《生物样本库 类器官库建设与管理要求》

1下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本（包括所有的修改单）适用ISO24603:2022生物技术生物样本保藏人和小鼠多能干细胞通用要求(Biotechnology—ISO21709:2020生物技术生物样本保藏哺乳动物细胞系建立、维持和表征235.1类器官库的建设和管理应在满足GB19489、GB/T37864—2019、GB/T39766—2021和GB/TISO24603:2022中5.4的要求，对试剂耗材的采购、验收、储存、使用、追溯和供应商评价进行管47.2.8应记录类器官的培养信息，包括但不限于类器官唯一标识、类器官代次、培养条件（如培养5注：人源类器官相关数据包括但不限于研究数据、表型数据、临床数据、流行病学数据和生物样本处理过程中得）；）；类器官的形态应在显微镜下观察。应在培养过程中对类器官的形态进行记录。例如，记录其大6注：SNP芯片是高通量固相基因分型芯片，通过探针杂交，全域检测人类基因组上百万位点SNP分型、杂合性缺失LOH、拷贝数变异CNV、亲缘同源性，可对类器官溯源鉴定、交叉污染、遗传纯度进行质控；低深度全基因组测序（CNV分析）采用低通量全基因组二代测序技术，无需外显子探针捕获，对全基因组均匀测序，专门用于成类器官的标志基因/蛋白进行检测，例如，类器官特有干细胞标志基因、特有细胞类型的标志基因行分析，并与来源组织中细胞的典型特征（包括但不限于关键病理特征，如：分化程度、增殖指数示例：人小肠类器官能分泌碱性磷酸酶和溶菌酶，7.3.9.2应建立、确认类器官从样本处理到类器官储存过程中的微生物污染检测程序，定期检测细）；78应包含规定一般培养和保存方法的信息，以及类器官已合格或已同意的程序（如“仅限体外研），9）；）；c）将冻存管内容物转移至预先加入10mL预热的完全培养基或Advaa）石蜡切片制备试剂。根据相应要求准备用于石蜡包埋的试剂，包括类器官化胶溶液、琼脂a）从体外培养的类器官中吸取培养基，加入等体积的磷酸盐缓冲液[F.2.1a）]，然后再次吸）；清，加入100μL减血清培养基重悬沉淀备用或将离心后的细胞沉淀用减血清培养基重悬）；c）使用核酸完整度生物分析仪检测提取RNA的完整度，确保RNA完整性值≥7.0、a）使用建库试剂盒[H.1.2b）]，利用Oligo(dT)磁珠特异性结合真核信使核糖核酸（mRNA）编码RNA；高温洗脱富集纯化mRNA，金属浴完成片段化处理，获得200bp～300bp均质c）使用建库试剂盒[H.1.2b）]双端测序接头，通过试剂盒内置高保真DNA聚合酶完成PCR扩增，构建特异性测序文库；采用建库试剂盒[H.1.2b）]磁珠纯化PCR产物，去除接头二聚d）功能富集分析：clusterProfiler包完成基因（GO）功能注释、信号通路富集、全称采用磁珠[I.1.2d）]纯化片段化DNA，去除大片段杂质，适配外显子捕获上机标准片段长物素探针，富集结合外显子区域DNA片段，洗脱去除非编