注射用重组人促卵泡激素AS20000008

JX20010018注射用重组人促卵泡激素RecombinantHumanFollitropinAlfaforInjection（商品名：果纳芬—Gonal-F）本品为重组人促卵泡激素的无菌冻干品，其效价应为标示量的80-125%。【性状】本品为白色冻干粉末。【鉴别】（1）在聚合物检查项下记录的色谱图中，供试品主峰的保留时间应与对照品峰的保留时间一致。（2）在氧化α亚基检查项下记录的色谱图中，供试品主峰的保留时间应与对照品的保留时间一致。【检查】酸碱度 取本品，每支加注射用水1ml溶解，依法（中国药典2000年版二部附录VIH）检查，pH值应为6.5-7.5。溶液的澄清度与颜色取本品，每支加注射用水1ml溶解后，溶液应澄清无色。如显混浊，与2号浊度标准液（中国药典2000年版二部附录IXB）比较，不得更浓；如显色，与黄色4号标准比色液（中国药典2000年版二部附录IXA第一法）比较，不得更深。溶解时间取本品，每支加1ml注射用水溶解，溶解时间不得过60秒。水分取本品，依法（中国药典2000年版二部附录VIIIM第一法）检查，含水分不得过2%。聚合物照高效液相色谱法（中国药典2000年版二部附录VD）测定。色谱条件与系统适用性试验用TSKgelG-2000SW（30cm×7.8mmI.D.）或其它相应的色谱柱；以0.1mol/L硫酸钠—0.1mol/L磷酸盐（pH值为6.7±0.1）为流动相；流速为0.5ml/min；检测波长为215nm。测定法取本品，用水制成每1µl中含0.25IU的溶液作为供试品溶液，取供试品溶液600µl注入液相色谱议，记录色谱图，按峰面积归一化法计算，聚合物不得过3%。氧化α亚基照高效液相色谱法（中国药典2000年版二部附录VD）测定。色谱条件与系统适用性试验用VydacProteinandPeptideC18柱(25cm×4.6mmI.D.)或其它相应的色谱柱；以0.1mol/LTEAP缓冲液（取85%磷酸6.75ml，加水800ml，用三乙胺调pH值至6.0，加水至1000ml，0.45µm滤膜滤过，放置24小时后使用）为流动相A，乙腈为流动相B，0.1%三氟醋酸的乙腈溶液为流动相C，水为流动相D；流速为1ml/min；柱温为40℃；检测波长为215nm。平衡程序为：时间（min）A%B%C%D%0010000150100002501408635861400洗脱程序：时间（min）A%B%C%D%08614005672280057001000720010007386140093861400取系统适用性试验用样品与供试品同法制备，α亚基与氧化α亚基，氧化α亚基与β亚基之间的分离度均应符合规定。测定法取本品9支，用水900µl溶解作为供试品溶液，取供试品溶液300µl注入液相色谱仪，记录色谱图，按峰面积归一化法计算，氧化α亚基占α亚基与氧化α亚基总面积的百分比不得过25%。解离亚基取本品，每瓶用水50µl溶解，取此液40µl，加入2倍浓度的样品缓冲液40µl，混匀，作为供试品溶液；取供试品溶液20µl，加入2倍浓度的样品缓冲液20µl，混匀，95℃水浴加热15分钟，取此液，用样品缓冲液稀释成浓度分别为供试品浓度的16%、8%、4%、2%和1%的溶液作为对照溶液。其供试品溶液与对照溶液各20µl，依法检查（中国药典2000年版二部附录VF第五法，银染法），经电泳扫描后，以对照溶液的浓度为横坐标，相应峰面积为纵坐标，进行线性回归，由供试品中与对照迁移率相对应蛋白峰面积计算解离亚基的量，解离亚基不得过10%。无菌取本品，经滤膜滤过后，依法（中国药典2000年版二部附录XIH）检查，应符合规定。细菌内毒素取本品，依法（中国药典2000年版二部附录XIE）检查，每支含细菌内毒素不得过8EU。其他除不检查装量外，应符合注射剂项下各项有关规定（中国药典2000年版二部附录IB）。【效价测定】取本品，照生物效价测定法（附件）测定，即得。【规格】37.5IU【生产国别及生产厂】雪兰诺公司意大利药厂【复核单位】中国药品生物制品检定所

附件生物效价测定法本法为Steelman-Pohley大鼠卵巢增重法，通过比较FSH标准品与供试品对雌幼大鼠增重的程度，以决定供试品的效价。溶媒配制：实验当日称取牛血清白蛋白和氯化钠适量，用磷酸盐缓冲液（pH7.2）溶解配成含氯化钠0.9%白蛋白1mg/ml的溶液。标准品（S）溶液的配制与稀释：实验当日取FSH标准品，按标示效价，加上述溶媒配成高、中、低三种浓度的稀释液，置4℃保存，供3日内使用。供试品（T）溶液的配制与稀释：按供试品标示效价，同标准品溶液的配制方法。动物：健康雌幼大白鼠，Wistar品系，出生19~23日（相差<3日），体重36~50g（相差<10g），清洁级。检定方法：取上述动物，按体重均匀分成6组，8只/组，每日于大致相同时间分别给每组皮下注射一种浓度的S或T溶液0.5ml/只，每日一次连续3日，S与T相邻两浓度比值相等，一般不大于1：0.5，于最后一次给药24小时后，处死动物，解剖，摘取卵巢，剥离附着组织，去除输卵管，用滤纸吸干周围的液体，立刻称重（精确至0.