CN115279379B 用于调节smn2的化合物和方法 （Ionis制药公司）

2022.08.26PCT/US2021/0199342021.02.26WO2021/174019EN2021.09.02US2017044538A1,2017.WO2018014041A2,2018.01.18提供了用于调节细胞或受试者中的SMN2RNA量降低；不能坐直、站立和/或行走或其能力降22.如权利要求1所述的经修饰的寡核苷酸，所述经修饰的寡核苷酸的盐包括钠盐或钾35.一种如权利要求1-3中任一项所述的经修饰的寡核苷酸的群体，其中所述经修饰的寡核苷酸的所有硫代磷酸酯核苷间键联都是6.一种如权利要求4所述的寡聚化合物的群体，其中所述经修饰的寡核苷酸的所有硫7.一种药物组合物，所述药物组合物包含权利要求1-3中任一项所述的经修饰的寡核49.如权利要求8所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含如权利要求1至3中任一11.如权利要求8所述的药物组合物，其中所述药物组合物基包含如权利要求4所述的12.如权利要求8所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含如权利要求4所述的寡13.如权利要求8所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含如权利要求5所述的经14.如权利要求8所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含如权利要求5所述的经15.如权利要求8所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含如权利要求6所述的寡16.如权利要求8所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含如权利要求6所述的寡5[0002]本申请与电子格式的序列表一起提交。所述序列表以创建于2021年2月26日的标[0004]近端脊髓性肌萎缩症(SMA)是一种特征在于脊髓运动神经元损失的遗传性神经退重程度因患者而异并因此分为四种类型。I型SMA是最严重的形式，在出生时或6个月内发成年期能够行走并且通常没有呼吸或营养问题(Farrar等人,Ann多蛋白复合物的一部分的蛋白。一种几乎相同的基因SMN2(也称为SMN着丝粒)存在于染色体5q13上的重复区域中并调节疾病严重程度。尽管SMN1和SMN2具有编码相同蛋白质的潜子7的位置+6处含有翻译沉默突变，这导致SMN2转录物中外显子7的包含效率低下。因此，SMN2的优势形式是缺少外显子7的截短形式，其为不稳定并且非活性的(Cartegni和Krainer,Nat.Genet.,2002,30,377-384)。SMN2基因的表达导致约10-20％的全长SMN蛋白和80-90％的不稳定/非功能SMNΔ7蛋白。SMN蛋白在剪接体的组装中发挥着公认的作用并且也可介导神经元的轴突和神经末端中的mR6方案中，受试者患有神经退行性疾病。在某些实施方案中，受试者患有脊髓性肌萎缩症[0008]还提供了可用于改善神经退行性疾病的至少一种症状的方法。在某些实施方案[0009]应当理解，前述一般描述和以下详细描述仅为示例性和说明性的而不具有限制GenBank和NCBI参考序列记录在此关于本文所讨论的文件的部分以及全文通过引用明确并剂化学使用的命名法以及其程序和技术是本领域中众所周知且常用的。在允许的情况下，某些实施方案中，2'-脱氧核糖核苷是2'-#-D-脱氧核糖核苷并包含2'-#-D-脱氧核糖基糖72-C(＝O)-NH-CH3基团代替核糖基糖部分的2'-OH2-C(＝O)-NH-CH3基团代替核糖基糖部分的2'-OH基团的含至少一个除H或OH以外的2'-取代基4'至2'桥代替核糖基糖部分的2'OH-基团的双环糖部分，其中桥具有式4'-CH(CH3)-O-2'，并且其中桥的甲基呈S构型。定手性中心含有特定立体化学构型的分子的数目或百分比大于在特定手性中心为立构无规时群体内预期在相同特定手性中心含有相同特定立体化学构型的分子的数目或百分比。在每个分子内具有多个手性中心的分子的手性富集群体可含有一个或多个立构无规手性8机制，但最常见的杂交机制涉及互补核碱基之间的氢键键合，其可为Watson-Crick、Hoogsteen或反向Hoogsteen9学上可接受的盐保留母体化合物的所需的生物活性并且不赋予其非所需的毒型的立构无规手性中心的分子数目可能但未必与具有(R)构型的立构无规手性中心的分子代物。经修饰的核苷可并入寡核苷酸内的一个或多个位置并且此类寡核苷酸能够与互补寡聚化IDNO:20-50中任一者的至少15或至少16个连续核碱基，其中所述经修饰的寡核苷酸包含至少一个选自经修饰的糖部分和经修饰的核苷饰的寡核苷酸包含至少一个选自经修饰的糖部分和经修饰的核苷间键联的经修饰的寡核苷酸包含至少一个选自经修饰的糖部分和经修饰的核苷饰的寡核苷酸由19或20个连接的核苷组成并且核碱基序列包含核碱基序列SEQIDNO:20、其中所述经修饰的寡核苷酸包含至少一个选自经修饰的糖部分和经修饰的核苷间键联的饰的寡核苷酸由20个连接的核苷组成并且核碱基序列包含核碱基序列SEQI[0064]实施方案6.如实施方案1-5中任一[0065]实施方案7.如实施方案1-6中任一项所ssosssssosssssoss、ssosssosssosssoss、soossssssssssooss、sooosssssssssooss、sooossssssssoooss、sssssssooosssssss、ssossssssssssssss、ssssossssssssssss、ssssssossssssssss、ssssssssossssssss、ssssssssssossssss、ssssssssssssossss、ssssssssssssssoss、sossssssssssssoss、sosssssssssosssss、sosssssssosssssss、sosssssosssssssss、sosssosssssssssss、ssssosssssssssoss、ssssssosssssssoss、ssssssssosssssoss、ssssssssssosssoss、ssssssssssssososs、soossssssssssssss、sssoossssssssssss、sssssoossssssssss、sssssssoossssssss、sssssssssoossssss、sssssssssssoossss、sssssssssssssooss、sssssssoooossssss、ssoooosssssssssss、ssssoooosssssssss、ssssssssoooosssss、ssssssssssoooosss、sssssssssssooooss、ssssssooooossssss、ssssssoooooosssss、soooosssssssoooss、sssssooooooosssss、ssssssssssssssoss、ssssssssssssosss、sssssssssssssooss、ssssssssssssososs、sssssssssssosssss、sssssssssssososss、ssssssssssossosss、sssssssssosssssss、sssssssssosssosss、ssssssssosssssoss、ssssssssossssosss、sssssssosssssssss、sssssssoossssssss、sssssosssssssssss、sssosssssssssssss、sosssssssssssssss、sosssssssssssssoss、sossssssosssssssss、sosossssssssssssss、ssssssssssooooss、ssssssssoooossss、sssssssooossssss、ssssssoooossssss、ssssssooooosssss、sssssoooooosssss、sssssooooooossss、ssssoooossssssss、ssossssssssssoss、ssosssssossssoss、ssosssosssossoss、ssossossossososs、ssososososososss、ssoooossssssssss、soosssssssssooss、sooossssssssooss、sooosssssssoooss、[0066]实施方案8.如实施方案1‑6中任一项所述的[0067]实施方案9.如实施方案1‑6中任一项所述苷酸具有选自以下的核苷间键联基序：zzzzzzzzzzzzzzzzz、ssssssssssszzzzzz、ssssszzzzzzssssss、zzooooooooooooozz、zzzzooooooooooozz、zzzzzzooooooooozz、苷酸具有选自以下的糖基序(5'至3')：eeeeeeeeeeeeeeeeeeee、eeeeeeeeeeeeeeeeeee、eeeeeeeeeeeeeeeeee、eeeeeeeeeeeeeeeee、eeeeeeeeeeeeeeee、nnnnnnnnnnnnnnnn、nnnnnnnnnnnnnnnnnny、nnnnnnnnnnnnnnnnnndd、nnnnnnnnnnnnnnnnnned、nnnnnnnnnnnnnnnnnnde、nnnnnnnnnnnnnnnnnnee、eeeeeeeeeeeeeeeeeedd、eeeeeeeeeeeeeeeeeeed、eeeeeeeeeeeeeeeeeede、nnnnnnnnnnnnnnnnnnd、keeekeeekeeekeeek、keeeekeeeeekeeeek、keeeeeeekeeeeeeek、keeeeeeeeeeeeeeek、eekeekeekeekeekek、eekeekeekeekeekee、eeeeekeekeekeekee、eeeeekeekeekeeeee、eeeeekeeeeekeeeee、keekeekeekeeeeeee、eeeeeeekeekeekeek、keekeekeeeeeeeeee、eeeeeeeeeekeekeek、keekeeeeeeeeeeeee、eeeeeeeeeeeeekeek、keekeekeekeekeek、keeekeeekeeekeek、keeeekeeeekeeeek、keeeeeeekeeeeeek、keeeeeeeeeeeeeek、kekeekeekeekeeke、eekeekeekeekeeke、eeeeekeekeekeeke、eeeeekeekeekeeee、eeeeekeeeeekeeee、keekeekeekeeeeee,eeeeeekeekeekeek、keekeekeeeeeeeee、eeeeeeeeekeekeek、keekeeeeeeeeeeee、eeeeeeeeeeeekeek、eeeeeeeeeeeeeeeeeed、苷酸具有选自以下的糖基序(5'至3')：nnnnnnnnnnnn丙基)乙酰胺糖部分、2'O-(N-环丙基)分。[0072]实施方案14.如实施方案13所述的[0073]实施方案15.如实施方案14所述的寡聚化合物，其中所述双环糖部分具有4'-2'[0074]实施方案16.如实施方案13所述的[0075]实施方案17.如实施方案16所述的寡[0076]实施方案18.如实施方案13所述的寡聚[0078]实施方案20.如实施方案1-6和10-[0079]实施方案21.如实施方案20所述[0080]实施方案22.如实施方案20或实施方案[0081]实施方案23.如实施方案1-20或22中任地选自磷酸二酯核苷间键联和硫代磷酸酯核核苷酸具有选自以下的核苷间键联基序(5'至3')：sososssssssssssss、soossssssssssssss、sosssosssssssssss、sosssssosssssssss、sosssssssosssssss、[0084]实施方案26.如实施方案1-25中任一[0085]实施方案27.如实施方案[0086]实施方案28.如实施方案1-27中任一项所[0087]实施方案29.如实施方案1-28中任一项[0088]实施方案30.如实施方案1-29中任一[0089]实施方案31.如实施方案30所述的寡聚[0090]实施方案32.如实施方案1-31中任一项[0091]实施方案33.如实施方案1-32中任一[0092]实施方案34.一种寡聚化合物，所述[0100]实施方案35.一种寡聚化合物，所述[0108]实施方案36.一种寡聚化合物，所述[0117]实施方案37.一种寡聚化合物，所[0153]实施方案50.