CN119410618A 一种饲用贝莱斯芽孢杆菌蛋白酶的突变改良方法及应用 （安徽农业大学）_第1页
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一种饲用贝莱斯芽孢杆菌蛋白酶的突变改本发明公开了贝莱斯芽孢杆菌丝氨酸蛋白代丝氨酸蛋白酶氨基酸序列中依次将量个氨基5酸性条件下保温4小时和pH2.2酸性条件下保温22.根据权利要求1所述的丝氨酸蛋白酶变体，其特征在于丝氨酸蛋白酶变体氨基酸序4.根据权利要求3所述的基因，其特征在于丝氨酸蛋白酶变体核苷酸序列如序列表中5.一种用于表达权利要求1中所述的丝氨酸蛋白酶变体的重组子，其特征在于包含权6.一种权利要求1中所述的丝氨酸蛋白酶变体的生产方法，其特征在于包括在适宜丝氨酸蛋白酶变体表达的条件下对含有编码丝氨酸蛋白酶变体基因序列的重组子进行培养，7.权利要求1中所述的丝氨酸蛋白酶变体在水解大3一种饲用贝莱斯芽孢杆菌蛋白酶的突变改良[0002]丝氨酸蛋白酶是动物饲料中常用[0003]饲料中使用的丝氨酸蛋白酶有细菌丝氨酸蛋白酶和丝氨酸蛋白酶主要来源于枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌，以中性和碱性丝氨酸蛋白酶为4高温条件下有较高的催化活度。本发明提供的丝氨酸蛋白酶变体在体外酶解仔猪饲料时，细菌丝氨酸蛋白酶，来源包括但不局限于Bacillussubtilis,B.licheniformis，酸蛋白酶变体的氨基酸序列的同源性至少达到95％。作为说明性和非限制性的本发明示5[0036]本发明提供了一种丝氨酸蛋白酶变体能够在任何适合工业化生产的温度和pH条包括在适宜丝氨酸蛋白酶变体表达的条件下对含有编码丝氨酸蛋白酶变体核苷酸序列的[0043]pET_32a载体带有一个N端的His/Thrombin/TrXA蛋白标签，同时含有一个可以选列是以pBR322质粒的编码规矩进行编码的，所以T7蛋白表达区在质粒图谱上面是反向的。6[0048]Pro1353anti：GGTGCTCGAGAGAAGATGTTTCTTCTTTTTGAGTCAGPC[0056]将胶回收后的线性质粒和蛋白酶基因片段用T4DNAligase(莫纳生物)进行连用转化子T1353转化BL21(DE3)大肠杆菌感受态，在含50ug/ml的氨苄青霉素的LB固体培养7[0101]产丝氨酸蛋白酶变体的BL28[0105]1.将实施例中的上清液分批次转移到含2mLProteinIsoN[0108]4.上述样品分别取20uL后，分别加入4uL6xSDS_PAGELoadingBuffer,煮沸放于40℃±0.2℃恒温水浴中10min终止反应，同时实验组加酪蛋白溶液1mL摇匀放于40℃静止放置10min，使用慢速定性滤纸过滤；吸取1mL滤液加碳酸钠溶液5mL和福林使用溶液9酶GAMIO_pro耐受高温能力不超过80℃以上。[0129]取不同质量的仔猪饲料溶于20ml模拟胃液中，并用2m[0133]本发明的实施例除了应用了本领域内的技术方法外，更离不开发明主旨的指

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