2026艾滋病检测专题学习

艾滋病检测技术HIV（humanimmunodeficiencyvirus）人类免疫缺陷病毒

（艾滋病病毒）反转录病毒科慢病毒属正链RNA病毒，9749bp球形，直径约100nm样品的采集和处理HIV抗体抗原检测HIV核酸检测CD4+T淋巴细胞检测病毒分离培养主要内容HIV标志物及其动态变化示意图抗gp120抗gp41抗p24CD4RNAp24艾滋病实验室检测内容样品的采集和处理HIV抗体抗原检测HIV核酸检测病毒分离培养CD4+T

淋巴细胞检测主要内容一、样品的采集样品HIV抗体检测：全血、血清、血浆、口腔黏膜渗出液、尿液以及干血斑（DBS）HIV抗原检测：全血、血清、血浆、病毒培养上清液CD4+和CD8+T淋巴细胞测定：抗凝全血病毒载量、基因型耐药检测：血浆、干血斑HIV核酸的定性与定量检测、基因型检测、HIV-1分离培养：全血、淋巴细胞富集液、外周血淋巴细胞（PBMC）及干血斑样品的采集和处理（第一章）1、采样安全性2、抗凝剂的选择：CD4+T淋巴细胞测定：EDTA钠盐或钾盐、肝素钠、枸橼酸钠；HIV病毒分离、核酸检测：EDTA钠盐或钾盐、枸橼酸钠（不用肝素钠）。样品的采集和处理（规范第一章）一、样品采集注意事项二、样品的保存抗体抗原>1周-20℃以下，1周内2-8℃保存核酸

2-4小时送达实验室，长期:-70℃（血浆）CD4+T淋巴细胞室温保存，24小时完成检测血清/血浆，带盖试管，有明显的标记，标明姓名；抗体检测样品冷藏条件下运送，CD4+T淋巴细胞样品、DBS和尿液样品18-25℃室温运送；病毒载量血浆冻存样品-20℃以下运输。每份样品附有送检单，与样品分开放；避免用玻璃容器三、样品的运送感染性的材料，必须在有处理感染性材料能力的实验室由经过培训的工作人员佩戴适当防护设备，在生物安全柜中打开；核对送检单信息，核对样本容器有无破损等；样本量：抗体检测，血清/血浆>1ml，CD4细胞、载量检测（2管）：抗凝全血5ml/管检查样品的状况：是否溶血等四、样品的接收样品的采集和处理HIV抗体抗原检测（第二章）HIV核酸检测病毒分离培养CD4+T

淋巴细胞检测主要内容HIV抗体抗原检测目的抗体检测的意义：诊断、血液筛查和监测等抗原抗体检测的意义：抗体窗口期筛查。抗原检测的意义：。HIV分离培养，病毒复制状况的监测。主要筛查检测方法酶联免疫吸附试验（ELISA）化学发光法或电化学发光法或免疫荧光试验（CLIA/ECLA/IFA)快速检测（RT）及其它检测酶联免疫试验(ELISA)最早用于检测血清中HIV抗体的有效筛检方法；很高的敏感性和特异性；HIV抗体检测试剂根据其抗原的来源和检测方式可分为四代；根据检测方法，可分成四类,间接法、双抗原夹心法、竞争法和捕获法。ELISA四代试剂比较试剂标记物窗口期优点缺点第一代全病毒裂解抗原6-8周灵敏度高，可检出各种抗体制备麻烦，成本高，假阳性第二代重组或合成多肽抗原4-5周可消除一定的假阳性，成本低，安全，敏感性特异性较高仍有一定的假阳性第三代**重组或合成多肽3周可检测所有不同种类的抗体，增加了试剂的敏感性和特异性不同厂家试剂敏感性、特异性差异大第四代重组或多肽抗原+重组抗体2周同时检测HIV抗原抗体，缩短窗口期抗原检测敏感性低于单独抗原试剂ELISA注意事项及质量控制每次实验包括非试剂盒组份的外部质控品，质控品定值必须为弱阳性，并采用质控图进行监控。每次实验包括足够数量的试剂盒自带的内部质控品每次实验必须保留原始记录杜绝肉眼判读结果，保证cutoff值计算正确严格按照说明书操作，保证孵育时间和反应温度化学发光免疫试剂原理：化学发光免疫测定技术是酶免疫测定的一种，最后一步酶反应所用底物为发光剂，以发光检测仪测定发光反应发出的光的强弱定量。检测标本：血液。检测对象：HIV抗体抗原。比传统ELISA灵敏度高。需专门的发光检测仪，成本高，检测费用高于ELISA。室温完成，无需特殊仪器简便快速高敏感性高特异性门诊急诊检测VCT及检测点快速检测技术（特点）快速检测技术（优点）试剂稳定，室温长期保存；可目测结果，无需仪器，可操作性好，人员要求不高，适合在各级实验室使用；大部分为一步法，短时间(15-60分钟)内出结果；适用于应急检测和个体检测；胶体金（胶体硒）法干式荧光法

