TYALAS003-2026 滇池金线鲃种质标准

Q/LB.□XXXXX-XXXX目次TOC\o"1-1"\h\t"标准文件_一级条标题,2,标准文件_二级条标题,3,标准文件_附录一级条标题,2,标准文件_附录二级条标题,3,"前言 II1范围 12规范性引用文件 13术语和定义 14名称与分类 14.1学名 14.2分类位置 15主要形态特征 15.1外部形态特征 15.1.1外形 15.1.2可数性状 25.1.3可量性状 25.2内部形态特征 25.2.1鳔 25.2.2鳃耙数 25.2.3下咽齿 25.2.4脊柱骨 25.2.5肌间刺 26遗传学特性 36.1细胞遗传学特性 36.1.1染色体数 36.1.2核型 36.2生化遗传学特性 47检测方法 47.1抽样 47.2性状测定 47.3外部形态的检验 47.4内部形态的检验 47.4.1直接解剖法 47.4.2X光拍照法 57.5染色体分析 57.5.1肾组织细胞制片法 57.5.2培养细胞制片法 57.6同工酶分析 57.6.1组织匀浆制备 57.6.2乳酸脱氢酶电泳分析 58检验规则与结果判定 5前言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中国科学院昆明动物研究所提出。本文件由云南省实验动物学会归口。本文件起草单位：中国科学院昆明动物研究所本文件主要起草人：王晓爱、潘晓赋、杨君兴、吕龙宝、张源伟、张飞燕、吴安丽、肖文娴、陈远超、李倩滇池金线鲃种质标准范围本标准给出了滇池金线鲃[Sinocyclocheilusgrahami(Regan,1904)]的主要形态结构特征、遗传特征及检测方法。本标准适用于滇池金线鲃的检测与鉴定。规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T18654.1养殖鱼类种质检验第1部分：检验规则GB/T18654.2养殖鱼类种质检验第2部分：抽样方法GB/T18654.3养殖鱼类种质检验第3部分：性状测定GB/T18654.12养殖鱼类种质检验第12部分：染色体组型分析GB/T18654.13养殖鱼类种质检验第13部分：同工酶电泳分析术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。名称与分类学名滇池金线鲃，Sinocyclocheilusgrahami(Regan,1904)。分类位置属脊索动物门（Chordata）,脊椎动物亚门(Vertebrate),鱼纲(Pisces),硬骨鱼亚纲(Osteichthyes),鲤形目(Cypriniformes),鲤科(Cyprinidae)，金线鲃属(Sinocyclocheilus)。主要形态特征外部形态特征外形滇池金线鲃体侧扁，活体在阳光下呈金黄色，大多数鱼体背及侧线以上具不规则的黑斑。中部稍下凹，头后背部隆起，吻端尖。口角须长于吻须，达眼后缘的垂直线。鳃孔上角位于眼上缘水平线上。背鳍外缘稍内凹，末根部分枝鳍条基部变粗硬。鳍后缘有锯齿。顶端柔软分节，起点稍后于腹鳍起点，距尾鳍基较距吻端为近。臀鳍起点靠近肛门后方，至腹鳍起点近于尾鳍基，后伸不达尾鳍基，胸鳍后伸不达腹鳍起点。腹鳍后伸不达臀鳍起点。鳞圆形，侧线鳞较大，全身被鳞，呈覆瓦状。侧线与鳃孔上角向下弯，后平直伸入尾柄正中。腹鳍基部具狭长的腋鳞。背部灰暗，腹部灰白，疏密程度个体差异较大。胸鳍、背鳍及尾鳍较黑，腹鳍和臀鳍灰白（图1）。滇池金线鲃可数性状背鳍鳍式：D.ⅳ-7。臀鳍鳍式：A.ⅲ-5。侧线鳞：5620-309-1370可量性状体长10.5-13.2cm的滇池金线鲃可量性状实测比值见表1。滇池金线鲃可量性状实测比值体长/体高体长/头长体长/尾柄长体长/尾柄高体长/腹鳍起点-臀鳍起点3.8-4.03.5-3.74.2-4.47.9-9.04.3-4.9头长/吻长头长/眼径头长/眼间距头长/吻须长头长/口角须长3.1-3.33.9-5.63.4-3.83.5-4.03.5-4.0内部形态特征鳔鳔2室，后室较前室大。