一种药物组合物，所述的寡聚化合物或实施方案38-49中任一项所述的经修饰的寡核苷酸和药学上可接受的稀释[0154]实施方案51.如实施方案50所述[0155]实施方案52.如实施方案51所述的药物述经修饰的寡核苷酸和人工CSF(aCSF[0156]实施方案53.如实施方案51所述的药[0157]实施方案54.一种如实施方案38-49中任一项所述的经修饰的寡核苷酸的手性富[0158]实施方案55.如实施方案54所述的手性个具有(Sp)构型的特定硫代磷酸酯核苷间键联的经修饰[0159]实施方案56.如实施方案54所述的手性个具有(Rp)构型的特定硫代磷酸酯核苷间键联的经修饰[0160]实施方案57.如实施方案54所磷酸酯核苷间键联处具有特定经独立选择的立体化学构型的经修饰[0161]实施方案58.如实施方案57所述的磷酸酯核苷间键联处具有(Sp)构型的经修饰的寡核苷酸或在每个硫代磷酸酯核苷间键联[0162]实施方案59.如实施方案57所述的手硫代磷酸酯核苷间键联处具有(Rp)构型并且在每个其余硫代磷酸酯核苷间键联处具有[0165]实施方案62.一种治疗与SMN1或SMN2相关的SMN1或SMN2相关的疾病或处于发展所述疾病的风险中的受试者施用治疗有效量的实施方[0166]实施方案63.如实施方案62所述的方法，其中所述[0167]实施方案64.如实施方案63所述的[0172]实施方案69.如实施方案68所述的织或器官与实施方案1-37中任一项所述的寡聚化合物、实施方案38-49中任一项所述的经修饰的寡核苷酸或实施方案50-53中任一[0176]在某些实施方案中，本文提供了包含由连接的核苷组成的寡核苷酸的寡聚化合含至少一个经修饰的核苷(包含经修饰的糖部分和/或经修饰的核碱基)和/或至少一个经支链的。适于非双环经修饰的糖部分的2'-取代基的实例包括但不限于：2'-F、2'-OCH3 OCF312F-5'-甲基糖部分以及Migawa等人,WO20[0184]在某些实施方案中，2'-取代的非双环经修饰的核苷包含包括选自以下的非桥联2'-取代基的糖部分：F、NH2、N3、OCF3)22)2O(CH2)2N(CH3)2和N-[0185]在某些实施方案中，2'-取代的非双环经修饰的核苷包含包括选自以下的非桥联[0186]在某些实施方案中，2'-取代的非双环经修饰的核苷包含包括选自以下的非桥联OCH2C(＝O)-N(H)CH3。[0187]某些经修饰的糖部分包含取代基，其桥联呋喃糖基环的)3-2-O-2'()2-O-2'(22其类似物(参见例如Seth等人,U.S.8,278,2Prakash等人,U.S.8,278,425345和Allerson等人,U.S.8,124,745)、4'-CH2-C(H)(CH3)-2'(参见例如Zhou等人,2-C(＝CH2)-2'和其类似物(参见例如Seth等人,a)2-5J2C12烯基2C20芳基5[0194]其他双环糖部分是本领域中已知的，参见例如：Freier等人,NucleicAcids[0206]T3和T4各自独立地为将经修饰的THP核苷连接至寡核苷酸其余部分的核苷间连接和q7各自为H。R1为甲氧基并且R2[0210]在某些实施方案中，糖替代物包含具有多于5个原子和多于一个杂原子的环。例如，已报道包含吗啉基糖部分的核苷和其在寡核苷酸中的使用(参见例如Braasch等人,核苷酸的实例包括但不限于：肽核酸(“PNA”)、非环丁基核酸(参见例如Kumar等人,Org.Biomol.Chem.,2013,11,5853-5865)以及Manohar氧基)-1,3-二氮杂吩噁嗪-2-酮(G-钳)。经修饰的核碱基也可包括其中嘌呤或嘧啶碱基被PolymerScienceAndEngineering,Kroschwitz,J.I.编,JohnWiley&Sons,1990,858-Y.S.,第15章,AntisenseResearchandApplications,Crooke,S.T.和Lebleu,B.编,CRCPress,1993,273-288；以及第6和15章,AntisensPress,2008,163-166和442-4[0218]教导某些上文所说明的经修饰的核碱基以及其他经修饰的核碱基的制备的公开[0220]在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸的核苷可使用任何核苷间键联连接在一硫代磷酸酯(P(O2)＝S)和二硫代磷酸酯(HS-P＝S)。代表性的不含磷核苷间连接基团包括在的磷酸酯键联相比，经修饰的核苷间键联可用于改变(通常增加)寡核苷酸的核酸酶抗包含具有手性中心的核苷间键联的经修饰的寡核苷酸制备成包含立构无规核苷间键联的学构型的一个或多个特定硫代磷酸酯核苷间键联的经修饰的寡核苷酸。在某些实施方案某些实施方案中，特定构型的特定硫代磷酸酯核苷间键联存在于群体中至少90％的分子所述的方法生成。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸的群体富集了具有至少一个呈方案中，包含(Rp)和/或(Sp)硫代磷酸酯的经修饰的寡核苷酸分别包含下式中的一者或多至3')Sp-o-o-o-Sp-Sp-Sp-Rp-Sp-Sp-Rp-Sp-Sp-Sp-Sp-Sp-Sp-Sp-Sp或Sp-o-o-o-Sp-Sp-CarbohydrateModificationsinAntisenseResearch；Y.S.S间键联基序来描述(如本文所用，核碱基基序描述与核碱基的序列无关的对核碱基的修侧翼)形成核苷的连续序列，其中每个侧翼的核苷的至少一些糖部分不同于间隙的核苷的翼的最5'端核苷)的至少糖部分与相邻间隙核苷的糖部分不同，因此限定侧翼与间隙之间核苷包含经修饰的糖部分并且每个其余核苷包含2'-脱氧核糖翼中的5个连接的核苷和间隙中的10个连接的核苷组成。在此类命名法随后为特定修饰的情况下，所述修饰是每个侧翼的每个糖部分中的修饰并且间隙核苷包含2'-脱氧核糖基糖2'-脱氧核糖核苷和3'-侧翼中的5个[0235]在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸的每个核苷或其一部分包含2'-取代的糖HNA。