T∕CNSS 051-2026 血清中二十二碳六烯酸（DHA）的测定 气相色谱-质谱法

Determinationofdocosah2026-06-29实施2026-06-29实施本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。工气相色谱-质谱法下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本3原理4.1.4氢氧化钠(NaOH):分析纯。4.1.7正己烷(C₆H₁₄):色谱纯。4.2.350%盐酸-乙腈溶液(10+90,V/V):量取50%盐酸10mL、乙腈904.2.4氢氧化钠-甲醇溶液(10+90,V/V):量取0.4g/mL氢氧化钠溶液10mL、甲醇90mL,混匀备工24.3.1氘代二十二碳六烯酸(DHA-ds,C₂2DH₂₇O₂,相对分子质量：333.52,CAS号：1197205-71-2),纯度≥98%。4.3.2二十二碳六烯酸(DHA,C₂H₃₂0₂,相对分子质量：328.48,CAS号：6217-54-5),纯度≥99%。保存，有效期24个月。用甲苯溶液稀释并定容至10.00mL,混匀。-20℃保存，有效期12个月。4.4.4DHA中间溶液(600μmol/L,即0.2mg/mL):用甲苯溶液稀释并定容至10.00mL,混匀。-20℃保存，有效期12个月。a)第一个点，中间溶液(4.4.4),浓度600μmol/L。b)第二个点，由中间溶液(4.4.4)稀释3倍得到。精密量取DHA中间溶液(4.4.4)1.66mL,c)第三个点，由中间溶液(4.4.4)稀释10倍得到。精密量取DHA中间溶液(4.4.4)0.50mL,d)第四个点，由中间溶液(4.4.4)稀释40倍得到。精密量取DHA中间溶液(4.4.4)0.125mL,e)第五个点，由中间溶液(4.4.4)5.4恒温加热箱或恒温水浴锅：控温范围20℃~100℃,控温精度±1℃。采集禁食12h后的血液样本，分离人血清0.5mL,冷冻保存于-80℃冰箱。分析前解冻，涡旋混匀。6.2.4液液萃取：加入1.5mL正己烷萃取，重复操作2次，合并3次萃取上清液，于40℃下真空干燥至完全或氮吹至干。6.3衍生化36.4.1.6气相色谱条件：程序升温：初始温度230℃,持续Omin;230℃~234℃,升温速率5℃/min,保持7min;234℃~250℃,升温速率1℃/min,保持3min。见附录A中图A.1。按公式(1)计算：45(资料性)A.1DHA和DHA-d₅选择离子色谱图见图A.1。1.000.50A图A.1DHA(27.5min)和DHA-d₅(27.6min)选择离子色谱图A.2DHA(m/z327)和DHA-d₅(m/z332)提取离子色谱图见图A.2。图A.2DHA(m/z327)和DHA-d₅(m/z332)提取离子色谱图6inFrozenHumanSerum.CertificationofofPolyunsaturatedFattyAcids.AnalyticalandBioanalyticalChemistry,2017,409(21):49[2]Kish-TrierE,YuzyukT,SchwarzEL,etal.QuantitationoftotalfaandserumbyGC-NCI-MS[J].Clini[3]Quehenberger0,etal.HighSensitivityQuantitativeLipidomicsAnainBiologicalSamplesbyGasChromatography-MassSpectrometry.B(BBA)-MolecularandCellBiologyofLipids,2011,1811(11):737-746.[