象甲科仓储害虫分子鉴别技术规程编制说明

宜宾市标准化促进会团体标准标准起草工作组二〇二二年六月———一、标准制定任务的来源和目的鞘翅目Coleoptera象甲科Curculionidae仓储害虫是一类危害严重的初期性害虫，它们前期会蛀噬粮食，继而引起次生性害虫危害和霉变发生，其繁殖速度快、耐饥力强，一对象甲一年可繁殖80万头以上的害虫，防控难度大。该科包括阔鼻谷象Caulophilusoryzae(Gyllenhal)、罗望子象Sitophiluslinearis(Herbst)、谷象Sitophilusgranaries(Linnaeus)）、米象Sitophilusoryzae(Linnaeus)和玉米象Sitophiluszeamais（Motschulsky），它们成虫形态非常相似，传统方法很难鉴别，且其卵及幼虫均藏匿在粮粒之中，具有很强的隐匿性，成虫活动速度快，难于捕捉，虫口密度低的时候粮堆中更容易发现其害虫碎片。基于此，对此类害虫的早发现及高效、精准识别，是实现虫害早期预警及有效防控的前提和基础。但传统形态识别技术以成虫形态为依据，需要严格的专业知识学习培训，效率不高，同时也很难实现对未成熟虫态（卵、幼虫及蛹）及残损样品的鉴别。现代分子技术的发展，尤其是基于COI基因的DNA条形码分子鉴别技术的出现和完善，为物种准确快速鉴别开辟了新方法，同时从基因水平反应物种的进化关系，提高物种鉴别效率、发现新种和隐存种等方面都具有重要应用价值。为解决仓储象甲害虫监测预警及防控中的识别问题，通过对需求调研和对仓储象甲害虫标准化基因DNA条形码分子技术的研究，宜宾市标准化促进会提出并制定了《象甲科仓储害虫分子鉴别技术规程》。二、标准起草过程根据对标准起草的相关要求，组成了《象甲科仓储害虫分子鉴别技术规程》标准起草小组。起草小组前期对多地区储粮虫害情况进行调研，分析不同地区不同气候害虫种类。了解象甲类害虫生存适宜条件和象甲类储粮害虫现状，对国内外象甲储粮害虫种类以及生存特点进行分析对比，确定象甲类害虫在储粮中的高发性和强害性，并针对象甲储粮害虫的鉴别困难性提出标准起草的进一步要求，为下一步《象甲科仓储害虫分子鉴别技术规程》的起草提供了坚实的基础和技术导向。起草小组在前期调研资料和产品检测报告综合分析的基础上，着手起草了《象甲科仓储害虫分子鉴别技术规程》（征求意见稿）。相关人员及专家对起草小组提交的标准征求意见稿进行充分研究讨论，根据实际检验检测结果的准确性以及检测流程的简洁和高效性进行评估，在对征求意见稿进行修改完善的基础上，最终完成标准的编制工作，并由起草小组编写地方标准编制说明。三、标准制定依据1）《中华人民共和国标准化法》2）《国家标准化管理委员会民政部关于印发<团体标准管理规定>的通知》3）《四川省标准化监督管理条例》4）《四川省地方标准管理办法》5）《宜宾市标准化促进会团体标准管理办法》4）GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法。四、标准框架和基本内容标准编制遵循“实事求是、科学合理、公正客观、标准统一”的原则，着力强调《象甲科仓储害虫分子鉴别技术规程》的科学性、先进性和适用性。（一）标准框架本标准共包括6章，分别为范围、主要技术内容、工作原理、仪器设备及试剂、DNA条形码分子鉴定、结果判断。（二）标准范围本标准适用于单头仓储象甲害虫DNA分子鉴别。（三）基本内容1.仪器设备及试剂规定了象甲害虫DNA分子鉴定的仪器设备和试剂用量规格的要求。2.基因组DNA的提取以及质量鉴定规定了象甲害虫基因组DNA分子提取的操作要求，以及象甲害虫基因组DNA提取质量的检测方法。3.条形码COI基因的扩增及检测规定了仓储象甲条形码COI基因扩增使用引物对，从PCR反应体系、扩增条件、产物检测三个方面对条形码COI基因的扩增进行要求。4.COI基因序列的测定及序列处理要求对PCR反应产物进行纯化并委托DNA测序公司双向测序以确保测序结果的可靠性。并要求对测序质量进行评估，以Q值作为依据除去测序结果两端低质量序列。五、本标准与现行法律法规和上级标准的关系本标准编制过程中，主要遵循GB/T1.1标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则，并按照社会工作有关的法律法规和政策文件的规定以及结合象甲类害虫DNA鉴别实际情况制定，编制符合国家对标准结构、内容的要求。目前尚无上级相关标准。六、重大分歧意见的处理经过和依据本标准的编写过程无重大分歧意见产生。七、贯彻标准的要求和措施建议本标准一经发布，应及时组织生产主体和相关人员进行标准培训，并通过编制标准实施指南、制作宣传单页、召开现场交流会等多种形式交流和推广标准实施经验，扩大标准实施覆盖面。八、废止现行有关标准的建议本标准为首次发布的标准。九