XXXXXX初始污染菌检验方法适用性试验方案

XXXXXX初始污染菌检验方法适用性试验方案1.人员与职责1.1确认参与人员本次确认工作小组的成员如下：确认工作小组职责范围成员岗位组长

组员

组员

1.2职责说明人员职责分工确认工作小组组长1.负责安排人员起草验证方案2.负责安排与协调验证工作的实施3.对验证中出现的变更、偏差提出初步处理意见4.负责分析评价验证数据5.负责安排人员撰写验证报告6.负责验证方案及报告的审批组员1.在组长的指导下按照验证方案实施试验工作2.负责验证中所需资源（水、电、汽等）的供给3.负责验证中所有仪器仪表、衡器的校验及其文件管理4.负责收集整理验证过程中产生的数据记录并汇总至组长5.负责将验证中出现的变更、偏差及时报告给组长6.进行验证中出现的异常情况（如变更、偏差）的调查处理

2.概述本公司生产的XXXXXX为无菌使用产品，其初始污染菌数量的多少直接反映出车间环境卫生的清洁度和人员洁净作业的有效性，另外产品上初始污染菌的负载对灭菌过程有着直接的关系，生物负载过大，灭菌压力大，最后可能导致灭菌失效，影响产品的安全、有效。因此，为保证灭菌过程的有效性，需控制产品初始污染菌数量在规定的范围内，从而确保产品的安全、有效。正确检测出产品灭菌前的生物负载，前提是得有一个可靠的检测方法，本次验证旨在验证XXXXXX初始污染菌检测方法的适用性。

3.目的对我公司XXXXXX初始污染菌检测方法的适用性进行测试，从而确保检测结果的准确性。

4.适用范围适用于本公司生产的XXXXXX产品。

5.依据《医疗器械生产质量管理规范》GB19973.1-2023《医疗器械的灭菌微生物学方法第1部分：产品上微生物总数的测定》《中国药典》2025年版四部1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法

6.方法描述6.1仪器移液枪，生化培养箱、超净工作台、微生物限度仪、旋涡混合器6.2培养基和试剂序号名称1pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液2胰酪大豆胨琼脂培养基6.3供试液的制备取样品1件，采用无菌操作在一端的一个角将特卫强纸撕开一个小口，往小口中加入400ml的pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液，然后使缓冲液充分和产品接触，轻轻振摇3分钟后，在另一端的一个角将特卫强纸撕开一个小口，将样品中的液体倒至500ml的无菌蓝盖瓶中，作为供试液。（取3个样品平行操作制备3份供试液）6.4初始污染菌计数—薄膜过滤法取40ml供试液至含50mlpH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液的滤杯中，过滤，再用50mlpH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液冲洗，过滤后菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂平皿培养基上。倒置于生化培养箱，30～35℃培养5天。阴性对照：取40mlpH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液代替供试液，同法操作，制备一个平皿。计算：初始污染菌总数（cfu/件）=平均菌落数×10×修正系数可接受标准：阴性对照应无菌落生长，初始污染菌总数≤100cfu/件。

7.验证代表型号选择本次确认的XXXXXX产品共有6个系列，分别为A系列、B系列、C系列、D系列、E系列、F系列，每个系列各有5个型号的产品，同系列中的产品所用的材料相同，同系列不同型号的区别在于gggggggggg长度不一样，不同系列之间的产品的结构和功能相似，使用材料的材质基本相同，初始污染菌修正系数确认是确认在首次浸提的微生物的回收率，微生物的首次浸提回收率主要和产品的材质和浸提方法有关，而对于材质相同结构相似的产品，使用规定体积的浸提液浸提规定的时间，首次浸提的回收率是一样的，而在所有XXXXXX型号中，型号KKKKK长度最长，表面积最大，因此本次确认中选择型号KKKKKK作为代表型号进行确认最具有代表性。

8.验证前确认确认相关文件及验证方案应经批准，对检验方法验证中所使用的仪器仪表及验证过程中使用的计量器具的校验/检定情况进行确认，确保仪器、仪表的有效性。

9.方法验证9.1使用菌种取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的斜面培养物（不超过4代），或使用市面上有资质认证的工作菌株，用无菌接种环挑取适量菌置含有适量pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液的无菌试管中，制成适宜浓度的菌悬液。（如制备的菌悬液浓度过大，可用pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液10稀释至适宜浓度）取白色念珠菌的斜面培养物（不超过4代），或使用市面上有资质认证的工作菌株，用无菌接种环挑取适量菌置含有适量pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液的无菌试管中，制成适宜浓度的菌悬液。（如制备的菌悬液浓度过大，可用pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液10稀释至适宜浓度）取黑曲霉的斜面培养物（不超过4代），或使用市面上有资质认证的工作菌株，置含有适量0.05%聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液中，将孢子洗脱后，然后采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，制成适宜浓度的菌悬液。（如制备的菌悬液浓度过大，可用0.05%聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10稀释至适宜浓度）菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2〜8°C,可在24小时内使用。9.2初始污染菌计数方法验证—薄膜过滤法供试液制备：取样品1件，采用无菌操作在一端的一个角将特卫强纸撕开一个小口，往小口中加入400ml的pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液，然后使缓冲液充分和产品接触，轻轻振摇3分钟后，在另一端的一个角将特卫强纸撕开一个小口，将样品中的液体倒至500ml的无菌蓝盖瓶中，作为供试液1。另取1件样品，按上法同样操作，得到供试液2，将得到的供试液1和供试液2混合在1000ml的无菌蓝盖瓶中，作为验证用供试液。9.2.1试验组取40ml供试液至含50mlpH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液的滤杯中，采用薄膜过滤法，再用50mlpH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗，冲洗时，加入金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌悬液（≤100cfu）1ml至含pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液的滤杯中，过滤后将滤膜膜面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基平皿上（每种菌平行制备2个平皿），倒置于30～35℃生化培养箱培养≤3天（其中白色念珠菌、黑曲霉培养≤5天）。9.2.2菌液组取相同体积的稀释液代替供试液，按试验组操作进行。9.2.3供试品组以相同体积稀释液代替菌液，同试验组操作进行。9.2.4阴性对照组取pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液40ml代替供试液，制备2个平皿，与供试品组相同方法操作。9.2.5计算公式：9.2.6验证结果进行三次独立验证实验。将实验结果记录填写在《XXXXXX初始污染菌检验方法适用性试验记录》中。9.2.7可接受标准阴性对照组应无菌落