荧光免疫层析快速检测方法（1）胶体金法原理：采用双抗原夹心法免疫测定原理，使用纯化HIV-1/2基因重组抗原，分别固定于硝酸纤维膜上，作为检测线，并且用这些抗原标记胶体金。当待检样本中存在HIV抗体时，先和金标记抗原结合，由于层析作用向前移动，当遇到膜上固定的抗原时，形成Ag-Ab-Ag-AU复合物而富集在包被线上，形成一条或二条红色线，是阳性结果。反之，若标本中不存在HIV抗体，则不会出现红线，是阴性结果。无论样本中是否含有HIV抗体，在质控线区域都会形成另一条红色线。

T-检测线C-质控线1.准备试剂与相关耗材2.每个样本检测用一片试剂，标上相应样本编号.

3.按说明书加入血液或尿液或口腔黏膜渗出液4.按说明书加入稀释液

（全血）5.按说明书规定时间读取结果

6.读取和记录检测结果.

阳性反应：在质控线(C)和反应线(T)均显示红线。阴性反应：只在质控线出现红线，反应线没有红线。无效：在质控线没有出现红线，说明检测无效，需要重新检测。CT胶体硒法检测原理：利用免疫层析原理定性检测血样中HIV-1/2抗体。样本加入反应条，迁移通过结合物包被处，与硒胶体-抗原结合物混合重组结合，此混合物继续迁移通过固相包被的合成肽和重组抗原的检测窗口。若样本中含有HIV-1/2抗体，抗体将会与硒胶体-抗原结合，并在检测窗口处被固相包被的合成肽和重组抗原所捕获，形成一条红线。若样本中不含有HIV-1/2抗体，硒胶体-抗原结合物将会通过检测窗口而不与固相合成肽和重组抗原结合，则没有形成一条红线。1.准备试剂，室温平衡15分钟。2.标上相应样本编号3.撕开保护膜4.加入50ul全血、血浆或血清到加样窗中5.如是全血样本，加上1滴缓冲液（血清或血浆样本则不必）

6.按说明书规定时间读取结果，记录结果。结果判断阳性反应：在质控窗和反应窗均显示红线。阴性反应：只在质控窗出现红线，反应窗没有红线。无效：在质控窗没有出现红线，说明检测无效，需要重新检测。快速检测法的优先使用技术角度需要考虑：快速得到结果、免去试剂和样本的冷链运输环节、小空间实验室的成本效益、检测的简单性等。优先使用包括：应急、门诊急诊，如VCT、母婴传播、临床评估、农村血检、术前检测、紧急事件等。HIV快速检测的局限性一般不用于血液筛查有一定的假阳性反应窗口期问题：有一定的假阴性反应（尤其暴露时间<3个月）HIV抗体快速检测具有快速优势，但是“快速”并不意味着对早期感染者的快速诊断，因为HIV感染后产生抗体应答需要一段时间，存在窗口期（即从暴露至最早检测出的时间），即使采用分子生物学试验，也有1～2周的窗口期。尿液检测试剂优点采集处理费用低，较血液安全；HIV抗体在尿中稳定；尿液中IgG与血液相当。尿液中存在抗体而无活的病毒，针对检测过程和检测操作人员相对安全。目前已有商品化尿液自我检测试剂。对于已接受抗病毒治疗的感染者，尿液检测存在一定假阴性，不建议使用。缺点精确性低于血液。阳性需作血清学检测。尿检阳性不能作为合法报告，须经血清学检测证实。价格相对较昂贵。关于试剂选择－－国家要求必须是经国家食品药品监督管理局注册批准在有效期内的试剂推荐使用临床质量评估敏感性和特异性高的试剂国家艾滋病预防与控制中心参比实验室每年对HIV抗体初筛诊断试剂进行临床评估，定期公布试剂评估结果试剂质量查询：2022年全国HIV抗体诊断试剂临床质量评估报告筛查无反应，复检两次无反应－－根据选用试剂出具“阴性”报告复检有反应－－报告“待确定”（根据选用试剂的检测内容确定“抗原待确定”或者“抗体待确定”或者“抗原抗体待确定”）

（1）不能出阳性报告。（2）同时尽快进行以下处理：进行“补充试验”，重新采血，两份血和纸质版送检单一并送辖区内区疾控中心检测（确证实验室）或核酸检测；做检测后咨询和初筛阳性告知（注意告知技巧）。

筛查检测结果的报告和处理抗体筛查试验的局限性有反应结果需用复查以及补充试验。无反应结果有时不能排除HIV感染。(1)在感染早期，血清阳转前存在“窗口期”，在感染晚期，某些抗体可能检测不到（如p24抗体）。(2)反应中抗体过量，抗原抗体比例不合适而不能形成特定结构，出现凝集抑制。HIV-Ab的确证实验免疫印迹（WesternBlot,WB

