化妆品 温和刺激性实验（斑马鱼）实验方法

团体标准标准编号：化妆品温和刺激性实验（斑马鱼）实验方法xxxx-xx-xx发布xxxx-xx-xx实施XXXX发布目次TOC\o"1-2"\h\uHYPERLINK前言 3HYPERLINK化妆品温和刺激性实验（斑马鱼）实验方法 4HYPERLINK1.范围 4HYPERLINK2.定义 4HYPERLINK3.规范性引用文件 4HYPERLINK4.检测原理 4HYPERLINK5.实验材料与试剂 4HYPERLINK5.1.材料 4HYPERLINK5.2.试剂 4HYPERLINK5.3.对照品 5HYPERLINK6.实验仪器与设备 5HYPERLINK7.实验步骤 5HYPERLINK7.1.实验准备 5HYPERLINK7.2.样品处理 6HYPERLINK7.3.对照组溶液 6HYPERLINK7.4.实验方法 6HYPERLINK8.结果计算 6HYPERLINK9.质量控制 6前言本标准按照GB/T1.1-2020给出规则起草。本标准提出和归口：本标准起草单位：本标准主要起草人：

范围本标准规定了化妆品温和刺激性检测斑马鱼鱼胚实验的实验原理、实验准备、实验方法、实验结果和实验报告。本标准适用于评价液态水基类化妆品原料及其产品温和刺激性检测。定义hourspost-fertilization（hpf）：受精后小时数规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注明日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件，凡不注明日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。化妆品安全技术规范（2015版）检测原理受试样品配置成溶液孵育鱼胚至24h，在体式显微镜下观察并记录（拍照和视频）鱼胚的摆动次数、鱼胚死亡（凝结）数量。实验材料与试剂材料斑马鱼交配盒鱼胚收集器细胞培养板：6孔细胞培养板试剂十二烷基硫酸钠（SDS）标准储备溶液（5mg/mL）：称取十二烷基硫酸钠（SDS）标准品50mg（精确至0.01mg），用斑马鱼系统养殖水溶解并定容至10mL容量瓶，于4℃保存。十二烷基硫酸钠（SDS）标准储备溶液（1mg/mL）：称取十二烷基硫酸钠（SDS）标准品10mg（精确至0.01mg），用斑马鱼系统养殖水溶解并定容至10mL容量瓶，于4℃保存。十二烷基硫酸钠（SDS）标准储备溶液（0.1mg/mL）：称取十二烷基硫酸钠（SDS）标准品1mg（精确至0.01mg），用斑马鱼系统养殖水溶解并定容至10mL容量瓶，于4℃保存。实验仪器与设备斑马鱼养殖系统连续变倍体式显微镜（带拍照功能）恒温培养箱天平：精密度0.00001g软件：SPSS统计分析软件实验步骤实验准备鱼胚品系：野生型AB系斑马鱼自然交配的胚胎；鱼胚要求：以斑马鱼开始交配受精为0hpf，选用46~56hpf健康、无畸形、正常发育的鱼胚用于实验；胚胎刺激反应的表现形式为：刺激摆动，死亡（凝结）等。鱼胚孵育温度：28±1℃；样品处理水溶性样品：使用斑马鱼系统养殖水将受试样品稀释成0.01、0.1、1、10、100%实验浓度，混匀，放置4℃保存备用。对照组溶液空白对照组：斑马鱼系统养殖水阳性对照组：十二烷基硫酸钠（SDS）标准储备溶液（5、1和0.1mg/mL）实验方法随机挑选46~56hpf健康、无畸形、正常发育的鱼胚用于实验。使用6孔细胞培养板为实验载体，每孔加入鱼胚20枚，实验溶液5mL。另设空白对照和阳性对照组，每个浓度设置3个平行组。在体式显微镜下观察，并记录鱼胚的刺激摆动，死亡（凝结）数量。结果计算统计并计算鱼胚的刺激摆动，死亡（凝结）数量。跟据终点反应对刺激性等级进行评分分类。终点反应终点评分刺激性分类评价指标鱼胚（死亡或凝结率)和/或(摆尾次数)（D和/或W）-无刺激性D=0.0%；D＜50%与空白对照组无显著性差异；W＜空白对照组且与空白对照组无显著性差异+轻微刺激性D＜50%（与空白对照组有显著性差异）；W＜空白对照组且与空白对照组无显著性差异++轻度刺激性D＞50%（与D=50%组无显著性差异）；W与空白对照/阳性对照相比有显著性差异+++中度刺激性D=50.0%；D＞50%（与阳性对照组有显著性差异）；W与空白对照组/阳性对照相比有显著性差异++++强刺激性D=100.0%；D＞50%（与阳性对照组无显著性差异）；W与空白对照/阳性