下呼吸道感染细菌培养操作指南

操作指南下呼吸道感染细菌培养操作指南标本·培养·鉴定·药敏2026年操作指南导览01标本采集与送检合格标本的采集规范与拒收标准02培养与分离接种方法、培养条件与菌落观察03鉴定与药敏菌种鉴定路径与药敏试验操作04结果报告与质控报告规范与室内质量控制SECTION标本采集与送检标本质量决定培养结果规范采集，是准确培养的第一步微生物标本采集规范01标本采集是培养第一关下呼吸道感染的病原学诊断，始于一份合格标本。标本不合格，后续培养与药敏均无从谈起。常见标本类型痰液气管内吸出物支气管肺泡灌洗液防污染毛刷标本胸水肺组织活检采集总原则采集时机应尽可能在

抗菌药物使用前，以降低药物对病原菌的抑制优先选择能真实反映感染部位的下呼吸道标本，避免上呼吸道分泌物混入每份标本应标注采集时间、部位与检验目的，便于实验室判断痰标本规范采集方法痰标本易受口咽部定植菌污染，采集方法直接决定结果价值。规范采集五步骤，杜绝口咽部定植菌污染，确保结果价值不推荐留取

24小时痰，久置会导致杂菌过度生长。1漱口准备采集前用清水漱口，取下义齿，减少口腔杂菌2晨起深咳晨起采集为宜，嘱患者深咳，咳出气管深部分泌物3选准部位优先留取脓性、血性部分，避免唾液与鼻咽分泌物4规范容器置于无菌广口容器，标本量以能完成涂片与培养为准5诱导排痰一次咳痰困难者，可雾化吸入高渗盐水诱导排痰支气管镜下标本采集对重症、免疫抑制或痰标本难以合格者，支气管镜下采样更具诊断价值。支气管肺泡灌洗液经支气管镜注入无菌生理盐水并回收，反映肺泡水平感染回收液应记录总量与回收比例，及时送检防污染毛刷标本经套管毛刷采样，可有效减少口咽部菌群污染标本量极少，须立即送检并注明采集方式其他标本胸水与肺组织活检标本，应分别送需氧、厌氧培养无菌操作标本运送与保存要求送达时限与保存温度，直接影响病原菌的检出率。标本从采集到接种的每一步，都在影响最终结果的真实性。尽快送检标本采集后应尽快送检，室温条件下尽量在两小时内送达实验室室温保存不能及时送检的标本，一般室温保存，避免剧烈震荡不宜冷藏痰标本不宜冷藏，低温会影响肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等苛养菌存活保温优先脑脊液等无菌部位标本，应保温送检并优先处理密闭防漏运送过程使用密闭容器，防止泄漏与交叉污染标本拒收与质量评估拒收情形与处理方式对照拒收情形处理方式涂片见大量鳞状上皮细胞退回重采标本外观为唾液或口水退回重采容器破损、渗漏或污染拒收未标注或标注信息不清拒收标本干涸或量明显过少视情况拒收合格镜检标准鳞状上皮细胞

每低倍视野少于10个，多形核白细胞每低倍视野多于

25个。📋拒收时应及时与临床沟通并记录。SECTION培养与分离规范接种，精准分离培养条件与菌落观察决定后续鉴定方向02标本前处理与均质化黏稠的痰标本需经前处理，才能获得可靠的半定量结果。标本前处理是获得可靠半定量结果的基础保障。前处理的规范化程度，直接关系到后续菌落的可判读性。均质化处理要点5项均质化处理痰标本可直接接种，也可经均质化处理后进行消化液作用均质化常用胰酶或二硫苏糖醇等消化液，作用是液化黏液、释放被包裹的细菌时间浓度把控消化时间与浓度应严格把控，过度消化会损伤苛养菌生物安全柜处理过程须在生物安全柜内完成，减少气溶胶产生及时接种处理后的标本应及时接种，避免长时间放置培养基选择与接种方法分区合理、划线均匀，才能获得单菌落。合适的培养基组合，是覆盖目标病原谱的前提。常用培养基5类血平板观察溶血、菌落形态，支持多数细菌生长巧克力平板分离流感嗜血杆菌、脑膜炎奈瑟菌等苛养菌麦康凯/中国蓝平板选择性分离革兰阴性杆菌厌氧血平板用于厌氧菌分离真菌培养基免疫抑制或长期抗菌治疗者适用接接种方法分区划线法实现菌落的分离与纯化定量/半定量接种环便于对菌量分级估计培养条件与环境控制培养环境决定哪些病原菌能够被成功分离。常规需氧培养需氧环境培养温度

