高二生物微生物的实验室培养2

专题二

微生物培养与应用课题一

微生物试验室培养1/231.何为培养基？不一样培养基有不一样配方，不过其基本成份都相同，都包含哪些营养成份？有何作用？请举例说明。2.无菌技术包含哪些方面？消毒和灭菌区分？惯用消毒方法有哪些？惯用灭菌方法有哪些？自主学习:

培养基和无菌技术2/23一、培养基人们按照微生物对营养物质不一样需求，配制出供其生长繁殖营养基质。固体培养基

—用于微生物分离、计数、判定液体培养基

—惯用于工业生产3/23微生物需要营养物质

不论哪种培养基，普通都含有水、碳源、和氮源、无机盐等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质

(比如生长因子即细菌生长必需，而本身不能合成化合物,如维生素、一些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压等要求。4/23消毒使用较温和物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害微生物（不包含芽孢和孢子）。灭菌使用强烈理化原因杀死物体内全部微生物，包含芽孢和孢子。二、无菌技术5/23惯用消毒方法1、煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min3、用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒4、氯气消毒水源5、紫外线消毒……二、无菌技术6/231、灼烧灭菌2、干热灭菌：160℃

-170℃下加热1-2h。3、高压蒸气灭菌：100kPa、121℃下维持15-30min。惯用灭菌方法二、无菌技术7/23（一）制备培养基

牛肉膏蛋白胨培养基1.计算2．称量3．溶化4．灭菌5．倒平板三、试验操作8/23倒平板技术9/231.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么方法来预计培养基温度？问题探讨

能够用手触摸盛有培养基锥形瓶，感觉锥形瓶温度下降到刚才不烫手时，就能够进行倒平板了。2.为何需要使锥形瓶瓶口经过火焰？

经过灼烧灭菌，预防瓶口微生物污染培养基。10/233.平板冷凝后，为何要将平板倒置？4.在倒平板过程中，假如不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为何？

平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后培养基表面湿度也比较高，将平板倒置，既能够使培养基表面水分更加好地挥发，又能够预防皿盖上水珠落入培养基，造成污染。空气中微生物可能在皿盖与皿底之间培养基上滋生，所以最好不要用这个平板培养微生物。11/23（二）纯化大肠杆菌平板划线法稀释涂布平板法惯用微生物接种方法：12/23微生物接种技术平板划线法13/23微生物接种技术稀释涂布平板法14/23问题探讨1.为何在操作第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，依然需要灼烧接种环吗？为何？

第一步灼烧是为了防止接种环上可能存在微生物污染培养物；每次划线前灼烧是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留菌种，使下一次划线时，接种环上菌种直接起源于上次划线末端，从而经过划线次数增加，使每次划线时菌种数目逐步降低，方便得到菌落。划线结束后灼烧能及时杀死接种环上残留菌种，防止细菌污染环境和感染操作者。15/232.在灼烧接种环之后，为何要等其冷却后再进行划线？以免接种环温度太高，杀死菌种。3.在作第二次以及其后划线操作时，为何总是从上一次划线末端开始划线？

划线后，线条末端细菌数目比线条起始处要少，每次从上一次划线末端开始，能使细菌数目伴随划线次数增加而逐步降低，最终能得到由单个细菌繁殖而来菌落。16/23问题探讨

涂布平板全部操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释无菌操作要求，想一想，第2步应怎样进行无菌操作？

应从操作各个细节确保“无菌”。比如，酒精灯与培养皿距离要适当、吸管头不要接触任何其它物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。17/231、暂时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保留。

2、长久保留：甘油冷冻管藏法菌种保留18/23四、课题结果评价

（一）培养基制作是否合格假如未接种培养基在恒温箱中保温1～2d后无菌落生长，说明培养基制备是成功，不然需要重新制备。（二）接种操作是否符合无菌要求假如培养基上生长菌落颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落特点，则说明接种操作是符合要求；假如培养基上出现了其它菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未到达要求，需要分析原因，再次练习。（三）是否进行了及时细致观察与统计培养12h与24h后大肠杆菌菌落大小会有显著不一样，及时观察统计同学会发觉这一点，并能观察到其它一些细微改变。这一步要求主要是培养学生良好科学态度与习惯。19/23固体培养基：菌落20/23菌落

菌落是判