紫刺参选育技术规范

DB××/T××××—××××范围本文件规定了紫刺参的术语与定义以及选育过程中的环境条件、设施条件、种参蓄养、人工繁育、体色筛选和累代选育等技术方法。本文件适用于紫刺参选育。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY5052无公害食品海水养殖用水水质NY5072无公害食品渔用配合饲料安全限量SC/T2037刺参配合饲料3术语与定义紫刺参是我国本土刺参Apostichopusjaponicus（Selenka1867）中一个具特殊表观的品系，其通体紫色，外观亮丽，较普通刺参更具消费市场开发潜力。4环境条件水质稳定，水源充足，无大量淡水流入、风浪较小、无赤潮频发的开放、半开放式海域附近。通讯、交通运输方便，电力充足，海水或地下海水资源丰富，盐度稳定，有淡水水源。水质符合NY5052要求。5设施条件种参蓄养和苗种繁育宜在室内工厂化车间进行。种参蓄养单池面积5m2～25m2、幼体培育单池面积15m2～50m2为宜。池形宜为长方形，池深1.2m～1.5m为宜。幼体培育池内设置附着基，以聚乙烯波纹板、聚乙烯网片和塑料薄膜为宜。进排水系统、充气系统、控温系统及其他配套设施符合其他促熟相关要求。6种参蓄养挑选通体紫色、年龄2年～3年、体重不小于200g/头的刺参个体，移至养殖池塘中单独隔离暂养保存。自然水温降至5℃～8℃时筛选入池，入池后低温暂养不少于15d。蓄养密度为5头/m3～10头/m3。入池初期日投饵量为刺参体重的0.5%左右，之后逐渐增加至0.5%～1%，随着温度升高投喂量逐渐加至1%～3%，水温升至16℃后稳温培育。7人工繁育7.1采卵通过升温诱导产卵或阴干加升温刺激法进行人工催产。采卵密度10个/ml～20个/ml，孵化水温22℃～23℃，孵化期间保持微充气使受精卵分布均匀。7.2幼体培育在小耳幼体初期进行选优，布苗密度为0.2个/ml～0.4个/ml，选优时培育池水可加2/3，之后3d～5d逐渐将水加满，随后每日换水1次～2次，每次换水量1/3～1/2。7.3饵料要求在浮游期耳状幼体培育水体中按每日2ml/m3～4ml/m3添加单胞藻液、酵母和有益菌混合液等，有效活菌数不低于109CFU/ml。附着变态后，按NY5072要求逐步投喂人工配合饲料，附着3d～5d后可在饲料中按1:0.2～1:0.5的比例添加海泥，之后随苗种生长，配合饲料与海泥比例由1:0.5逐步增加到1:3～8。饲料质量应符合SC/T2037要求。7.4环境调控稚参培育池水保持pH7.8～8.5、温度15℃～25℃、盐度29～33，多气头均匀充气，保持溶解氧5mg/L以上。光照强度1000lux～2500lux，光照周期控制在12L：12D～14L：10D。8体色筛选8.1操作过程参苗培育期间定期记录参苗着色及生长发育情况，及时筛选淘汰发生体色分离、生长缓慢、发病、状态差的个体。8.2定期筛选3月龄时进行第一次筛选，以色度及生长为目标性状，之后每3月选择1次，选留率为50%～80%。9累代选育经育苗、养殖、性成熟后繁育子代群体，选育技术工艺与培育条件同上一代。连续选育4代以上为宜。山东水产学会团体标准《紫刺参选育技术规范》（送审稿）编制说明山东省海洋科学研究院二〇二一年十一月PAGE3山东水产学会团体标准《紫刺参选育技术规范》编制说明一、制定本标准的项目背景上世纪90年代中期开始，我国的刺参市场消费需求空间不断拓展，特别是2003年“非典”事件之后，产业发展速度和生产规模均达到前所未有的水平，现已成为国内海水养殖的主导产业之一。