）**条带/线性免疫试验WB原理HIV抗体WB实验的阳性判断标准

1

3

2

4GP160GP120

P66

P55

P51

GP41

P31

P24

P17

血清对照

P39

HIV-2特异带强阳性对照弱阳性对照阴性对照阳性：符合试剂盒提供的阳性判定标准。阴性：无HIV特性条带不确定：出现HIV特异抗体带，但带型不足以确认阳性的。对处于临界阳性带型的判定较为谨慎，需结合条带反应强度、病人的接触史等进行判定，其结果报告可能会是“HIV-1抗体阳性”，或“HIV抗体不确定”。WB结果判断HIV抗体不确定产生的原因解决办法：详尽的流行病学资料、随访检测HIV早期感染，可能仅出现部分条带。其他疾病非特异反应，如高丙球蛋白血症、某些病毒性疾病和寄生虫感染、自身免疫性疾病等可引起该现象。少数晚期艾滋病患者。特殊体质，特殊生理，如怀孕。试剂的原因。阴性结果不能排除感染，包括：窗口期和感染晚期目前通用的检测方法检测结果只表示感染，并不能确定具体感染时间。不能诊断<18月龄婴儿的母婴垂直感染。HIV抗体不确定”结果处理比较复杂。HIV抗体检测局限性抗体确证检测报告单阳性阴性不确定P24抗原检测的方法学原理：抗体夹心法试剂：ELISA,酶联荧光分析法，电化学发光法样本：血清、血浆、全血或病毒培养上清液P24抗原的定性检测P24抗原的定量检测补充试验：中和试验P24抗原检测存在的问题HIV-1P24抗原检测，有反应结果必须经中和试验确证以后才能判断阳性或阴性。抗原阳性仅作为HIV感染的辅助诊断依据。抗原阴性结果不能排除HIV感染。样品的采集和处理HIV抗体抗原检测HIV-1核酸检测（第三章）病毒分离培养CD4+T

淋巴细胞检测主要内容核酸检测的意义

感染诊断补充试验：对筛查试验有反应个体急性期诊断或极晚期感染暴露前后预防用药个体的定期检测HIV-1暴露婴儿感染早期诊断血液筛查抗病毒治疗效果监测定性定量集合定性RNADNARNADNADNA检测主要是检测全血、干血斑或组织细胞中的前病毒DNA或总核酸。HIV-1核酸检测即时检测核酸检测结果报告定性检测：核酸阳性报告“有反应”或“检出”，阴性报告“无反应”或“未检出”。核酸定性检测值低于最低检测限的结果，不能排除HIV-1感染，特别是对有高危行为、暴露前或暴露后预防用药的个体，需根据流行病学史、临床病史和实验室相关指标进行综合判断。定量检测：根据试剂盒说明书判定结果。检测结果报告在定量范围内“HIV-1RNA检出，（检测值）”高于定量上限报告“HIV-1RNA检出，定量结果高于定量上限高于检测限但低于定量检测下限“HIV-1RNA检出，低于定量下限”低于检测限“HIV-1RNA未检出”送检单位

xxxx送检日期

xxx样品类型

xxx人群

xxx

姓名

xxx

年龄xx

性别

xx职业

xx

国籍xx

民族

xx婚姻状况

xx文化程度

xx身份证号

xxxxxxxxxxxxx

联系电话

xxxxx

现住址

xxx

户籍地址

xxx

检测项目检测结果单位最低检测下限日期HIV-RNA检测（第1次）4.60E+04Copies/ml2.00E+01

xxxHIV-RNA检测（第2次）4.23E+04Copies/ml2.00E+01

xxx检测者

复核者

签发者

报告日期

xxx检测单位（公章）备注HIV-1核酸检测报告编号:4.6*1044.60E+04=4.60*104=46000CPs/ml样品的采集和处理HIV抗体抗原检测HIV核酸检测病毒分离培养CD4+T

淋巴细胞检测（第六章）主要内容CD4细胞计数与艾滋病临床过程2-6weeksmeanof10yearsAsymptomaticphaseFlu-likeDiseaseSymptom-aticphaseAIDS10005002000CD4Tcells/mlInfectionSeroconversionDeathCD4TcelldepletionHAARTCD4T淋巴细胞检测的意义HIV感染免疫状态和临床分期机会性感染的风险评估抗病毒治疗适应症选择及疗效评价CD4+T细胞计数的方法非FCM技术FCM技术-自动化方法-可靠性高(变异系数低)精密度、准确度和可重复性高高通量金标准技术优点-设备昂贵-试剂昂贵-需要熟练技术人员操作缺点-简单-低廉优点-低通量-难于质控缺点FCM：FlowCytometer

流式细胞仪

流式细胞仪(FlowCytometer，FCM)是一项集激光技术、电子物理技术，光电测量技术、计算机技术、细胞荧光化学技术以及单克隆抗体技术为一体的高科技仪器。概括起来讲，流式细胞技术就是对处在