在某些实施方案中，经完全修饰的寡核苷酸的每个核苷均包含相同经修饰的糖部分[0241]在某些实施方案中，具有间隔体基序的寡核苷酸包含包括经修饰的核碱基的核酸二酯核苷间键联不为末端核苷间键联，并且其余核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。寡核苷酸末端附近具有8或11个错配碱基的寡核苷酸能够引导靶核酸的特异性切割，不过的那些寡核苷酸实现靶特异性切割。个核苷间键联可经修饰或未经修饰并且可遵循或可不遵循糖修饰的间隔体修饰模式。例[0252]经修饰的寡核苷酸的群体(其中群体的所有经修饰的寡核苷酸具有相同分子式)体的经修饰的寡核苷酸富集β-D核糖基糖部分和至少一个呈特定立体化学构型的特定硫代[0254]在某些实施方案中，通过核碱基序列进一步描述寡核苷酸(未经修饰或经修饰的整个长度的核碱基序列与第二寡核苷酸或核酸(例如靶核酸)至少50％、至少60％、至少和任选地一个或多个缀合基团和/或末端基团组成。缀合基团由一个或多个缀合部分和将缀合部分连接至寡核苷酸的缀合接头组成。缀合基团可连接至寡核苷酸的任一端或两端Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1989,86,6553-6556)；胆酸(Manoharan等人,Bioorg.Med.Chem.Lett.,1994,4,1053-1060)；硫醚，例如己基-S-三苯甲基硫醇(Manoharan等人,Ann.N.Y.Acad.Sci.,1992,660,306-309；Manoharan等人,等人,EMBOJ.,1991,10,1111-1118；Kabanov等人,FEBSLett.,1990,259,327-330；2-二-O-十六烷基-外消旋-甘油-3-H-膦酸三乙基-铵(Manoharan等人,Tetrahedron乙二醇链(Manoharan等人,Nucleosides&Nucleotides,1995,14,969-973)或金刚烷乙酸棕育酚基团(Nishina等人,MolecularTherapyNucleicAcids,2015,4,e220；和Nishina等芬(fen-bufen)、酮洛芬(ketoprofen)、(S)-(+)-普拉洛芬(pranoprofen)、卡洛芬(carprofen)、丹磺酰肌胺酸(dansylsarcosine)、2,3,5-三碘苯甲酸、芬戈莫德如本领域中已知可用于将缀合基团连接至母体化合物的那些，例如本文所提供的寡核苷烯二酰亚胺基甲基)环己烷-1-甲酸丁二酰亚胺酯(SMCC)和6-氨基己酸(AHEX或AHA)。其他定数目或范围的连接的核苷组成和/或与参考核酸有指定互补性百分比的寡核苷酸和/或苷不计入寡核苷酸的长度并且不用于确定寡核苷酸对于参考核酸的互补性百分比。例如，寡聚化合物可包含(1)由8-30个核苷组成的经修饰的寡核苷酸和(2)包含1-10个与经修饰的寡核苷酸的核苷连续的接头-核苷的缀合基团。此类寡聚化合物中连续的连接核苷的总端核苷并通过磷酸酯或硫代磷酸酯核苷间键联共价连接至缀合接头或缀合部分的其余部类寡聚双链体包含一部分与靶核酸互补的第一寡聚化合物和一部分与第一寡聚化合物互的寡核苷酸和任选地缀合基团。寡聚双链体的任一种或两种寡聚化合物可包含缀合基团。寡聚双链体的每个寡聚化合物的寡核苷酸可包括非互补的悬多种非靶核酸杂交，或者不以产生显著非所需反义活性的方式与一种或多种非靶核酸杂[0279]在某些反义活性中，反义化合物与靶核酸的杂交导致切割靶核酸的蛋白质的募[0280]在某些反义活性中，反义化合物或反义化合物的一部分被加载至RNA诱导的沉默割。加载至RISC中的反义化合物为RNAi化合物。RNAi化合物可为双链(siRNA)或单链[0284]在某些实施方案中，寡聚化合物包含一部分与靶核酸互补的寡核苷酸或由其组(J.Natl.CancerInst.93:463-471,2001年3月)证明了与bcl-2mRNA具有100％互补性并且与bcl-xLmRNA具有3个错配的寡核苷酸在体内和在体外降低bcl-2和bcl-xL的表达的能(Nuc.Acid.Res.16:3341-3358,1988)测试了一系列串联的14个核碱基的寡核苷酸和包含两个或三个串联寡核苷酸的序列的28个和42个核碱基的寡核苷酸分别在兔网织红细胞测定中抑制人类DHFR的翻译的能力。三个14个核碱基的寡核苷酸各自单独地能够抑制翻译，不过与28个或42个核碱基的寡核苷酸相比处于更苷酸在寡核苷酸的整个长度上与靶核酸至少80％互补并且一部分与靶核酸100％或完全互[0291]在某些实施方案中，将细胞与和SEQIDNO:1互补的寡聚化合物接触调节细胞中[0292]在某些实施方案中，将受试者的细胞与和SEQIDNO:1互补的寡聚化合物接据标准体内测定施用时，与SEQIDNO:1互补的寡聚化合物能够在体内使全长SMN2蛋白增[0295]在某些实施方案中，寡聚化合物包含一部分与靶核酸互补的寡核苷酸或由其组些实施方案中，所述一种或多种寡聚化合物各自由经修饰的寡核苷酸组成。在某些实施方无菌盐水溶液和一种或多种寡聚化合物或由其组成。在某些实施方案中，无菌盐水是医药聚化合物和磷酸盐缓冲盐水(PBS)或由其组成。在某些实施方[0299]在某些实施方案中，药物组合物包含一种或多种寡聚化合物和一种或多种赋形[0300]在某些实施方案中，可将寡聚化合物与药学上可接受的活性和/或惰性物质混合聚化合物)引入至预制脂质体或由阳离子脂质和中性脂质的混合物制成的脂质复合物以将一种或多种包含本文所提供的寡聚化合物的医药剂递送至特定组织或细胞类型。例含3％w/v苯甲醇、8％w/v非极性表面活性剂聚山梨醇酯80TM和65％w/v聚乙二醇300的绝对乙醇溶液。此类共溶剂体系的比例可在不显著改变其溶解度和毒性特征的情况下变化明离酸)形式或离子化以及与阳离子缔合(盐)的形式绘制或描述，但此等化合物的水溶液以核苷酸或寡聚化合物的剂量(或剂量单位)(毫克)指示游离酸形式的经修饰的寡核苷酸或下，经修饰的寡核苷酸或寡聚化合物可为部分或完全去质子化的并且与Na+离子缔合。然TTCACTTTCATAATGCTGGC(SEQIDNO:22)的经修饰的寡核苷酸，其中核苷1和20中的每一者[0392]在某些实施方案中，经批准用于治疗SMA的spinraza&(通名nusinersen；化合物编号396443)是比较化合物(参见例如Chiroboga等人,Neurology,86(10):890-897,2016；Nerve.60(4):409-414,2019；Darras等人,Neurology,92(21):e2492-e2506,2019)。