山东省作为我国刺参的重要原产地和第一养殖大省，近年来充分发挥海洋科技强省优势，开展了一系列刺参生产重大关键技术的研发与成果转化推广，形成了从育种、养殖、加工到市场流通较为完善的全产业链体系，生产技术水平居全国首位。2020年产参苗332.9亿头（占全国60.5%），增养殖规模119.5万亩（占全国32.8%，占全省海水养殖面积的13.73%），年产商品参9.89万吨（占全国50.3%，占全省海水养殖产量的1.92%），养殖年产值约160亿元，用仅占全省海水养殖2%的产量创造了约17%的产值。种质是养殖产业能否健康持续发展的根本，随着刺参增养殖产业的不断发展，人们对优质健康刺参苗种的需求日益强烈。2021年4月21日，农业农村部发布“十四五”期间将通过实施“五大行动”来推进水产绿色健康养殖，明确要求开展水产种业质量提升行动，持续推进水产原良种生产体系建设，提高良种供种保障能力，加大水产优良品种的推广应用力度。目前国内已相继选育出多个具有优势经济性状的刺参新品种。在选育具有独特表观的新品种领域，目前陆续形成了多刺、白色、紫色等具有市场发掘潜力的品系，其中紫刺参是我国本土刺参Apostichopusjaponicus（Selenka1867）中一个具特殊表观的品系，其通体紫色，外观亮丽，较普通刺参更具消费市场开发潜力。。目前紫刺参选种繁育产业化程度尚不足，仍基本参照普通刺参育种生产的习惯性做法，为规范性状遗传稳定的紫刺参新品系群体选育操作技术，推动紫刺参养殖产业化进程，亟需制定本标准规范生产。本标准制定由山东省海洋科学研究院提出，项目技术团队具有丰富的刺参一线生产经验和扎实的理论研究基础，目前承担着国家重点研发计划“蓝色粮仓科技创新”重点专项、山东省刺参产业创新团队建设、山东省农业良种工程等多项刺参育种相关课题，长期保有刺参“鲁海1号”、紫刺参、白刺参等优势性状刺参群体10余个，完全可保证标准的科学性、适用性和可操作性。二、制定本标准的工作简况1.任务来源根据《国务院关于印发深化标准化工作改革方案的通知》（国发【2015】13号）、山东省政府《关于开展国家标准化综合改革试点工作的实施方案》、《山东水产学会团体标准管理办法（试行）》的要求和山东水产学会《关于开展山东水产学会团体标准立项申请的通知》，标准起草小组提出申请，经审查、专家评议，于2021年8月16日获批立项。本标准制定任务由山东省海洋科学院提出，由山东水产学会归口，山东省海洋科学研究院、威海圣航水产科技有限公司、山东黄河三角洲海洋科技有限公司、威海洋德海洋生物科技有限公司共同承担起草制定工作。2.制定单位标准第一制定单位为山东省海洋科学研究院（原山东省海洋生物研究院），是我国最早进行刺参育苗及养殖技术研究的单位，现有省级刺参良种场及苗种繁育、养殖生产基地，相关设施及大型分析试验仪器配套齐全，可方便地进行不同样品间的比对。目前，已完成制定《无公害食品刺参》、《栉孔扇贝苗种》、《刺参工厂化养殖技术规程》、《刺参养殖池塘建设规范》、《刺参生态苗种培育技术规范》、《刺参池塘中间培育技术规范》、《刺参浅海网箱养殖技术规范》、《刺参-凡纳滨对虾轮养技术规范》、《刺参筏式笼养技术规范》等近40项国家、行业及地方标准，熟悉相关标准的技术内容，了解标准制定的工作程序，为标准的制定提供了良好的技术基础。此外，标准制定团队拥有我省刺参产业技术体系创新团队首席专家兼育种岗位专家、增养殖岗位专家等多名产业相关高层次人才，学科带头人同时兼任山东省渔业协会特聘专家、“胶东刺参”质量保障联盟特聘专家、省水产专家顾问团专家成员等多个学术团体的重要职务，对全省刺参产业尤其是养殖生产现状与需求有着深入了解，具备丰富的实践经验，相关科研成果已获国家及省部级各类奖项近30项。