JJF 2420-2026 荧光酶标分析仪校准规范

中华人民共和国国家计量技术规范JJF2420—2026荧光酶标分析仪校准规范CalibrationSpecificationforMicroplateFluorescenceAnalyzers2026‑06‑25发布2026‑12‑25实施国家市场监督管理总局发布JJF2420—2026荧光酶标分析仪校准规范CalibrationSpecificationforMicroplateFluorescenceAnalyzers归口单位：全国生物计量技术委员会主要起草单位：中国计量科学研究院广东省计量科学研究院南京市计量监督检测院参加起草单位：江苏省计量科学研究院（江苏省能源计量数据中心）上海市计量测试技术研究院有限公司上海市质量监督检验技术研究院黑龙江省计量检定测试研究院本规范委托全国生物计量技术委员会负责解释JJF2420—2026

本规范主要起草人：刘亚辉（中国计量科学研究院）黄彦捷（广东省计量科学研究院）陈鸿飞（南京市计量监督检测院）参加起草人：崔宏恩［江苏省计量科学研究院（江苏省能源计量数据中心刘刚（上海市计量测试技术研究院有限公司）蒲玲（上海市质量监督检验技术研究院）周彤（黑龙江省计量检定测试研究院）JJF2420—2026Ⅰ引言 (Ⅱ)1范围 2引用文件 3概述 4计量特性 5校准条件 5.1环境条件 5.2测量标准及其他设备 6校准项目和校准方法 6.1激发波长示值误差 6.2发射波长示值误差 6.3线性 6.4重复性 6.5检出限 7校准结果表达 7.1校准结果处理 7.2校准结果的测量不确定度 8复校时间间隔 附录A校准原始记录格式（推荐性表格） 附录B校准证书（内页）格式（推荐性表格） 附录C测量不确定度评定示例 JJF2420—2026ⅡJJF1059.1《测量不确定度评定与表示》共同构成支撑本规范制定工作的基础性系列规范。本规范的校准方法及计量特性等主要参考了JJG537—2006《荧光分光光度计检定本规范为首次发布。JJF2420—20261荧光酶标分析仪校准规范本规范适用于各类板式荧光酶标分析仪、多功能酶标分析仪中荧光分析模块（不包含时间分辨荧光分析模块）的校准。2引用文件本规范引用了下列文件：JJG537—2006荧光分光光度计检定规程GB/T32267—2015分析仪器性能测定术语凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本规范；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本规范。3概述荧光酶标分析仪是利用酶标记抗体等方式，进行免疫分析后，将没有荧光活性的底物经过酶催化转化成具有荧光活性的标记物，在合适波长的激发光作用下发出荧光，其荧光强度与被分析物的含量相关，通过检测荧光强度分析待测物的仪器。荧光酶标分析仪一般由微孔板支架、温控装置、分光装置、光子检测装置、电源部分、计算机及软件组成。仪器采用光电倍增管（PMT）检测单光子信号，传输至放大器并经过模数转换后传输给计算机，通过计算得出检测结果。4计量特性荧光酶标分析仪各项计量性能指标见表1。表1荧光酶标分析仪的主要计量特性指标计量特性计量特性指标激发波长示值误差±5nm发射波长示值误差±5nm线性r≥0.990重复性≤8%检出限——注：1激发光波长和发射光波长示值误差的计量特性指标也可参照厂商给出的技术要求。2r为线性相关系数。3以上技术指标仅供参考，不做符合性判定。JJF2420—202625校准条件5.1环境条件5.1.1环境温度10~30）℃。5.1.2相对湿度：≤85%。注：若制造商为设备规定了工作温、湿度范围，选择在制造商规定的温、湿度范围内试验。5.2测量标准及其他设备5.2.1荧光标准溶液根据仪器的荧光通道类型，选择具有合适发射和激发波长的荧光物质（硫酸奎宁、荧光素、罗丹明等配制为合适浓度的荧光标准溶液。5.2.2荧光酶标分析仪计量校准板测量范围为1%~100%，扩展不确定度不大于5%（k=2输出光谱峰值波长范板，最大允许误差±1nm。5.2.3光纤光谱仪测量范围（200~800）nm，最大允许误差为±1nm。5.2.4标准汞灯测量范围（250~700）nm，最大允许误差为±1nm。5.2.5板式光谱仪波长测量范围（400~800）nm，最大允许误差±1nm。5.2.6板式荧光模拟器输出光谱峰值波长范围（450~650）nm，最大允许误差±1nm，光亮度输出通道可调节范围为10%~100%。