论值进行比较，得到回收率见表4。表4氰霜唑（或烯酰吗啉）准确度试验结果测定次数12345样品中氰霜唑（或烯酰吗啉）添加量，g；m20.02223（0.06899）0.01930（0.06001）0.01968（0.06123）0.02112（0.06597）0.01999（0.06215）氰霜唑（或烯酰吗啉）理论添加量，g；X20.02205(0.06830)0.01915(0.05941)0.01952(0.06062)0.02095(0.06531)0.01983(0.06153)测试时标样称样量，g（氰霜唑96.20%；烯酰吗啉99.30%）；m1/p0.02190（0.05757）0.02190（0.05757）0.02190（0.05757）0.02190（0.05757）0.02190（0.05757）氰霜唑（或烯酰吗啉）实测添加量；X10.02213（0.06853）0.01916（0.05936）0.01957（0.06087）0.02092（0.06526）0.01984（0.06160）氰霜唑（或烯酰吗啉）回收率，%；R100.36（100.34）100.05（99.92）100.26（100.41）99.86（99.92）100.05（100.11）氰霜唑（或烯酰吗啉）平均回收率，%100.1（100.1）从表中说明，氰霜唑最大回收率、最小回收率、平均回收率分别为100.36%、99.86%、100.1%在标准97%-103%之间，烯酰吗啉最大回收率、最小回收率、平均回收率分别为100.41%、99.92%、100.1%，在标准98%-102%之间，均具有良好的准确度。非分析物干扰称取空白制剂0.21013g，加适量甲醇超声溶解，冷却至室温后用甲醇定容备用作为非分析物干扰试验的空白溶液，另称取氰霜唑（或烯酰吗啉）原药0.02003g（0.06211g）作为参照试验溶液。按标准操作条件进行测定，待标样相邻两针峰面积相对变化率小于1.5%后，分别进样空白溶液及原药样品，结果显示，空白制剂与氰霜唑（或烯酰吗啉）原药之间无相互干扰。图5非分析物干扰空白图谱图6非分析物干扰原药图谱特异性测定试样溶液中烯酰吗啉E体、烯酰吗啉Z体、氰霜唑色谱峰起始时峰高10%处、起始时峰高50%处、峰高100%处、结束时峰高50%处、结束时峰高10%处的紫外吸收曲线完全一致，并与标样溶液中烯酰吗啉E体、烯酰吗啉Z体、氰霜唑色谱峰的保留时间和紫外吸收曲线一致，试样中烯酰吗啉E体、烯酰吗啉Z体、氰霜唑色谱峰与相邻杂质峰的分离度均大于1.5，方法特异性符合要求。图740%氰霜唑·烯酰吗啉悬浮剂中氰霜唑HPLC-DAD峰纯度色谱图图840%氰霜唑·烯酰吗啉悬浮剂中烯酰吗啉HPLC-DAD峰纯度色谱图图9烯酰吗啉、氰霜唑标样290nm处的高效液相色谱图图1040%氰霜唑·烯酰吗啉悬浮剂样品290nm处的高效液相色谱图样品不同实验室验证结果选取一个40%氰霜唑·烯酰吗啉悬浮剂，按相同方法由不同人员不同仪器在不同的实验室，对统一试样中的氰霜唑（或烯酰吗啉）质量分数进行测定，结果见表5。表5不同实验室验证结果验证单位氰霜唑质量分数（%）烯酰吗啉质量分数(%)浙江威尔达化工有限公司10.130.0浙江威原天盛作物科技有限公司10.030.1操作条件的确立检测波长的确定氰霜唑（或烯酰吗啉）的紫外光谱图如图11、图12所示，从图11、图12可以看出，氰霜唑在280nm波长处有较大吸收峰，烯酰吗啉在300nm波长处也有较大吸收峰，故确定检测波长为300nm，在该检测波长处干扰较少，灵敏度均较高。图11氰霜唑紫外光谱图图12烯酰吗啉紫外光谱图结论本文件采用高效液相色谱法对40%氰霜唑·烯酰吗啉悬浮剂中的氰霜唑、烯酰吗啉进行分离和测定。在氰霜唑（或烯酰吗啉）质量浓