CN119462904A 一种胶原蛋白微球的制备方法及其应用 （北京师范大学珠海校区）

本发明公开了一种胶原蛋白微球的制备方白B_domain氨基酸序列的N端和C端分别插入两胶原蛋白B_domain氨基酸序列中His残基的个数2B_domain为多个重复的胶原述B_domain氨基酸序列中第47和48位的TQ突变为7.如权利要求1_4任一项所述胶原蛋白或权利要求5所述的基因或权利要求6所述的质粒或宿主菌在以下任一项中的应用：将权利要求1_4任一项所述的胶原蛋白与金属离子溶液等浓度混合，在25℃搅拌4h3[0004]为此，越来越多的研究利用细菌和酵母等宿主来实现胶原蛋白的高效的异源表原仍然缺乏形成高级结构的自组装驱动力，这限制了其在药物递送和组织工程中的应用。[0005]1.Pires,M.M.andJ.Chmielewski,Self_assemintomicroflorettesviametalcoordination.JournaloftheAmericanChemicalSociety,2009.131(7):p.2706_2712.[0006]2.Przybyla,D.E.andJ.Chmielewski,Metal_triggeredradialself_assemblyofcollagenpeptidefibers.JournaloftheAmericanChemicalSociety,2008.130(38):p.12610_12611.[0007]3.Pires,M.M.,D.Ernenwein,andJ.Chmielewski,SelectiveDecorationandReleaseofHis_taggedProteinsfromMetal_AssembledCollagenPeptideMicroflorettes.Biomacromolecules,2011.12(7):p.2429_2433.4[0008]4.Hsu,W.,Y.L.Chen,andJ.C.Horng,Promotingself_assemblyofcollagen_relatedpeptidesintovarioushigher_orderstructuresbymetal_histidinecoordination.LangmuirtheAcsJournalofSurfaces&Colloids,2012.28(6):p.3194_9.[0009]5.Pires,M.M.,etal.,Controllingthemorphologyofmetal_promotedhigherorderedassembliesofcollagenpeptideswithvariedcorelengths.LangmuirtheAcsJournalofSurfaces&Colloids,2012.28(4):p.1993_1997.[0010]6.Yoshizumi,A.,etal.,Self_associationofStreptococcuspyogenescollagen_likeconstructsintohigherorderstructures.ProteinScience,2009.18(6):p.1241_1251.[0011]7.Cosgriff_Hernandez,E.,etal.,BioactivehydrogelsbasedonDesignerCollagens.ActaBiomaterialia,2010.6(10):p.3969_3977.B_domain为多个重复的他位置的X或Y为组氨酸，通过控制胶原蛋白分子中B_domain氨基酸序列中His残基的个数[0021]本发明还提供包含所述的基因的重组质粒或宿主菌。所述质粒包括但不限于：[0022]在一个实施方式中，所述宿主菌为大肠杆菌，包括但不限于E.coliBL21、E.[0023]本发明还提供所述胶原蛋白或所述的基因或所述的质粒或宿主菌在以下任一项5表达的胶原蛋白中B_domain氨基酸序列中His残基的个数以及位置实现对胶原蛋白三维形[0039]图3为胶原蛋白聚集体的扫描电镜图a_c）B胶原蛋白聚集体的扫描电镜图d_6[0043]应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发7写为H2BH2见图5中a在B_domain中间插入额外的一个His得到H2BH2_H1。本实施例中B_[0058]（2）在序列N端插入来源于Scl2的球状结构域V_domain（氨基酸序列如SEQID域和胶原区域的固定序列单元中间插入蛋白酶切位点LVPR，在序列的N端插入6×His用于的氨基酸排布方式见图5中b。89碎片，再用0.45μm微孔滤膜过滤上清除杂质。将样品注入安装在蛋白纯化仪上的5mL温度递增速度为1℃/6min。典型的胶原蛋白三股螺旋结构CD谱图显示为225nm的正吸收[0066]如图2中c所示，全波长扫描下，实施例1所设计蛋白在220nm附近都有特征吸收[0068]将实施例1设计制备获得的胶原蛋白配制成浓度BH2为疏松多孔的网状交联结构，H2