注：可根据实际情况配备荧光酶标分析仪计量校准板、光纤光谱仪、标准汞灯、板式光谱仪、板式荧光模拟器中的一种或多种标准器。6校准项目和校准方法6.1激发波长示值误差6.1.1滤光片式荧光酶标分析仪将滤光片从仪器激发光路侧卸下，放置在检测光路中，在光纤光谱仪上选择透射比扫描模式，从低于滤光片标称波长20nm处开始扫描，至高于滤光片标称波长20nm处为止，通过软件读出峰值波长wex,i，重复3次取其平均值，根据式（1）计算激发波长示值误差。6.1.2光栅式荧光酶标分析仪选择合适的光纤及接头，连接激发光路与光纤光谱仪，或将光纤接在开孔的酶标板上，从酶标分析仪控制软件上设置所需校准的激发波长，在光纤光谱仪上选择光谱JJF2420—20263扫描模式，从低于设定激发波长20nm处开始扫描，至高于设定激发波长20nm处为止，通过软件读出峰值波长wex,i，重复3次取其平均值，根据式（1）计算激发波长示值误差。6.1.3不可拆卸荧光酶标分析仪将板式光谱仪置于微孔板架上，从酶标分析仪控制软件上设置所需校准的激发波长，从低于设定激发波长20nm处开始扫描，至高于设定激发波长20nm处为止，通过板式光谱仪的软件读出峰值波长wex,i，重复3次取其平均值，根据式（1）计算激发波长示值误差。式中：∆wex——激发波长示值误差，nm；wex——激发波长滤光片标称值或激发波长设定值，nm；wex,i——激发波长滤光片峰值波长测量值或激发光谱峰值波长测量值，nm。6.2发射波长示值误差6.2.1滤光片式荧光酶标分析仪将滤光片从仪器发射光路侧卸下，放置在检测光路中，在光纤光谱仪上选择透射比扫描模式，从低于滤光片标称波长20nm处开始扫描，至高于滤光片标称波长20nm处为止，通过软件读出峰值波长wem,i，重复3次取其平均值，根据式（2）计算发射波长示值误差。式中：∆wem——发射波长示值误差，nm；wem——发射波长滤光片标称值或设定值，nm；wem,i——发射波长滤光片峰值波长测量值，nm。6.2.2光栅式荧光酶标分析仪选择合适的光纤及接头连接低压汞灯标准光源（或计量标准板）与荧光酶标分析仪的发射光路，打开低压汞灯（或计量标准板）至稳定，在校准点附近选择低压汞灯（或计量标准板）的一条或几条特征谱线。在荧光酶标分析仪上选择发射光谱扫描模式，从低于汞灯标准波长（或计量标准板）20nm处开始扫描，至高于汞灯标准波长（或计量标准板）20nm处为止，通过软件读出峰值波长wem,i，重复3次取其平均值，根据式（3）计算发射波长示值误差。6.2.3不可拆卸荧光酶标分析仪将板式荧光模拟器置于微孔板架上，控制其输出特定波长的标准光源。在荧光酶标分析仪上选择发射光谱扫描模式，从低于标准波长20nm处开始扫描，至高于标准JJF2420—20264波长20nm处为止，通过软件读出峰值波长wem,i，重复3次取其平均值，根据式（3）计算发射波长示值误差。式中：Δwem——发射波长示值误差，nm；wem,s——荧光酶标分析仪计量标准板波长标准值或标准汞灯值，nm；wem,i——标准波长测量值，nm。6.3线性6.3.1使用荧光标准溶液测量配制至少5个浓度的标准溶液，浓度范围满足日常测量需要的线性区间。每个浓式（4）计算相关系数r。6.3.2使用其他标准器测量将板式荧光模拟器或计量校准板等标准器置于微孔板架上，先设置其标准光源的工作波长，然后分别设定其亮度为10%、20%、40%、80%、100%（如果设定亮度超过荧光酶标分析仪的测量量程，可适当调整光源亮度用荧光酶标分析仪测量板上中心区域校准孔荧光强度，每种亮度下重复测量3次，取其平均值。将测量结果的平均值与板式荧光模拟器或计量校准板等标准器的相对光强进行线性回归，按式（4）计算相关系数r。式中：r——线性相关系数；xi——标准溶液的浓度值（或板式荧光模拟器等光亮度百分比标称值——标准溶液的浓度值（或板式荧光模拟器等光亮度百分比标称值）的平均值；Fi——标准溶液（或板式荧光模拟器等）荧光强度的测量值；——标准溶液（或板式荧光模拟器等）荧光强度测量值的平均值；n——浓度水平（或荧光强度水平）的个数。6.4重复性在荧光板中心区域选择1个固定孔位，加入6.3线性标准溶液的中间浓度值标准溶液，加入的溶液体积为单孔容量的2/3。或将荧光酶标分析仪计量标准板、板式荧光模拟器置于微孔板架上，重复测量6次，根据式（5）计算相对标准偏差RSD，作为仪器重复性表征。