CN116064746B 用于核酸扩增的微球制剂、扩增方法及在联合检测中的应用 （上海伯杰医疗科技股份有限公司）

22.根据权利要求1所述的微球制剂，其特征在于，所述微球制剂包括M_MLV逆转录酶5.根据权利要求4所述的微球制剂，其特征在于，每克第二微球中含有PEG960~6.权利要求1~5任一项所述的微球制剂在RP所述冻干程序为梯度升温冻干干燥方法，依次包括预冻步骤、主干9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述主干燥步骤的温度为_27~_153所述微球制剂包括权利要求1~5任一项所述微球制16.根据权利要求15所述的应用，其特征在于，所述EXO酶选自外切酶为核酸外切酶17.根据权利要求14所述的应用，其特微球制剂中还包括EXO酶0.4613~20.根据权利要求19所述的应用，其特征在于，每克微球制剂中包括EXO酶0.6579~4[0012]DNA聚合酶460.53～464.19μg，每种引物0.013nmol，单链结合蛋白10.53~5[0014]在可选实施方式中，所述重组酶选自T4UvsX蛋白、T6UvsX蛋白或Rb69UvsX蛋的大片段、枯草芽孢杆菌DNA聚合酶I大片段、大肠杆菌DNA聚合酶I大片段或T4噬菌体微球制剂包括前述实施方式任一项所述微球制640～100nmol/L，Cas13蛋白40～100nmol/L7述微球制剂包括由扩增反应所需的混合试剂经冻干得到的反应微球，每克反应微球中含[0061]DNA聚合酶460.53～464.19μg，每种引物0.013nmol，单链结合蛋白10.53~[0063]在可选实施方式中，所述重组酶选自T4UvsX蛋白、T6UvsX蛋白或Rb69UvsX蛋的大片段、枯草芽孢杆菌DNA聚合酶I大片段、大肠杆菌DNA聚合酶I大片段或T4噬菌体8微球制剂包括前述实施方式任一项所述微球制40～100nmol/L，Cas13蛋白40～100nmol/L9的反应微球，左侧扩增完成后的产物，直接转移进右侧CRISPR反应微球包装管即可进行[0111]本实施例提供了用于呼吸道合胞分型检测的RPA冻干反应微球，每克反应微球中[0115]其中RSV_F与RSV_R以及RSV_P组合使用能够特异性检出呼吸道合胞A型；RSV_F与[0120]经数字PCR定量的呼吸道合胞a/b型口咽拭子样本(样本来源：由上海伯鉴医学检验实验室提供)稀释至1×104copies/mL、5×103copies/mL、5×102copies/mL、2.5×质量体积比为7.35％的PEG(35K)水溶液，所述激活剂为醋酸镁水溶液，醋酸镁浓度为[0128]结论：双重体系微球能够检出不[0130]本实施例与实施例1的区别仅在于，本实施例还使用冻干制备方法制备了复溶微[0131]经数字PCR定量的呼吸道合胞a/b型口咽拭子样本(样本来源：由上海伯鉴医学检[0133]结论：双重体系微球能够[0135]本实施例提供了用于甲流病毒和乙流病毒检测的RPA_CRISPR冻干微球，包括RPA[0140]其中IFA_F与IFA_R组合使用能够特异性扩增出甲型流感病毒靶标序列，IFB_F与Buffer3.1[0149](1)事先将反应微球预分装至反应管中，RPA反应管中每孔1个RPA反应微球以及1外加入复溶剂30μL，待测样本的稀释浓度为1×104copies/mL、5×103copies/mL、5×4copies/mL3copies/mL2copies/mL2copies/mL2copies/mL[0162]结论：双重甲流病毒和乙流病毒RPA_CRI[0164]将实施例3提供的用于甲流病毒和乙流病毒检测的RPA_CRISPR冻干微球分别常温[0165]样本制备：经数字PCR定量的甲流病毒和乙流病毒样本稀释至最低检测限[0