鳃耙数第一鳃弓外侧鳃耙数为5-8.下咽齿下咽齿3行，齿式为2,3,4/4,3,2。脊柱骨脊椎骨36-39枚，其中，背鳍前脊椎骨数为7-9，背鳍-臀鳍间脊椎骨数为11-12，臀鳍后脊椎骨数为16-18。肌间刺肌间刺92-112枚，形态类型主要有“Ⅰ”形、“卜”形、“Y”形、一端多叉形、两端分两叉形、两端多叉形（图2），其中，简单“Ⅰ”形肌间刺占总肌间刺的比例≥35%。滇池金线鲃肌间刺遗传学特性细胞遗传学特性染色体数体细胞染色体数：2n=96。核型核型公式：22M（中着丝粒）+36SM（亚中部着丝粒）+38ST，T（亚端部，端部着丝粒）（图3，图4），臂数（NF）=154，染色体组型见图4。滇池金线鲃体细胞染色体中期分裂相滇池金线鲃体细胞染色体组型图生化遗传学特性滇池金线鲃肌肉组织乳酸脱氢酶（LDH）电泳图谱见图5，仅出现3条酶带。滇池金线鲃肌肉组织乳酸脱氢酶电泳图谱检测方法抽样按GB/T18654.2的规定执行。性状测定按GB/T18654.3的规定执行。1）基础性状测定，用丁香油进行麻醉，当鱼体活动减弱时放在铺有纱布的测量器具内进行性状测定；2）针对需要解剖和取组织样品的个体，使用过量丁香油安乐死之后进行性状测定。外部形态的检验采用直接观察和游标卡尺测量。内部形态的检验直接解剖法用锡箔纸包裹滇池金线鲃样本，折叠时头尾处留出空余空间，以免样本受损；样本置于沸水中，体重≤100g，煮5min-8min，体重＞100g，煮10min-12min，取出，吸除多余水分；样本置于解剖盘内，轻轻的翻开锡箔纸，并用镊子去掉鱼皮。由尾柄末端开始，沿肌节将肌膈中的肌间刺拔出；拔出后的肌间刺在清水中清洗干净，并用吸水纸吸去多余水分，随后按顺序贴于提前准备好的透明胶带上；待肌间刺全部拔出后，用数码相机拍照并用透明胶带封盖肌间刺，标注相应的样本号。X光拍照法使用X光成像系统进行拍照。将滇池金线鲃样本放入X光机机箱内，依照样本大小，选择不同的放大位置。根据样本大小、体型薄厚，选择相应的Kv值和µA值。进行X光相片拍摄后，调节画质等各个参数并添加标尺，将照片以对应编号保存为tif格式。当样本过大时，则将样本划分区域进行拍摄，后期同图片拼接软件进行拼接。染色体分析肾组织细胞制片法按GB/T18654.12的规定执行。培养细胞制片法细胞传至12代，传代后第三天向25cm2培养瓶中加入100µg/ml秋水仙素，每瓶25µl；2h后，0.25%胰酶-EDTA混合液消化细胞，1200rpm离心收集细胞；弃上清，加5ml0.4%KCl低渗溶液重新混悬细胞，低渗20min,加入等体积的新鲜配制的冰醋酸钾醇（1:3）溶液，不停混合，1200rpm离心2min；弃上清，震荡细胞团块，缓慢边混匀加入新鲜配置的冰醋酸钾醇（1:3），静置10min，1200rpm离心2min；弃上清，加入0.2ml新鲜配制的冰醋酸钾醇溶液，震荡混悬细胞团，直至细胞均匀分散；滴片，用吸管吸一滴细胞悬液，从约30cm处滴到玻片上，轻轻晃动玻片，使细胞铺散开，待其自然干燥；染色，用磷酸缓冲液将Giemsa染色母液按9:1稀释，配制工作液，现配现用。用支架使玻片悬空，细胞面朝上，滴入1-2ml工作染液，完全盖住细胞，并去掉气泡。染色20min，用自来水冲洗玻片，倾去染液，待玻片干燥后即可观察。同工酶分析组织匀浆制备活体解剖滇池金线鲃，取肝脏、肌肉、脑、心脏、肾、鳃、脾脏七种组织，-80℃保存备用。取30g样品，以一份试样加入3份体积的0.3%NAD液，于匀浆机中4000r/min匀浆2min，彻底粉碎组织。最后以4000r/min于4℃冷冻离心机中离心10min，取上清液分装保存于-80℃低温冰箱保存备用。乳酸脱氢酶电泳分析采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳分离同工酶，浓缩胶质量分数为5%，分离胶质量分数为6.5%，匀浆液与上样缓冲液（40%蔗糖-0.05%溴酚蓝）按