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文档简介
2017-01-30实施2017-01-30实施工3.3仅供学习工2由芸薹根肿菌Plasmodiophorabrassica侵染引起的一种土传病害,主要危害十字花科作物根部75%乙醇酒精,浓盐酸,根肿菌的主要致病生理小种病原菌株,油菜根肿病感病对照品种Westar3实验用菌株用油菜感病品种Westar或速生2号接种扩繁,方法同人工接种,接种后60天(d)从冰柜中取出储藏在-20℃下的一个油菜肿根(30g左右),置于室温下1小时(h),将解冻软化后的肿根放入粉碎搅拌机(型号JYL-C16D,功率250W)中,加入100ml的无菌去离子水(ddH₂O)搅拌粉碎(转数为18000~22000r/min),水质参照GB/T6682分析实验室用根充分粉碎后,获取的肿根粉碎搅拌混合液用8层纱布过滤,得到根肿菌休眠孢子悬浮液在50g离心5min,收集上清液(含有休眠孢子),再从上清液中取样1ml稀释10倍,用医用血球计数板检并置入4℃冰箱中保存备用;人工接种前用ddH₂O将休眠孢子悬浮液的浓度调配到所人工接种需要的供接种用的油菜种子需先用75%(v/v)乙醇消毒30秒(s)后用无菌去离子水(ddH₂O)震荡漂设置气候箱条件参数:温度为24℃(光照)/18℃(黑暗),湿度为60%~80%,光周期为16h光照/8h4数设置:温度为24℃(光照)/18℃(黑暗),湿度为75%~85%,光周期为16h光照/8h黑暗,光照强度为15000~20000Lux。油菜幼苗接种后2w内每隔1天(d)在托盘中浇入酸水(pH接种后6w调查病害发病,以油菜根肿病为害症状病害分级(0-3级)计算病情指数(diseaseindex,缩写为DI),计算公式(1)如下。i——病级数(0~n);——0<高抗HR≤5;——5<抗病R≤10;——10<中抗MR≤20;——20<中感MS≤30;——30<感病S≤50;——50<高感HS≤100。扩繁后于零下20℃冰柜中苌期保存,每间隔5年(y)用感病品种Westar1定期繁殖。参照SN/T26325根部没有附着根肿。1级根部有细小肿瘤,根肿只附着在侧根上,数量占根系全部的1-25%。根部有中等肿瘤,主根上有根肿附着,侧根上根肿数量占根系全部25%以上。根部有异常大肿瘤,主根上有根肿附着,根肿数量占50%以上的根系。6病情指数的数值范围5≥病情指数>0高抗HighlyResistant(HR)10≥病情指数>5抗病Resistant(R)20≥病情指数>10中抗ModeratelyResistant(MR)30≥病情指数>20中感ModeratelySusceptible(MS)50≥病情指数>30感病Susceptible(S)病情指数>50高感Highl
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