先前描述于WO2010120820(其通过引用并入本文)中并且具有序列(5'至3')[0394]化合物编号387954先前描述于通过引用并入本文的WO2014/179620中。化合物编号387954具有序列(5'至3')ATTCACTTTCATAATGCTGG(SEQIDNO:20)，其中每个核苷包含号396442具有序列(5'至3')CACTTTCATAATGCTGGC(SEQIDNO:21)，其中每个核苷包含2'-号443305具有序列(5'至3')TCACTTTCATAATGCTGG(SEQIDNO:23)，其中每个核苷包含2'-号819735具有序列(5'至3')CACTTTCATAATGCTGGC(SEQIDNO:21)，其中每个核苷包含2'-和化合物编号1358996中的每一者在此测定中比化合物编号396号1358996各自表现出相较于化合物编号396443、化合物编号387954和化合物编号443305改进的3小时FOB得分。如实施例6中所示，在700μg下，化合物编号1263789、化合物编号的每一者在此测定中比化合物编号396443、化合物编号387954和化合物编号443305更耐号1358996各自表现出相较于化合物编号396442和化合物编号819735改进的长期耐受性。编号1358996显示无不良作用、无浦肯野细胞(Purkinjecell)损失和小于2倍对照的皮质野细胞损失和大于2倍对照的皮质GFAPmRNA。因此，化合物编号1263789、化合物编号1287717、化合物编号1287745和化合物编号1358996的每一者在此测定中比化合物编号糖部分和胸腺嘧啶碱基的核苷的寡核苷酸描述为具有经修饰的糖部分(2'-OH代替DNA的一个2'-H)的DNA或描述为具有经修饰的碱基(胸腺嘧啶(甲基化尿嘧啶)代替RNA的尿嘧啶)的或经修饰的RNA和/或DNA的任何组合的核酸，包括但不限于具有经修饰的核碱基的此等核mC表示在5位包含甲基的胞嘧啶碱基。[0408]本文所述的某些化合物(例如经修饰的寡核苷酸)具有一个或多个不对称中心并则本文所提供的绘制或描述为具有不确定的立体化学的化合物包括所有此等可能的异构[0409]本文所述的化合物包括其中一个或多个原子被所指示的元素的非放射性同位素12C同位素取代可赋予寡聚化合物有益于用作治疗或研究工具的新特性。在某些实施方案中，[0415]除非另外特别说明，否则下表中列出的每个经修饰的寡核苷酸与SEQIDNO:1[0432]以下表3中列出的每个经修饰的寡核苷酸与SEQIDNO:1(GENBANK登录号NT_[0439]以下表4中经修饰的寡核苷酸的长度为18或19个核苷。每个核苷包含2'‑MOE糖部[0446]以下表5中列出的每个经修饰的寡核苷酸与SEQIDNO:1(GENBANK登录号NT_[0453]以下表6中经修饰的寡核苷酸的长度为19或20个核苷。每个核苷包含2'‑MOE糖部[0460]以下表7中经修饰的寡核苷酸的长度为19或20个核苷。每个核苷包含2'‑MOE糖部2'‑β‑D‑脱氧核糖基糖部分。每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联或磷酸二酯核苷间键联。提供于核苷间键联基序栏中的每个经修饰的寡核苷酸的核苷间键联基序为(5'至[0468]以下表8中经修饰的寡核苷酸的长度各自为19个核苷。每个核苷包含2'-MOE糖部2'-β-D-脱氧核糖基糖部分。每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联或磷酸二酯核苷间键联。提供于核苷间键联基序栏中的每个经修饰的寡核苷酸的核苷间键联基序为(5'至[0474]以下表9中经修饰的寡核苷酸的长度各自为19个核苷。每个核苷包含2'-MOE糖部2'-β-D-脱氧核糖基糖部分。每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联或磷酸二酯核苷间键联。提供于核苷间键联基序栏中的每个经修饰的寡核苷酸的核苷间键联基序为(5'至[0481]除非另外特别说明，否则以下表10中列出的经修饰寡核苷酸中的每个核碱基与[0487]以下表11中列出的每个经修饰的寡核苷酸与SEQIDNO:1(GENBANK登录号NT_[0492]在人类SMN2转基因小鼠中测试了上文所述的所选经修饰的寡核苷酸的活性。SMA库存编号005058；BarHarbor,Maine)，或者是小鼠SMN异型接合的并且是通过将HOM/HOM(库存编号00005058)与FVB/NJ(库存编号001800)育种获得的人类SMN2(mSMN+/-；hSMN2的实时qPCR分析。使用引物探针组hSMN2vd#4_LTS00216_MGB(正向序列：外显子7(外显子7+)的SMN2RNA的量。使用引物探针组hSMN2_Sumner68_PPS50481(正向序TGGTGTCATTTAGTGCTGCTCTATG(SEQIDNO:15)；探针序列CCAGCATTTCCATATAATAGC(SEQIDNO:16))确定不包括外显子7(外显子7-)的SMN2RNCAGTGCTGTATCATCCCAAATGTC,(SEQIDNO:18)；探针序列：ACAGGCCAGAGCGAT(SEQ[0497]结果呈针对总SMN2水平归一化的RNA水平相对于PBS对照的倍数变化来呈现。表[0523]基本上如上文在实施例2中所述，测试了人类SMN2转基因小鼠中上文所述的选定[0540]基本上如上文在实施例2中所述，测试了人类SMN2转基因小鼠中经修饰的寡核苷[0545]基本上如上文在实施例2中所述，测试了人类SMN2转基因小鼠中上文所述的选定线[Y＝底部+(顶部-底部)/(1+(10^logEC50/X)^Hill斜率)]计算外显子包涵(外显子7+)的[0550]在野生型雌性C57/Bl6小鼠中对上文所述的经修饰的寡核苷酸进行测试，以评估耐受性。