因此，本单位及标准起草人员完全能够胜任本标准的制定工作。在标准制定过程中，为规范项目组织管理，依托单位加强起草小组成员间协同配合，提高各项工作绩效，围绕标准建设的任务要求和标准制定项目的特色，制定了组织管理制度，合理划分了责任任务，强化了协同配合，充分保证了各成员间的交流畅通与资源共享，对项目的顺利实施和按期完成也起到了很好的保障支撑作用。3.协作单位威海圣航水产科技有限公司，是集刺参等海洋生物的原种保存、苗种繁育、良种选育于一体的水产种业企业，先后获评“全国现代渔业种业示范场”、“山东省海洋工程技术协同创新中心”、“山东省海上粮仓遗传育种中心”等。近年来，公司先后承担国家级科研项目3项、省级科研项目4项、市级科研项目4项，同时在生产过程中，公司利用生产经验，申请了并获得授权10项实用新型专利，3项正在受理的发明专利，1项已授权的发明专利，参与制修订国家标准2项。目前正与中国科学院海洋研究所、中国水产科学研究院、山东省海洋生物研究院等科研院所建立起了紧密的产学研协同创新关系，联合开展了保种、选育和现代分子生物学技术的研发工作。公司拥有实验室100m2，配备疾病检测仪器设备、水质分析检测设备、药残快速检测设备等实验器械，实验仪器设备完善。山东黄河三角洲海洋科技有限公司，成立于2015年10月，注册资金1000万元，至今已完成投资11000余万元。公司位于东营市河口区新户镇大义路北，马新河东侧，占地1500余亩，现有职工56人，其中高级职称2人、本科以上学历6人，从事技术研发人员12人。公司现为山东省现代农业产业技术体系刺参、贝类、虾蟹类等三个产业创新团队的示范基地，同时为中国科学院海洋研究所智能化对虾养殖示范基地、山东省水产健康养殖示范场，2019年9月上榜东营市农业产业化重点龙头企业。公司成立至今，始终秉承以科技创新驱动企业高质量发展的运营理念，先后邀请山东省海洋生物研究院李成林研究员（山东省刺参创新团队首席专家）团队、中科院海洋研究所王雷研究员团队、山东省海洋生物研究院郭文研究员（山东省贝类创新团队首席专家）团队入驻全程服务，使公司的科技创新能力不断提高。莱阳市海洋渔业有限公司，是2020年9月由原莱阳市水产养殖总公司、莱阳市水产供销公司、莱阳市海洋水产资源增殖站、莱阳市滩涂贝类养殖试验场、莱阳市水产资源冷藏厂五家独资国有企业整合改制而成，规模为国有中型企业，隶属于莱阳市城市建设投资集团，为城投集团国有独资子公司。公司现有各类管理人员百余人，是一家集海洋水产品苗种培育和销售、海洋苗种增殖放流、海水养殖、海洋滩涂管理、水产品冷藏及销售等项目于一体的综合性国有独资企业。企业拥有池塘养殖面积4000余亩，主要养殖品种：海参、中国对虾、日本对虾、三疣梭子蟹、南美白对虾等，年综合效益约为4000万元，被莱阳市政府命名为莱阳市青年科技创新行动示范基地；拥有海洋滩涂养殖面积5000余亩、苗种培育水体近3000立方，年生产能力为4亿单位；有30多年的增殖放流经验，山东水产学会烟台市水生生物资源养护分会副会长单位、烟台市渔业协会副会长单位。4.主要工作过程1、成立标准制定小组，明确主要执笔人及任务分工。2、收集刺参良种选育及苗种生产技术相关参考文献资料，包括专著、国内外公开发布论文、科研成果，结合项目组的前期育种研究成果，参考国家、行业、及其他省份地方标准，初步确定了标准需制定的技术内容，并起草了标准制定草案。3、根据标准制定草案开展紫刺参育种生产试验工作，统计分析实验数据结果，为标准的技术参数制定提供科学依据。4、在协同起草单位企业（包括胶东地区、黄三角地区）开展紫刺参良种选育，广泛征求并记录了企业对选育技术标准化工作的意见和建议，为标准内容的规定、技术参数的制定提供了支持，并对标准草案进行修改完善。