35℃±1℃，培养

18–24小时。苛养菌培养富二氧化碳二氧化碳环境，提高

肺炎链球菌、流感嗜血杆菌

检出率。厌氧培养无氧环境厌氧罐或厌氧工作站，接种后

尽快

置入。真菌培养低温孵育适当

延长培养时间，一般培养至数日。菌落观察与半定量报告痰标本的价值，在于判断哪一株菌是真正的致病菌。观察要点3项形态特征记录记录菌落大小、形态、颜色、透明度、溶血特征分类计数区分不同形态菌落，分别计数并记录初步判类别结合革兰染色结果，初步判断细菌类别半定量分级2项菌量分级按分区生长情况，将菌量分为少量、中等、大量等级别判断优势菌结合涂片镜检中白细胞吞噬现象，判断优势菌半定量结果与涂片结果相互印证，才能避免把定植菌误判为致病菌。分离纯化与初筛试验从混合菌落中挑出目标菌，是通向准确鉴定的关键一步。1挑取优势菌落挑取优势菌落或形态特征明确的单个菌落2转种纯化转种血平板进行纯化，获得纯培养后用于鉴定与药敏3革兰染色镜检观察菌体形态与染色属性4初筛试验触酶、氧化酶试验初步区分菌属5标记保存纯培养菌株应做好标记并妥善保存挑菌时须严格