野生型雌性C57/Bl6小鼠各自接受700μg下表中列出的经修饰的寡核苷酸的单一(2)在没有刺激的情况下小鼠站立或弓起背部；(3)在没有刺激的情况下小鼠显示任何移0.003.250.002.000.003.250.502.000.500.007.006.504.253.254.002.003.002.004.003.003.754.004.003.500.000.000.004.000.000.002.003.253.502.752.003.254.003.004.004.004.004.003.500.003.504.003.753.253.004.754.003.503.253.504.004.253.003.503.752.750.000.000.003.752.502.253.003.753.502.000.002.002.503.753.754.004.004.004.754.004.754.004.003.504.004.003.250.000.000.003.503.003.000.000.004.002.752.502.753.253.503.500.004.004.253.753.754.004.004.003.753.754.004.000.000.250.003.750.003.002.003.752.752.252.500.000.002.002.252.252.502.000.000.002.003.003.503.505.252.503.503.50定经修饰的寡核苷酸以评估长期耐受性。此测定中也测试了比较化合物编号396442和的成长障碍有关，与PBS处理的动物类似。类似的耐受性评估描述于Oestergaard等人,完成。此外，使用RT-PCR测量了皮质GFAP，星状细胞增生(astrogliosis)的标志物[0639]用经修饰的寡核苷酸处理食蟹猴以确定经修饰的寡核苷酸的局部和全身耐受性以及药物动力学。每个组接受人工CSF或呈单次鞘内腰部推注剂量注射(IT)的经修饰的寡验[0645]在临床试验环境中评价了与人类SMN2互补的经修饰的寡核苷酸的安全性、耐受SMA)的患者中评价经修饰的寡核苷酸的单次和儿童生活质量问卷3.0神经肌肉模块；复合肌肉动作电位(CompoundMuscleActionPotential；CMAP)；运动单元估计(MotorUnitNumberEstimation；MUNE)；上肢模块[0650]以下各表中列出的每个经修饰的寡核苷酸与SEQIDNO:1(GENBANK登录号NT_[0651]下表中经修饰的寡核苷酸的长度为18个核苷。每个核苷包含2'‑MOE糖部分或2'‑酸[0655]下表中经修饰的寡核苷酸全部由以下序列组成(5'至3')：TCACTTTCATAATGCTGG [0656]下表中经修饰的寡核苷酸的长度为18个核苷。每个核苷包含2'‑MOE糖部分或2'‑二酯核苷间键联或甲磺酰氨基磷酸酯(MsP)核苷间键联。每个经修饰的寡核苷酸的核苷间嘧啶为5‑甲基胞嘧啶。下表中经修饰的寡核苷酸与连接至寡核苷酸的5'‑OH的6‑棕榈酰胺[0661]下表中经修饰的寡核苷酸全部由以下序列组成(5'至3')：TCACTTTCATAATGCTGG(SEQIDNO:23)，起始位点为SEQIDNo:1(本文在上文描述)上的27062并且终止位点为[0668]基本上如上文在实施例2中所述，测试了人类SMN2转基因小鼠中上文所述的选定性回归4参数剂量反应曲线[Y＝底部+(顶部‑底部)/(1+(10^logEC50/X)^Hill斜率)]计算的实时qPCR分析。使用引物探针组hSMN2vd#4_LTS00216_MGB确定包括外显子7(外显子7+)的SMN2RNA的量。使用引物探针组hSMN2_Sumner68_PPS50481确定不包括外显子7(外显子7[0681]基本上如上文在实施例2中所述，测试了人类SMN2转基因小鼠中上文所述的选定性回归4参数剂量反应曲线[Y＝底部+(顶部‑底部)/(1+(10^logEC50/X)^Hill斜率)]计算的实时qPCR分析。使用引物探针组hSMN2vd#4_LTS00216_MGB确定包括外显子7(外显子7+)的SMN2RNA的量。使用引物探针组hSMN2_Sumner68_PPS50481确定不包括外显子7(外显子7量[0691]基本上如上文在实施例2中所述，测试了人类SMN2转基因小鼠中上文所述的选定鼠处死，并且从冠状脑和脊髓提取出RNA以用于SMN2RNA的实时qPCR分析。结果呈针对总用非线性回归4参数剂量反应曲线[Y＝底部+(顶部‑底部)/(1+(10^logEC50/X)^Hill斜的实时qPCR分析。使用引物探针组hSMN2vd#4_LTS00216_MGB确定包括外显子7(外显子7+)的SMN2RNA的量。使用引物探针组hSMN2_Sumner68_PPS50481确定不包括外显子7(外显子7[0708]在野生型雌性C57/Bl6小鼠中对上文所述的经修饰的寡核苷酸进行测试，以评估0.002.002.00[0002]<110>IONIS制药公司(IonisPharmaceuticals,Inc.)[0003]<120>用于调节SMN2的化合物和方法[0004]<130>BIOL0367WO[0005]<150>62/983,545[0006]<151>2020‑02‑28[0008]<170>PatentInversion3.5[0012]<213>智人(Homosapiens)[0014]ccacaaatgtgggagggcgataaccactcgtagaaagcgtgagaagttactacaagcggt60[0015]cctcccggccaccgtactgttccgctcccagaagccccgggcggcggaagtcgtcactct120[0016]taagaagggacggggccccacgctgcgcacccgcgggtttgctatggcgatgagcagcgg180[0017]cggcagtggtggcggcgtcccggagcaggaggattccgtgctgttccggcgcggcacagg240[0018]ccaggtgaggtcgcagccagtgcagtctccctattagcgctctcagcacccttcttccgg300[0019]cccaactctccttccgcagcctcgggacagcatcaagtcgatccgctcactggagttgtg360[0020]gtccgcgtttttctacgtcttttcccactccgttccctgcgaaccacatccgcaagctcc420[0021]ttcctcgagcagtttgggctccttgatagcgttgagtggaggccctgccgcgacttggca480[0022]gtagcttattttgttcactcctctctggctggtgtgggggaggtgggggcattaggccag540[0023]ggtgaagcaggggaaccacttaggagtctgttaagatgatctgaacttcagaacaagatg600[0024]ttattaacagagtgaaagtatttggattctgggtatattttgaaatcggaggcaacaggt660[0025]ttttcagatagattcgataacggaggttatcctgaatagttgaaaagataaagttgcctt720[0026]ttgctgaggtgggaaagagaagattgccagtagagcaggtttctcaggagttcagtcttg780[0027]ggcatagcatggtaggggtgaatttggctggagtgagttggagagtaggagaagagaaat840[0028]ccaaggcaacatttgaccagcctgggcaacatagtgtgactccgagtctgcaaaaattag900[0029]acgggtgttgtggtgcgcgtctgtggtctcagctacctggaaggttcaggccttggaagg960[0030]ctcagggaggtggaggctgcagtgatctgtgattgcgcctctgcactccagcctgggcga1020[0031]cagagccagaccctgtcttaaaacaaaataaacggccgggcgcggtggctcaagcctgta1080[0032]atcccagcactttgggaggccgaggcggccggatcacaaggtcaggagatcgagaccatc1140[0033]ctggctaacacggtgaaaccccgtctctactacaaatacaaaaaattagccgggcgtggt1200[0034]gacgggcgcctgtagtcccagctactcgggaggctgaggcaggagaatgtcatgaagccg1260[0035]ggaggcggagcttgcagtgagccgagatcgcgccactgcactccagcctgggcgatagag1320[0036]caagactccgtctcaaataaataaataaataaataaataaataataaaaacatcggtagg1380[0037]catatttcaaggaattctatttaaaaaaaatttttttagagacaagttcgctctctgtgg1440[0038]cccaggctggagtacagtggcatgatcctagcccatggcagcgttgatctcttggcctca1500[0039]agcgaccctcctttggagtcgctgggcctaaaggagtgagccaccacgaaattttattat1560[0040]aaatggagggtagagaaattgggcaataaatggagggggaagtgagttaagaggaatttt1620[0041]aattatgtgtgtgtggttttaaaagaggggggtcttgctctgttgcccaggctgctgggg1680tgccagtggcgcaatcatgaatcactacagccttggactcctggcctcaagctatcctcccacctctgcctcccaaagtactgggattactagtgtgagccactgcactaagataggagcaacatgtttcagcatgtttgtgggttgataggaaagatgagaatgggaaagttgatgtcggaaagaagacaatggctagagcaatgtcctagagtaggtaagaagggatggatttggcctttgttggaaacattagcggttcttttggtgacagctatatagttaacacatctatgatacgtgaatgggcagataggatggcaggagattttgaaagttctcttgattcttactgttctc2040ttagtgaaagaagcaaggttatcagctagaagctgggatgggagaggaaagagaagatgg2100gaagtagatagttctttagaagagtgggcaagggttggactagggaagtttagtggaaat2160attgctaggcaacataaagagcctacttgagattcgtggtcatgagttgaaggagaccag2220acagcaagattgtgtatgagggcacccacagagtaaatggagagttgaaattaatgcagt2280tgtgattttaccacgtggatatgaagaagtgagggggagaagtacaaaggagttctctta2340atgattgaccatggaatttaagctggctaagaaaggaagtgagaggccgggcgcggtggc2400tcacgcctgtaatcccagcactttgggagactgaggtgggtggattacctgaggtcagga2460gtttgagaccaacctggccgatatggcgaaaccccatctctaataaaaatacagaaaaat2520tagccgggaatggtggcaggtgcctgtaatcccagctactcaagaggctgtggcaggagt2580atcccttggacccaggaggtggaggttgcagtgagccgagatcacgccactgtactccag2640cctggacgatatagtgagacttcacctcaaaaaaaaaaaaaaagaaaggaagtgaggatt2700ttaagaccctgagagacagtttaaaaagtgggaggatcggccgggcgctgtggctgacac2760ctgtaatcccagcactttgggaggccgagttgggcagatcacaaggtcaggagttcgaga2820ccagcctggccaatatggtgaaaccttgtctctactaaaaatacaaaaattagccgggca2880tggtgtcacgtgtctataatcccagctactcgggaggctgaggcagaaaaattgcttgaa2940cctgggaggcagaggttgcagacagctgagatcactccattgcactccagcctgggcaac3000aagagcaaaactttgtctttaaaaaaaaaaaaaaaaaaagaatacaaaaattagccgggc3060gtggtggcgcgtgcctataatcccagctacttgggaggctgaggcaggagaatcagttga3120acacgggaggcgaggtttgcagtgagccgagattgcgccactgcactccagcctgggcga3180cagagcaggactcctcttggaaaaaaaaaattagctgggcatggtggcaggtgcctgtag3240tctcagctactagggaggctgaggcaggaaaatcacttgaacccgggatgtggagtttgc3300agtgacccgagatcgtgccactgtactccatcctgggcgacaaaatgagactctgcctca3360aaaaaaaaaaaaaaaaaaagtgggaggatcaatgtactgccagtcctaatgaagtggaat3420gattgtccccatcaaatcactagtaggagtaagttgcagagcctagaaggtgatggttaa3480gagagtgggattcttgaaactgcatttatggagaggttgtggttattggttataataaat3540aaatacagttgaagtgagtgagtagctgagatttggggatgtatcagttcattcttacac3600tgctacaaagacatacctgagaccaggtatttataaagataagaggtttaatcagctcac3660agttctgctgcctgtacaggcttctcttgtggaggcctaaggaaacttacagtcatggtg3720gaaggtgaaggggaaacaagcacagtcttcacatggccagcaggagagagagagaagggg3780gaagtgctacatactttaaaacaaccagatcttgtgagaacgcttatcaggaaacagcac3840ttggggatggtgctaaatcattagaaatcacccccatgatccagtcgcctcctaccatgc3900ccacctccaacactggggatcacaattcagcatgagatttgggtaggaacacagagctgc3960accacatcagaggatgtacaagattgtggtggagaggagtttagagacctgcaaatatag4020ggtaattgaagggatcatctacatggatatttaaatcaccaaaaattatgacaggagtag4080tgttggagagagaactgcgatgtaaacattaaggaatgaggaagagtgactcggtaggct4140[0083]gtaggtgactgcaataggaaacgataatagactgtgagtctggtgacaagattttccttc4200tttctttttttccccccccccgagacagggcctctttttgttgcccaggtgggagtgcag4260tggcgcgatcacggctcactacaacctcctcccaagctcaagggattctcccacttcagc4320ctctcaagtagctggaactacaggtgctgaccaccatgcctggctactttttgtcaggat4380tttcaaggctgggaattttgagaggggaatggaggagaataatctgaaagtgcaagtaag4440gagcagggaagatttcttttttcttttttttttttttttttgagtcggagtctggctcag4500tcgcccaggctggagtgcagtggcgagatctccgctcactgcaagctccgcctcccgtgt4560tcacgccattctcctccttcagcctcccgagtagctgggactacaggcgcccgccaccac4620gcccagctaattgtttttttgtatttttagtagagacggggtttcaccgtgttagccagg4680atggtctcaatctcctgactttgtgatccgcccaccccggcctcccaaagcgcttgggat4740tacaggcgtgagccaccgcgccagccagagcagggaagatttcttccccacatctccagt4800aggtacagtgatatgaagtgtgtggaggagaaaagaggaaacatctatcatttgagatgg4860ctgcgaaaggaaaaggcatcctcagggagctagattttacttagagcaagaaatgaaggg4920atgattcagaggttaaaagagtggattttatgaattactcaagggagcacagtggaagtt4980tcaggaagtggtaggagaaggtagaagatggcagggtgttgggaataatttgagaaatct5040gagctactggaaatgactgagaatcagatataaaggcagtcctggtggtccgttctggct5100gccgttgctgtgtaacgaatctgccaaaacttagtggcttgaaacaacaaagaacatttt5160attatctctcattgtttctgtgggttaggaatttgtgagagccgtgctgggcagttttcg5220tgcggctgtctcgtggttgcacctacatagttgctagagctacagtagctggggactgag5280cagctagggattggcaggctatctctttttttcatgtagtctcatgaagatttctttatg5340tggtttcaatgtgtgggctggtttggatttccttatagcatggtggcctcagttggattg5400ctgttttgtgatccttttcatccctccttgtcctgtccccagacaaccactgatctactt5460tctgt