5、组织科研、生产单位同行专家及相关人员共同开展调研活动，标准主要关键技术环节内容逐条进行了推敲与核实，形成征求意见稿，呈送有关科研、教学、推广、生产和管理部门的专家广泛征求意见。5.主要起草人及其工作李成林：项目主持人，负责方案制定、调研、数据采集、标准起草和修改等工作；胡炜：主要起草人，负责组织调研、试验和标准起草、修改等工作；赵斌：主要起草人，参与数据分析、标准起草、修改等工作；韩莎：主要起草人，参与开展试验研究、标准修改等工作；赵洪友：主要起草人，参与意见汇总、标准修改等工作；姚琳琳：主要起草人，参与意见汇总、标准修改等工作；尉淑辉：主要起草人，参与意见汇总、标准修改等工作；刘兆存：主要起草人，参与具体实验、标准修改等工作；宋宗诚：主要起草人，参与具体实验、标准修改等工作。三、编制本标准的原则和依据1、遵循有关方针、政策、法规和规章，按照GB/T1.1-2020标准化工作导则要求编写。主要对紫刺参选育过程中的环境设施、种参蓄养、采卵受精、幼体培育、饵料要求、水质调控、体色筛选和累代选育等技术内容进行规定。2、本标准的制定，遵循国家有关方针、政策、法规和规章，严格执行强制性国家标准，参考行业标准，充分考虑国际上通用标准。在格式上按照GB/T1.1-2020的规定进行编写，编制说明按国家技术监督局“国家标准管理办法”第三章第十六条和《农业部国家（行业）标准的计划编制、制定、和审查管理办法》第二章的基本要求编写。3、标准的文字表达力求准确、简明、易懂，结构合理、层次分明、逻辑严谨。具有可操作性，便于贯彻实施。标准中的术语、符号统一，与相关标准相协调。4、广泛听取和征求从事刺参相关研究的专家和科研人员、苗种生产企业的意见，进行广泛的调查研究和必要的试验验证工作，全面掌握目前生产实际情况。5、对获得的资料和数据进行综合研究，使数据科学化，在充分考虑可操作性的同时，做到经济合理。6、密切结合我省情况，同时参照国家、行业标准，有利于规范紫刺参良种选育的有效性和稳定性，维护育种单位和企业权益，有利于促进刺参种业产业的健康和可持续发展。四、本标准主要内容说明本标准共九部分内容，包括范围、规范性引用文件、术语和定义、环境设施、种参蓄养、人工繁育、体色筛选、累代选育等。其中，标准第五、第六部分为标准核心内容。第九部分累代选育中，规定了以连续选育4代以上为宜，包括以制种为目的的按照全国水产原良种审定委员会要求，须连续选育4代以上；不以选与新品种为目的，仅以生产紫刺参为目的的，无需连续选育四代。核心内容确定依据具体如下：1、为确定紫刺参适宜的采卵密度，分别设计了5个/ml、10个/ml、15个/ml、20个/ml、25个/ml、30个/ml不同密度组，计算各组孵化率结果如下，以不超过10-20个/ml为适宜。表1卵子的密度与孵化率的关系卵子密度（个/ml）卵子孵化率(%)566.41056.71558.42057.42544.63037.42、为确定紫刺参孵化、浮游幼体成活以及附着变态等的适宜培育水温，参照普通刺参的培育条件要求，分别设计了21℃、22℃、23℃、24℃共四个实验组，对比试验结果如下，以22℃和23℃为效果最佳。表2不同温度下刺参发育效果对比水温21℃22℃23℃24℃孵化率（%）63.895.493.864.2大耳幼体成活率（%）70.594.292.971.6樽形幼体发生率（%）16.424.622.417.8附着变态率（%）82.793.891.683.73、开展了不同PH条件下急性胁迫对紫刺参SOD等物质活性的影响实验，选用平均体重为(1.46±0．02)g的稚参，在对照组(pH8．