JJF2420—20265式中：RSD——相对标准偏差，%；Fi——第i次荧光强度的测定值，cps或无量纲；_F——6次荧光强度测定结果平均值，cps或无量纲；i——测量序号。6.5检出限在荧光板中心区域选择10个孔内加入0.05mol/L硫酸溶液做空白溶液，另10个孔内加入等体积1×10-7g/mL硫酸奎宁标准溶液，加入的溶液体积为单孔容量的2/3。设置仪器激发波长350nm、发射波长450液的荧光强度和10个标准溶液的荧光出限。式中：_F——平均荧光强度，cps或无量纲；Fi1——i次检测标准溶液的荧光强度，cps或无量纲；Fi0——i次检测空白溶液的荧光强度，cps或无量纲；n——测量次数；s——单次测量的标准偏差，g/mL；DL——检出限，g/mL；c——标准溶液的浓度，g/mL。7校准结果表达7.1校准结果处理经校准后的荧光酶标分析仪应核发校准证书，校准证书应符合JJF1071—2010中5.12的要求，并给出各校准项目名称和测量结果以及扩展不确定度。校准原始记录格式（推荐性表格）见附录A，校准证书内页格式（推荐性表格）见附录B。7.2校准结果的测量不确定度荧光酶标分析仪校准结果的测量不确定度按JJF1059.1—2012的要求评定，校准JJF2420—20266结果测量不确定度评定示例见附录C。8复校时间间隔复校时间间隔的长短是由仪器的使用情况、使用者、仪器本身质量等诸因素所决定的，送校单位可根据实际使用情况自主决定复校时间间隔，建议不超过1年。JJF2420—20267附录A校准原始记录格式（推荐性表格）器具名称客户名称型号/规格客户地址出厂编号制造厂商环境温度℃相对湿度%校准日期校准地点校准员核验员校准依据测量标准及其他设备名称/型号编号测量范围不确定度或准确度等级或最大允许误差证书编号/有效期至溯源机构名称1.激发波长示值误差标称/设定值测量值测量平均值示值误差不确定度U，k=21232.发射波长示值误差标称/设定值测量值测量平均值示值误差不确定度U，k=2123JJF2420—20268（续）3.线性浓度测量值平均值线性相关系数1234.重复性样品123456平均值重复性5.检出限样品名称样品浓度No123456789Fi0Fi1Fi平均值标准偏差检出限不确定度U，k=2结果/说明：JJF2420—20269附录B校准证书（内页）格式（推荐性表格）序号校准项目校准结果不确定度1发射波长示值误差2激发波长示值误差3重复性/4线性/5检出限校准员：核验员：JJF2420—2026附录C测量不确定度评定示例C.1激发波长示值误差测量结果不确定度评定C.1.1测量方法对于采用滤光片式的荧光酶标分析仪，将滤光片从仪器上卸下，放置在光纤光谱仪的光路中，选择透射比扫描模式，从低于滤光片标称波长20nm处开始扫描，至高于滤光片标称波长20nm处为止，通过软件读出峰值波长wex,i，重复3次取其平均值，根据式（C.1）计算激发光波长示值误差。C.1.2测量模型式中：∆wex——激发波长示值误差，nm；wex——激发波长滤光片标称值或激发光波长设定值，nm；wex,i——激发波长滤光片峰值波长测量值或激发光谱峰值波长测量值，nm。C.1.3不确定度来源根据以上测量模型以及测量方法，其不确定度来源主要包括以下3个方面：a）测量重复性引入的标准不确定度u1；b）光纤光谱仪分辨力引入的标准不确定度u2；c）标准器具引入的标准不确定度u3。C.1.4测量不确定度评定C.1.4.1测量重复性引入的标准不确定度u1使用光纤光谱仪对标称350nm的激发光波长进行测量，连续测量3次，对重复测量结果进行分析，测量结果见表C.1。表C.1激发光波长示值误差测量结果nmwexwex,iex,i∆wex350348.2347.6348.9348.21.8则单次测量结果的标准偏差s为：实际测试时在重复性条件下连续测量3次，以3次测量的算术平均值作为结果，则由测量重复性引入的标准不确定度为：JJF2420—2026C.1.4.2光纤光谱仪分辨力引入的标准不确定度u2光纤光谱仪的分辨力为0.1nm，区间半宽为0.05nm，按均匀分布计算，由此引入的标准不确定度为：C.1.4.3标准器具引入的标准不确定度u3光纤光谱仪的最大允许误差为±1nm，按均匀分布计算，由此引入的标准不确定度为：C.1.5标准不确定度分量一览表标准不确定度一览表见表C.2。