达肝素钠注射液标准H20000235

达肝素钠注射液DalteparinSodiumInjectionDaGansunaZhusheYe本品为低分子肝素钠的灭菌水溶液，其抗Xa因子活性应为标示量的90.0%～110.0%，抗Xa因子与抗IIa因子活性比应为1.9～3.2。【性状】本品为无色或淡黄色的澄明液体。【鉴别】本品显钠盐的鉴别反应(中国药典2000年版二部附录Ⅲ)。【检查】pH应为5.0～7.5(中国药典2000年版二部附录VIH)。溶液的澄清度取本品，与Ⅰ号浊度液(中国药典2000年版二部附录IXB)比较，不得更浓。吸收度取本品，以0.9%氯化钠溶液为空白对照，照分光光度法(中国药典2000年版二部附录IVA)测定，在405nm波长处，其吸收度不得大于0.20(2500IU/0.2ml)0.4(5000IU/0.2ml，7500IU/0.3ml)。分子量与分子量分布照多糖的分子量与分子量分布测定法(中国药典2000年版二部附录VH)测定。对照品溶液的制备精密称取低分子肝素分子量测定用对照品(EPCRS)适量，用水制成每ml含10mg的溶液。测定法取本品，精密量取0.2ml，加流动相至1.0ml作为供试品溶液；以TSKG3000SW(300mm×7.5mm)或相应的柱为色谱柱；以2.84%硫酸钠溶液(pH5.0)为流动相；流速为0.5ml/min;柱温为35℃；紫外检测器和示差折光检测器以先后次序串联连接于柱子的出口，必须准确测量两个检测器的时间延滞以使两色谱图对应，检测波长为234nm。取对照品溶液25μl，注入液相色谱仪，记录紫外和示差色谱图，校正保留时间应为示差检测器的时间，由校正因子f计算示差色谱图上每个时间点的分子量Mi，计算公式如下：r=ΣRI/ΣUV234（有效峰面积）f＝Mna/r（Mna为对照品的分子量）Mi=f×RIi/UV234i取本品25μl注入液相色谱仪，记录示差色谱图（保证主峰和溶剂峰能彻底洗脱），分子量计算如下：Mw＝Σ（RiMi）/ΣRIi式中：RIi洗脱的Ⅰ级分的物质量即示差色谱图的峰高Mii级分的分子量，由校正系统得出采用GPC专用软件，得归一化色谱图、微分、积分分子量分布图、片段数据（Slicedata）和各种平均分子量。其数均分子量应为4000～6000，重均分子量应为5000～7000，峰位分子量应为3500～5500，分子量大于8000的级分不得大于30%，小于3000的级分不得大于17%。装量取供试品5支，分别将内容物全部倾出至干燥小烧杯，精密称定。每支单剂量注射针剂的装量等于可推出液体的质量除以密度乘以活性（抗Xa因子，IU/ml），应为2000～3000IU（2500IU/0.2ml，密度20℃：1.04g/cm3），4000～6000IU（5000IU/0.2ml，密度20℃：1.09g/cm3），6700～9100IU（7500IU/0.3ml，密度20℃：1.09g/cm3）。无菌取本品，依法检查(中国药典2000年版二部附录XIH)，应符合规定。细菌内毒素取本品，照细菌内毒素检查法(中国药典2000年版二部附录XIE)检查，含内毒素应小于25EU/10000IU。【效价测定】抗Xa因子活性的测定本法为体外生物测定，即在体外通过抗凝血酶（ATⅢ）与LMMH活性测定用标准品（WHO标准品或国家标准品），比较以测定供试品加速抑制Xa因子（FXa）的活性。试剂及溶液配制LMMH标准品及供试品溶液的配制与稀释：以1%牛血清白蛋白Tris-NaCL缓冲液（pH7.4），简称tris（pH7.4）为溶剂，配制并稀释S和T的4个不同浓度的溶液，该浓度应在log剂量-反应的直线范围内，一般为0.025lu/ml-0.2lu/ml。抗凝血酶（ATⅢ）溶液：以上述相同溶剂配ATⅢ1IU/ml溶液。发色底物s-2765溶液：以tris-EDTA缓冲液（pH8.4）为溶剂配制s-2765（N-a-Z-D-Ary-Gly-Arg-pNA，2HCL）0.003M的溶液，临用前稀释至0.0005M。Xa因子（FXa）溶液：以上述tris（pH7.4）缓冲液为溶剂，配制FXa溶液，调试其浓度，使之在用生理盐水代替LMMH的抗Xa因子实验中，λ405nm处的吸收值在0.6～0.7。步骤：取16支小管，分别标记T1、T2、T3、T4各2支为供试品管，及S1、S2、S3、S4各2支为标准品管。每管分别加入4种浓度的供试品（T）或标准品（S）稀释液50μl，及ATIII溶液50µl，混合后但不得产生气泡。小管按顺序S1、S2、S3、S4、T1、T2、T3、T4、S1、S2、S3、S4、T1、T2、T3、T4排列，37℃保温1min。加FXa溶液100μl/管，37℃保温1min，加s-2765溶液250μl。37℃准确保温4min后，加375μl/管冰醋酸终止反应。用1cm光程的半微量比色池，以tris（pH7.4）为空白，λ405nm处测每管吸收度（Abs）。在16支管的开头和结尾另设空白管，同以上步骤以tris（pH7.4）代替LMMH，这二管的Abs不得有很大不同。以Abs为反应值，按量反应平行线原理实验设计4×4法，随机或随机区组统计计算，实验可靠性测验通过者，计算抗Fxa活性PT，平均可信限率FL%。抗IIa因子活性的测定本法为体外生物测定，即在体外通过抗凝血酶（ATⅢ）与LMMH标准品（WHO标准品或国家标准品）比较以测定供试品加速抑制IIa因子（FIIa）的活性。试剂及溶液配制LMMH标准品（S）及供试品（T）溶液的配制与稀释：与抗FXa相同，以缓冲液（pH7.4）配制并稀释S和T的4个不同浓度的溶液。S和T的浓度范围为0.015IU/ml-0.075IU/ml。ATⅢ溶液：配制与前相同，浓度为0.5IU/ml。凝血酶溶液：以缓冲液（pH7.4）为溶剂，溶解稀释至5IU/ml溶液。s-2238发色底物溶液：与S-2765溶液的配制相同，临用前稀释至0.0005M。本品为H-D-phe-pip-Arg-pNA，2HCL。步骤：同前，取16支小管……，每管加0.5IU/mlATⅢ溶液50μl及50μl不同浓度的S或T，小管排列顺序同前。37℃保温1min后，加凝血酶100μl/管。37℃保温1min，加S-2238溶液250μl/管。37℃准确保温4min后，加375μl/管冰醋酸终止反应，λ405nm处测Abs。同前统计计算，实验可靠性测验通过者，计算抗FIIa活性PT，平均可信限率FL%。【类别】抗凝药【规格】（1）25