（正式版）DB22∕T 3289-2021 《玉木耳液体菌种生产技术规程》

22AcodeofpracticeforliquidspawnproductionofwhitewoodearI本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件主要起草人：李晓、张波、徐安然、钱可晴、杨迪、刘宗、Samwel、马世1玉木耳液体菌种生产技术规程GB/T150.4压力容器第四部分：制造、检验GB4789.28食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量NY/T528食用菌菌种生产技术规程食用菌液体菌种培养专用设备，要求不锈钢材质，并符23.5对尚未加水投料的空发酵罐进行高压蒸汽灭菌。对投料后的发酵罐进行高压蒸汽灭菌。3地面防水、防腐蚀、防渗漏、防滑、易清洗，应有1.0°~1.5°的排水坡度和排水系统，排水沟5.1.5.1水、电（停电需配备发电机）、蒸汽、空气5.1.5.2液体菌种生产车间应按照GB50073规定执行。b)无菌接种室洁净度达到万级，接种机位置空气洁净度达到百级；省级以上农作物品种审定委员会审（认）定或登记（备案）的品种，并符合DB22/T2605.2生产技术使用母种固体培养基，配方参见附录A.1，生5.2.2.1培养基配方5.2.2.2培养基制备用4层湿纱布过滤得滤液，再加入其余原料至溶解，定容至14在三角瓶中放入两粒转子，使用棉塞封瓶口，棉塞外加盖四层纱布5.2.2.4高压灭菌5.2.2.5冷却接种三角瓶液体培养基自然冷却至20℃~25℃时接种。在无菌条件下，使用经火焰灼烧灭菌并冷却5.2.2.6恒温培养b)培养条件：将三角瓶放入25℃恒温箱中静5.2.2.7菌种标准检验a)菌丝形态：静止10min后观察，菌球下沉（占90%以上）且无或有少量泡沫，菌球颗粒大小均匀一致，菌球表面菌丝5.2.3.1发酵罐检查及发酵罐空消c)发酵罐初次使用、出现杂菌、长期放置或更换品种等情况出现其一时应进行发酵罐空消，空5.2.3.2液体培养基制备5.2.3.3投料定容5空气搅拌1min～2min混合均匀，将液体菌种发酵罐口擦干后盖上罐盖，拧紧螺丝，再次检查发酵罐5.2.3.4发酵罐实消5.2.3.5冷却和调压Mpa时，打开空气压缩机开关，给发酵罐通入无菌空气，当温度降至25.2.3.6接种d)用酒精棉擦拭接种口附近，并用酒精喷灯消毒；e)接种口周围放置酒精棉并点燃，关闭排气阀，打开接种口，拿取摇瓶菌种在火焰上方拔5.2.3.7培养），发酵罐液体菌种培养至48h～72h，应对罐内菌种进行一次杂菌检测，具体检测内容及要求见附6b)调整菌种罐压力稳定后打开阀门送菌种，开始接种，接种量为25mL～30mL；d)排掉用完的菌种罐剩余菌种，清洗菌种罐。于10℃。发酵罐内液体菌种应持续通入无菌空气，保持罐压0.01M母种、摇瓶液体菌种和发酵罐液体菌种生产的每个环节都要有详实的记录，记录内容按附录D执行。由具体操作人员现场填写记录，定期由主管领导审核，签字后归档保存，档案应保存37A.1母种固体培养基配方A.2母种液体菌种培养基配方A.3发酵罐液体培养基配方0.375kg，消泡剂200mL，水定8按照无菌操作从取样阀取少量培养液，接种于GB/T4789.28中规定的PDA培养基中，置