2)、低pH处理组(pH7．3、7．5)和高pH处理组(pH8．9、9．1)养殖水体条件下，对刺参进行急性胁迫处理，研究胁迫3、6、12、24、48、72和96h对刺参体腔液中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、一氧化氮合成酶(NOS)和溶菌酶(LZM)活性的影响．结果表明：SOD活性在胁迫3～6h后逐渐上升，在6h时达到峰值，12～48h逐渐下降，96h时低pH处理组下降至对照组水平，而高pH处理组显著低于对照组(P＜0．05);CAT活性在胁迫3～12h后逐渐上升，在12h时达到峰值，24～48h逐渐下降，72～96h时低pH处理组下降至对照组水平，而高pH处理组显著低于对照组(P＜0．05);低pH处理组的NOS活性随着胁迫时间的增加变化不大，而高pH处理组在胁迫24h后大幅下降，96h时显著低于对照组(P＜0．05)；LZM活性随着胁迫时间的增加呈现逐渐下降的变化趋势，低pH处理组在胁迫72h后显著低于对照组，而高pH处理组在胁迫12h后显著低于对照组(P＜0．05)．刺参对pH胁迫有较强的适应性，pH胁迫在3～12h能够诱导刺参体内的非特异性免疫系统发挥作用，非特异性免疫酶活性在12～24h下降，免疫能力较低，病原敏感性增强图3pH急性胁迫对刺参SOD活性的影响图4pH急性胁迫对刺参CAT活性的影响图5pH急性胁迫对刺参NOS活性的影响4、为科学制定紫刺参体色性状的筛选时间点和技术参数，根据前期实验记录，系统总结分析了紫刺参显色时序与体重和体长等生长指标的关系，紫刺参稚参自日龄35d前后开始变色，首先是从背部开始着色，40—55d背部陆续着色，50—60d腹部开始着色，60—85d腹部陆续着色，此时腹部着色比背部浅，80—110d体表完全着色呈紫色，但部分个体腹部略透明，肠道可见。110d后体长和体重增长显著，体表紫色转变接近成参体色，完成变色过程，详见表3。色差仪测得背部体色平均值为(L=19.0,a=6.4,b=1.5)，腹部体色平均值为(L=27.8,a=4.9,b=1.3)，色差ΔE值≤5。表3紫刺参显色时序与体长和体重的关系日龄/d着色阶段体长/cm体重/g备注35无色<0.12<0.00735~45背部开始着色0.12~0.150.007~0.008540~55背部陆续着色0.15~0.50.0075~0.01550~60腹部开始着色0.4~0.50.0125~0.01560~85腹部陆续着色0.5~1.20.015~0.045此时腹部着色比背部浅80~110完全着紫色1.2~3.60.045~0.690d后体长增长放缓；个别个体腹部略透明,肠道可见110~140体表紫色转变接近成参3.6~4.40.6~1.5体长和体重增长显著,变色完成五、本标准与国家相关法规和强制性标准的关系本标准的制订，主要依据我国的科研和生产实际情况，目前国外尚无紫刺参良种选育技术的相关标准。在国内山东省质量技术监督局2007年11月发布实施了由山东省海洋生物研究院负责制定的《刺参苗种生产技术规程》（DB7/T703-2007），现行的相关标准包括《刺参生态苗种培育技术规范》、《刺参池塘中间培育技术规范》等，均为普通刺参的繁育技术规程，缺少针对特定品系选育的特定要求，且制定的时间也较久远，已经无法满足当前紫刺参品系的技术要求。六、重大分歧意见的处理经过和依据本标准广泛征求了紫刺参及白刺参等良种选育的研究、生产、管理单位和标准化专家的意见，没有出现重大分歧意见。如将来出现重大分歧意见，将根据我省实际情况，按照标准化的原则，协商解决分歧意见。七、预期的社会和经济效益本标准可有力保障紫刺参