表C.2激发光波长示值误差测量结果标准不确定度一览表不确定度来源标准不确定度分量符号标准不确定度分量测量重复性10.444nm分辨力u20.029nm标准器具u30.577nmC.1.6合成标准不确定度uc由于各不确定度间不相关，则C.1.7扩展不确定度U取k=2，则U=k×uc≈1.5nmC.2发射波长示值误差测量结果不确定度评定C.2.1测量方法对于采用滤光片式的荧光酶标分析仪，将滤光片从仪器上卸下，放置在光纤光谱仪的光路中，选择透射比扫描模式，从低于滤光片标称波长20nm处开始扫描，至高于滤光片标称波长20nm处为止，通过软件读出峰值波长wem,i，重复3次取其平均值，根据式（C.2）计算发射光波长示值误差。C.2.2测量模型式中：∆wem——发射波长示值误差，nm；JJF2420—202612wem——发射波长滤光片标称值，nm；wem,i——发射波长滤光片峰值波长测量值，nm。C.2.3不确定度来源根据以上测量模型以及测量方法，其不确定度来源主要包括以下3个方面：a）测量重复性引入的标准不确定度u1；b）光纤光谱仪分辨力引入的标准不确定度u2；c）标准器具引入的标准不确定度u3。C.2.4测量不确定度评定C.2.4.1测量重复性引入的标准不确定度u1使用光纤光谱仪对标称553nm的发射光波长进行测量，连续测量3次，对重复测量结果进行分析，测量结果见表C.3。表C.3发射光波长示值误差测量结果nmwemwem,iem,i∆wem553555.6557.2556.7556.5-3.5则单次测量结果的标准偏差s为：实际测试时在重复性条件下连续测量3次，以3次测量的算术平均值作为结果，则由测量重复性引入的标准不确定度为：C.2.4.2光纤光谱仪分辨力引入的标准不确定度u2光纤光谱仪的分辨力为0.1nm，区间半宽为0.05nm，按均匀分布计算，由此引入的标准不确定度为：C.2.4.3标准器具引入的标准不确定度u3光纤光谱仪的最大允许误差为±1nm，按均匀分布计算，由此引入的标准不确定度为：C.2.5标准不确定度分量一览表标准不确定度一览表见表C.4。JJF2420—2026表C.4发射光波长示值误差测量结果标准不确定度一览表不确定度来源标准不确定度符号标准不确定度测量重复性10.547nm分辨力u20.029nm标准器具u30.577nmC.2.6合成标准不确定度uc由于各不确定度间不相关，则C.2.7扩展不确定度U取k=2，则U=k×uc≈1.6nmC.3检出限不确定度评定C.3.1测量方法在96孔板中选10个孔加入200μL的0.05mol/L硫酸溶液作空白，另选10个孔加入200μL的1×10-7g/mL硫酸奎宁溶液，计算出10个荧光强度，计算公式为：Fi=Fi1-Fi0式中：Fi1——标准溶液的荧光强度；Fi0——空白溶液的荧光强度。-使用10个荧光强度的数值计算出平均值F、标准偏差s和检出限。C.3.2测量模型式中：DL——检出限的测量结果，g/mL；c——标准溶液的质量浓度，g/mL；s——10次荧光强度测量值的标准偏差；_F——10个荧光强度测量值的平均值。C.3.3不确定度来源根据测量模型，检出限的不确定度将取决于荧光强度测量值、荧光强度测量值的标准偏差以及硫酸奎宁的质量浓度引起的不确定度。C.3.4测量不确定度评定_C.3.4.1荧光强度测量值相对标准不确定度urel(F)与荧光强度测量值的标准偏差的相对标准不确定度urel(s)的评定输出量F和s的标准不确定度u(F)和u(s)的来源，主要是由被测仪器读数的不稳JJF2420—2026定性引起的。使用浓度为0.05mol/L硫酸溶液和1×10-7g/mL硫酸奎宁标准溶液。测量数据见表C.5。表C.5检出限测量结果No123456789Fi027242421Fi12101203720622278206720242027205720862203Fi2074201820382265205420132003203620702184平均值F2075.50标准偏差s84.07检出限8.1×10-9g/mL计算得：≈23.57%C.3.4.2硫酸奎宁的质量浓度引起的相对不确定度urel(c)的评定仪器检出限的检定中，采用的硫酸奎宁质量浓度为1×10-7g/mL。标准溶液配制过程为先准确称取5mg硫酸奎宁固体标准物质，溶解并定容至500mL容量瓶中，得到浓度为1×10-5g/mL硫酸奎宁标准溶液，再将该溶液稀释得到所需浓度的标准溶液。具体配制方法见表C.6。表C.6硫酸奎宁标准溶液配制比例表欲配标准溶液所取标准母液质量浓度/（g/mL）配制体积/mL质量浓度/（g/mL）移液体积/mL1×10-62501×10-5251×10-7100