无菌操作，避免引入污染。初筛结果可缩小鉴定范围，减少后续鉴定工作的盲目性。SECTION鉴定与药敏鉴定到种，药敏到点准确鉴定是合理用药的前提微生物鉴定与药敏试验03菌种鉴定技术路径获得纯培养后，需将病原菌鉴定至种属水平。鉴定方法的选择，应结合实验室条件与临床需求综合判断。传统生化鉴定2项生化反应特征依据糖发酵、酶活性等生化反应特征进行鉴定适用对象适用于常规细菌的种属确认自动化与质谱技术2项自动化鉴定系统可缩短鉴定周期、提高标准化程度质谱技术基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术，鉴定速度快、准确度高分子检测1项核酸检测可用于难以培养或生长缓慢的病原体常见病原菌的识别要点下呼吸道感染病原谱具有一定规律，识别典型特征是判读基础。肺炎链球菌革兰阳性·矛头状·α溶血革兰阳性矛头状双球菌，菌落周围可见溶血。流感嗜血杆菌革兰阴性·球杆菌·需ⅩⅤ因子革兰阴性球杆菌，依赖巧克力平板与二氧化碳环境。金黄色葡萄球菌革兰阳性·葡萄串·触酶阳性革兰阳性葡萄串状排列，菌落呈金黄色、触酶阳性。铜绿假单胞菌革兰阴性·氧化酶阳性·特殊气味革兰阴性杆菌，氧化酶阳性，可有特殊气味与色素。药敏试验方法选择方法选择应与菌种特性、临床需求及报告形式相匹配。药敏试验结果，是临床制定抗感染方案的重要依据。01方法一纸片扩散法操作简便、成本较低，通过抑菌圈直径判读结果。适用于多数临床常见细菌。02方法二稀释法微量肉汤稀释法可测定最低抑菌浓度，结果更为定量。主要用于需要精确数值或特殊耐药判断的场景。03方法三其他方法浓度梯度法兼具扩散与稀释特点，便于测定最低抑菌浓度。自动化药敏系统可提升标准化程度与报告效率。药敏结果判读标准药敏结果不是简单的数值，而是需要标准支撑的判断。三类判读结果敏感·中介·耐药结果按三类标准判定敏感常规剂量下多可获临床疗效中介需加大剂量或在药物浓集部位才可能奏效耐药常规剂量下不宜选用该药标准与可追溯性报告应给出所采用的折点标准版本，便于追溯。判读标准的统一，是实验室间结果可比的前提。特殊耐药表型检测对重点耐药表型的筛查与报告，直接关系到临床用药安全。对重点耐药表型的筛查与报告，直接关系临床用药安全。对特殊耐药表型，报告时应附加必要的提示信息，协助临床调整用药。产超广谱酶菌株多见于肠杆菌科细菌需按标准筛查并提示头孢菌素酶型耐药部分菌株可诱导产生需注意报告策略耐甲氧西林金黄色葡萄球菌应明确报告耐药属性碳青霉烯类耐药菌株应高度关注并提示临床诱导型克林霉素耐药需按规范进行诱导试验药敏试验质量控制药敏结果的可靠性，建立在全过程质量控制之上。接种菌悬液浓度标定接种量一致浓度统一标定，保证接种量一致培养基厚度pH批号厚度、pH与批号合格，做好使用记录药敏纸片与药敏板贮存规范防潮防失效按要求贮存，防止受潮与失效标准菌株定期质控定期质控，结果须在允许范围内对照与复查设置对照复查分析每次试验设置对照，异常结果及时复查并分析原因SECTION结果报告与质控报告规范，质控护航让每一份报告经得起复核微生物标本采集规范04培养结果报告规范“一份规范的报告，应让临床一眼看清关键信息。”报告应包含标本类型、采集信息与检验日期报告用语应规范统一，避免含糊描述涂片结果菌体形态镜下观察菌体形态染色属性明确染色属性白细胞情况报告白细胞情况培养结果病原菌名称报告分离出的病原菌名称半定量菌量报告半定量菌量药敏结果所测药物报告所测药物判读类别对应判读类别阴性报告培养时间注明培养时间未生长情况注明未生长情况避免误判避免临床误判药敏报告的临床解读药敏报告不是把检测药物全部列出，而是

有选择地传递信息。必要时由检验人员与临床沟通，说明结果含义报告的价值，在于帮助临床做出合理判断，而非罗列数据常用优先报告临床常用且与疗效相关的药物天然耐药不列细菌天然耐药的药物，一般不列入报告同类选代表同类药物中可预测结果的，选代表性药物报告特殊耐药提示发现特殊耐药表型时，应在报告中附加提示危急值报告制度部分培养结果具有时间敏感性，必须第一时间通知临床。危急值报告要求快而准确无菌部位阳性血液、脑脊液等无菌部位标本培养阳性，应立即报告紧急形态涂片发现特殊形态或高度提示严重感染的病原体，应紧急沟通报告内容包括标本信息、初步结果与报告时间接收留痕接收方姓名与反馈情况应完整记录，做到可追溯补充报告后续鉴定与药敏结果补充报告时，应注明与初步结果的关系室内质量控制要点“质量控制贯穿标本接收、培养、鉴定与报告全过程。”各类记录应完整、清晰、可追溯，便于复核与改进。发现质控失控时，应暂停相关检测，分析原因并纠正后方可恢复。培养基4项无菌试验生长试验外观检查记录记录批号与有效期试剂与染色液2项标准菌株验证定期用标准菌株验证失效期关注失效期仪器设备3项恒温培养箱生物安全柜校准与维护按期校准与维护鉴定与药敏系统2项周期开展质控按周期开展质控留存结果留存结果生物安全与废弃物处理标本与培养物均具有潜在感染性，生物安全不可松懈